CROMATOGRAFÍA repaso.  Conceptos generales Origen, definición, objetivos, tipo de fases.  Clasificación Según naturaleza de las fases y métodos de separación.

Presentación del tema: "CROMATOGRAFÍA repaso.  Conceptos generales Origen, definición, objetivos, tipo de fases.  Clasificación Según naturaleza de las fases y métodos de separación."— Transcripción de la presentación:

1 CROMATOGRAFÍA repaso

2  Conceptos generales Origen, definición, objetivos, tipo de fases.  Clasificación Según naturaleza de las fases y métodos de separación. Según disposición física de la FE. Según la dirección de movimiento de la FM.

3 Cromatograma con picos no resueltos Mejora por aumento en separación de bandas Mejora por disminución del ancho de bandas Problema cromatográfico

4 Optimización de la columna aumentar la separación entre bandas:  t R Modificar variables termodinámicas disminuir el ancho de bandas Modificar variables cinéticas

5 SEÑAL DETECTOR t R TIEMPO t´ R Cromatograma compuesto no retenido por FE analito t M

6 Factor de separación (factor de selectividad) Factor de retención (factor de capacidad)  = kBkB kAkA k = nEnE nMnM Constante de reparto K = CECE CMCM Constantes termodinámicas t R - t M tMtM = t R = t M (1 + k) t R = t M (1 + K V E /V M )

7 señal detector tiempo   W= 4  punto de inflexión Ancho de banda

8 N = 16 (t R / W) 2 H =  2  /L N = L /H Ancho de banda

9 Ecuación relacionada con la eficiencia H = A + B/  + C E  + C M  Ecuación de Van Deemter modificada resistencia a transferencia de masa desde y hacia la FE resistencia a transferencia de masa dentro de la FM difusión en remolino difusión longitudinal

10  H H mínimo  óptimo A B/  CECE CMCM H = A + B/  + C E  + C M  Ecuación de Van Deemter modificada

11 Resolución 2  t r (W(W A + W B ) R = k B R = 1+ k B   4 N R > 1.5

12 Información del cromatograma 1) Posición de la banda (t R ): función de constantes termodinámicas 2) Ancho de la banda (N, H): función de parámetros cinéticos En conclusión:

13 Optimización de la columna aumentar la separación entre bandas (  t R ) Modificar variables termodinámicas (K, k y  ) modificando FM, FE y temperatura disminuir el ancho de bandas Modificar variables que permiten ↓H y ↑N (ecuación van Deemter modificada)

14 FASE ESTACIONARIA MÉTODOINTERACCIÓN Líquida convencional y fase ligada RepartoSolubilidad (ver fase normal/reversa) SólidaAdsorción Fuerzas de van der Walls, puente hidrógeno Resina intercambiadora Intercambio iónico Fuerzas electrostáticas Gel poroso Exclusión molecular Tamizado Soporte con ligando unido AfinidadReacción específica CROMATOGRAFÍA DE LÍQUIDOS

15  Naturaleza de las fases (FM y FE)  Descripción de la FE  Ejemplos de fases utilizadas  Fundamento de separación  Fuerzas involucradas  Serie eluotrópica de solventes (parámetros involucrados)  Ejemplos de aplicaciones

16 Cromatografía líquida de alta eficiencia HPLC  Características, ventajas y desventajas.  Esquema del equipo de HPLC y descripción de cada una de sus partes (solventes, bomba, inyección, pre- columna, columna, rellenos, detectores)

17  Elución isocrática, elución con gradiente  Eficiencia de la columna en HPLC Cromatografía líquida de alta eficiencia HPLC

18 Cromatografía de gases  Características, ventajas y desventajas.  Tipos de fases e interacciones  Esquema de cromatógrafo de gases y descripción de cada una de sus partes (gas portador, reguladores presión y caudal, inyección, horno, tipo de columnas y sus características).

19 Cromatografía de gases  Elución isotérmica vs. gradiente de temperatura.  Detectores (conductividad térmica, ionización de llama, captura electrónica).