8.2.1 CROMATOGRAFÍA DE LÍQUIDOS Método físico de separación • La muestra se distribuye entre dos fases – Fase estacionaria: sólido o líquido – Fase móvil: líquido o mezcla de líquidos

Cromatografía Es el método físico de separación para la caracterización de mezclas complejas Su objetivo es separar los distintos componentes de una mezcla Existen dos fases la fase móvil y la fase estacionaria

Fase móvil La fase móvil es un fluido Liquido Gas Fluido supercrítico Fase estacionaria La fase estacionaria tiene un cociente(Área superficial/Volumen) muy elevado Solido Liquido

Cromatografía de líquidos (C.L.) Permite separar físicamente los componentes de muestras liquidas mediante el uso de una fase liquida y una fase estacionaria. La fase móvil generalmente es un liquido y la fase estacionaria un solido como alúmina o gel de sílice.

ELUCIÓN La muestra se aplica al principio de la columna como una banda fina El eluyente tiene menor afinidad por la fase estacionaria que los solutos Los solutos avanzan por el sistema a velocidades diferentes, menores a la de la fase móvil Los solutos se separan en bandas que eluyen al final de la columna

La separación cromatografía en HPLC es el resultado de las interacciones específicas entre las moléculas de la muestra en ambas fases, móvil y estacionaria Métodos de cromatografía liquida:

Aplicaciones Campos de Aplicación de HPLC Fármacos: Antibióticos, sedantes esteroides, analgésicos Bioquímica: Aminoácidos, proteínas, carbohidratos, lípidos Productos de alimentación: Edulcorantes artificiales, antioxidantes, aflatoxinas, aditivos Productos de la industria química: Aromáticos condensados, tensoactivos, propulsores, colorantes Contaminantes: fenoles, Pesticidas, herbicidas, PCB Química forense: Drogas, venenos, alcohol en sangre, narcóticos Medicina clínica: Ácidos biliares, metabolitos de drogas, extractos de orina, estrógenos. Algunas aplicaciones importantes de la HPLC preparativa Separación y purificación de metabolitos

8.2.2 Cromatografía de gases Para esta técnica se utiliza un cromatografía de gases el cual volatiliza e inyecta los gases dentro de una columna. La fase móvil esta formada por gas inerte. Existen dos tipos: gas solido y gas liquido.

Se opera en columna Se trabaja por elución Separa Mezclas complejas(poder de separación) Solutos muy parecidos(resolución) Es rápida (minutos) Usa poca muestra Utiliza instrumentación especial Proporciona información cualitativa y cuantitativa

La elución se produce por el flujo de una fase móvil de gas inerte La elución se produce por el flujo de una fase móvil de gas inerte. A diferencia de los otros tipos de cromatografía, la fase móvil no interactúa con las moléculas del analito; su única función es la de transportar el analito a través de la columna.

El gas portador cumple básicamente dos propósitos: Transportar los componentes de la muestra, y crear una matriz adecuada para el detector. Un gas portador debe reunir ciertas condiciones: -Debe ser inerte para evitar interacciones (tanto con la muestra como con la fase estacionaria) -Debe ser capaz de minimizar la difusión gaseosa -Fácilmente disponible y puro -Económico -Adecuado al detector a utilizar

Aplicaciones Medioambientales: Análisis de pesticidas y herbicidas, análisis de hidrocarburos, semivolátiles y volátiles, análisis del aire... Alimentos y aromas: fragancias y aromas, aceites, bebidas, ácidos orgánicos, azúcares, FAMES, ésteres metílicos, triglicéridos, alcoholes... Química Industrial: alcoholes, ácidos orgánicos, aminas,aldehídos y cetonas, ésteres y glicoles, hidrocarburos, disolventes, anilinas, gases inorgánicos... Biociencia: drogas, fármacos, alcoholes y contaminantes en sangre, disolventes residuales... Derivadas del petróleo: gas natural, gases permanentes, gas derefinería, gasolinas, gasóleos, parafinas...