CROMATOGRAFÍA CHICHILLA BAUTISTA KELLY DAZA PADILLA EMERSON MARTINEZ OSPINO MIVIAN RODRIGUEZ HERNANDEZ YANDER.

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1 CROMATOGRAFÍA CHICHILLA BAUTISTA KELLY DAZA PADILLA EMERSON MARTINEZ OSPINO MIVIAN RODRIGUEZ HERNANDEZ YANDER

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4 CROMATOGRAFIA Sistema Cromatográfico: Fase Móvil Fase Estacionaria solutos Uno o más

5 Las separaciones se basan en las diferencias de velocidad de migración entre los componentes de la muestra, debidas a interacciones con las fases, una estacionaria y otra móvil

6 Clasificación de las técnicas cromatográficas: 1) Clasificación de acuerdo al mecanismo de separación 2) Clasificación de acuerdo al estado físico de las fases 3) Clasificación de acuerdo al lecho cromatográfico

7 Proceso físico - químico que rige la separación: Adsorción: El soluto se adsorbe en la superficie de las partículas sólidas de la fase estacionaria. Es un fenómeno superficial, aumentado con la formación de puentes de hidrógeno. Partición o Reparto: El soluto se equilibra entre el líquido de la fase estacionaria y la fase móvil, por diferencia de solubilidad. Hasta llegar a un equilibrio. 1) Clasificación de acuerdo al mecanismo de separación

8 - Intercambio Iónico: Los aniones o cationes se unen a la fase estacionaria sólida por fuerzas iónicas - Exclusión Molecular, Filtración o Permeación en Gel: No existen interacciones entre la fase estacionaria y el soluto. Se separa por tamaño de partícula.

9 2) Clasificación de acuerdo al estado físico de las fases: Tipo de fase estacionaria Sólido: finamente dividido en un tubo de vidrio o metal líquido inmiscible con la fase móvil. Se emplean distintos procedimientos para fijar la fase estacionaria líquida. Tipo de fase móvil Gas líquido

10 Adsorción Fase estacionaria: sólido (Sílica o alúmina)

11 Partición La separación se basa en la solubilidad relativa del soluto entre dos fases líquidas. Se utiliza gel de sílice que absorbe agua fuertemente. La fase estacionaria es el agua.

12 Intercambio iónico La fase estacionaria (resina) tiene su superficie con carga opuesta a la del soluto que se quiere retener.

13 Exclusión por tamaño (gel permeation) La separación se basa en el tamaño molecular. La fase estacionaria es un material de tamaño de poro controlado.

14 Afinidad Sólo es retenida la molécula afín a las unidas covalentemente a la fase estacionaria.

15 Fase Estacionaria: Partición: La fase estacionaria es líquida, sobre un soporte sólido inerte. 1 - Común (Agua) 2 - Reversa o Inversa (parafina) El papel contiene un 20 % de agua retenido aunque nosotros lo notemos seco, esa es la fase estacionaria.

16 3) Clasificación de acuerdo al lecho cromatográfico: Cromatografía plana: En papel Capa fina Cromatografía en columna: Gases Liquido Fluidos supercitricos

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19 Cromatografía en Columnas Son de acero inoxidable o vidrio, tienen un diámetro de 0,5 a 6 cm y una longitud a más de 1 m. Se rellenan con la fase estacionaria sólida o un soporte inerte recubierto con la fase estacionaria Una columna más larga aumenta el grado de separación Se usan con fines analíticos y preparativos

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22 Estimación del área de la mancha (por medida, pesada) Determinación indirecta (raspado y valoración) Determinación directa (Densitómetro) Detector Fuente de luz Placa cromatográfica Cromatografía Cuantitativa

23 Cromatografía gaseosa  Fue el primer método cromatográfico instrumental que se desarrolló comercialmente  Sólo se necesita un cilindro de gas comprimido y un regulador de presión para mantener un fluído estable

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25 Solventes Los solventes utilizados deben ser muy puros. Se puede utilizar un solo solvente (elección isocrática). Se puede cambiar un solo solvente por otro luego de un tiempo apropiado. Se puede cambiar continuamente de composición del solvente (elección por gradiente).

26 Extracción Pigmentos 20 g de hojas verdes (espinaca, acelga, etc.) se cortan en finos trozos con tijera y se colocan en el mortero. Se agregan 20 mL de acetato de etilo y se maceran por 5 minutos realizando un movimiento giratorio con el pilón. La solución debe quedar de color verde intenso. Una vez pasado los 5 minutos se exprime el sólido (utilizar guantes) para extraer la mayor cantidad de pigmentos posibles. El extracto de color verde intenso se seca con una punta de espátula de sulfato de sodio anhidro.

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