PRÀCTICA 6: PREPARACIÓ DELS CROMOSOMES POLITÈNICS DE DROSOPHILA BUZZATII. MAPES CITOLÒGICS I OBSERVACIÓ D’INVERSIONS PARACÈNTRIQUES

CROMOSOMES POLITÈNICS Què són? Són cromosomes gegants, constituïts per moltes còpies de DNA paral·leles a la cromàtide inicial. A on es troben? En alguns teixits de larves de dípters (ex. Drosophila): glàndules salivals, epiteli intestinal, tubs de Malpighi, etc. Protozous, insectes, mamífers, plantes…

CROMOSOMES POLITÈNICS Només es duplica l’Eucromatina Perquè apareixen? És una estratègia que utilitza l’organisme per produir gran quantitat d’una substància. Ex. CP en glàndules salivals de Drosophila: estadi ràpid creixement Larva substància queratinosa  fabricar la pupa (glàndules salivals) Mateixos cromosomes  nº gens  més producte Només es duplica l’Eucromatina

CROMOSOMES POLITÈNICS Com es formen? Endoreplicació / Endomitosi D.Buzzatii 10 rondes (gl. Salivals) Nº cromàtides: 2 cromosomes homòlegs 1ª ronda de replicació 2ª ronda de replicació 3ª ronda de replicació 4ª ronda de replicació 4 8 16 32 etc. 1CP 2

CROMOCENTRE

CROMOSOMES POLITÈNICS Interfase (poc condensats i en síntesi)  tamany Elevat nivell d’activitat transcripcional Bandes i interbandes

CROMOSOMES POLITÈNICS TELÒMER CENTRÒMER Extrems - Bandes/ Interbandes - Engruiximents/ Constriccions

CROMOSOMES POLITÈNICS Perquè pot ser útil el seu estudi? Localització de gens Detectar activitat transcripcional Polimorfismes cromosòmics L’alteració estructural més freqüent a Drosophila és la inversió d’un fragment cromosòmic. A B C D E F C A B E D C F G

OBJECTIUS Obtenir preparacions de cromosomes politènics (CP) (sessió 1) Determinar els diferents elements del cariotip i reconèixer les diferents ordenacions presents en poblacions de D.buzzatii (sessió 2)

SESSIÓ 1: OBTENCIÓ DE CP Drosophila buzzatii Cromosomes : 2n = 12 sexual, II, III, IV, V, VI Glàndules salivals de larves de 3r estadi Identificació: - larves més grans - espiracles ataronjats - moviment (no pupant)

SESSIÓ 1: OBTENCIÓ DE CP Sol. dissecció

SESSIÓ 1: OBTENCIÓ DE CP mandíbules glàndules salivars espiracles tràquea intestí anus gonada

SESSIÓ 1: OBTENCIÓ DE CP orceïna 30 minuts

SESSIÓ 1: OBTENCIÓ DE CP + cubre “squash” microscopi 100X

SESSIÓ 2: IDENTIFICACIÓ CP de D.buzzatii TELÒMER CENTRÒMER Banda clara Puff

SESSIÓ 2: IDENTIFICACIÓ CP de D.buzzatii Cromosoma II (St)

SESSIÓ 2: IDENTIFICACIÓ CP de D.buzzatii

IDENTIFICACIÓ CROMOSOMES 4 3 5 X 5 2 Pag. 55 guió. Figura 3. 6

CROMOSOMA 2 j st st/j