FASES PARA CROMATOGRAFÍA

Presentación del tema: "FASES PARA CROMATOGRAFÍA"— Transcripción de la presentación:

1 FASES PARA CROMATOGRAFÍA
Licda. Carol villatoro de santisteban Análisis Instrumental Departamento de Fisicoquímica Escuela de Química USAC

2 GENERALIDADES Fase estacionaria (FS) Fase móvil (FM)
Sistema cromatográfico Elección según propósito del análisis, características de la muestra, características de los analitos Interacción FS-analito Polaridad

3 Fases estacionarias

4 FASES ESTACIONARIAS Factor clave para la SEPARACIÓN
Características de la FS Identidad química Estructura física: (Partículas de soporte, configuración en el espacio, tipos de interacción) Forma de contacto entre fases (plano, columnas) Configuración del soporte (partículas de relleno, pared del capilar)

5 ADSORCIÓN Fase estacionaria sólida y polar Carbonato de calcio Sílica
Alúmina Na2SiO3 +H2O + 2HCl = Si(OH)4 + 2NaCl

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7 REPARTO Fase estacionaria líquida
Partículas de soporte: sílica, vidrio+sílica, polímeros FS unida físicamente o químicamente (reparto o fase enlazada) Película superficial de fase estacionaria sobre partícula de soporte

8 FASE ENLAZADA Unión covalente soporte-FS Sílica – Siloxanos
Equivalente a película muy fina Características de la partícula determinantes para grado de sililación

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12 AFINIDAD Aplicación bioquímica Interacción antigeno-anticuerpo
Alta selectividad

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14 INTERCAMBIO IÓNICO Analitos con carga eléctrica FS (enlazada) cargada
Intercambiadores aniónicos (FS +, analito -) Intercambiadores catiónicos (FS -, analito +) FM con contraión Competencia (intercambio) analito-contraión

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17 EXCLUSIÓN O PERMEACIÓN EN GEL
Interacción FS-analito puramente física Tamaño y forma --- Peso molecular y conformación Poros o canales – recorridos distintos

18 Fases Móviles

19 FASES MÓVILES Factor clave para la ELUCIÓN Características de la FM
Composición química (polaridad) Estabilidad (estado físico, composición, interacción con otras sustancias, interferencias instrumentales)

20 Polaridad Armonización en las polaridades analito-FS-FM
Similitud FM-analito – tiempo de retención

21 Polaridad

22 Mezclas Elución isocrática Elución en gradiente Uno o varios solventes
Composición constante Elución en gradiente Dos o más solventes Composición varía en función del tiempo Índice de polaridad de la mezcla: sumatoria de índices individuales por fracción en volumen

23 INTERACCIONES

24 Interacciones C. de adsorción:
Analito y FM compiten por adsorberse sobre la FS Fase Normal Gradiente: aumento de polaridad

25 Interacciones C. de reparto (incluyendo fase enlazada):
Analito se transfiere entre FM y FS en la interfase Fase Normal Gradiente: aumento de polaridad Fase Reversa Gradiente: disminución de polaridad Polaridad de la FM influye en conformación molecular de la FS

26 Interacciones C. de exclusión y c. de gases:
FM sólo transporta al analito libre. Poca interacción FM con FS Poca interacción FM con analito

27 Interacciones C. de afinidad Elución en gradiente
Fase de retención: FM sólo transporta al analito Fase de elución: FM interactúa con el analito o con la FS FM compite con FS por enlazarse con el analito FM modifica o se une a FS, evitando la unión FS-analito.

28 Interacciones C. de intercambio iónico
Analito y FM compiten por adsorberse sobre la FS Elución en gradiente Fase de acondicionamiento: FM se une a FS (atracción electrostática) Fase de retención: FM y analito compiten Fase de elución: FM interactúa con el analito o con la FS FM se une a FS FM modifica al analito evitando la unión FS-analito

29 Gracias por su atención
FIN Gracias por su atención