Alteraciones Mec. Intrínseco Congénitas - Adquiridas
Congénitas Adquiridas COAGULOPATIAS
HEMOFILIA ENFERMEDAD DE VON WILLEBRAND
PREVALENCIA - Hemofilia A1/ Hemofilia B1/ VWD 1% población
IIa A1A2 B A3 C1 C2 200kD 80kD 200kD 80kD 90kD HRG 80kD 50kD 43kD 73kD 45kD 67kD FACTOR VIII NH 2 SecreciónPreactivaciónActivaciónInactivación IIaIIa APC IIa Xa Xa Lollar P & Parker CG, 1989
FVIII-VWF S-SS-S VWF FVIII FVIIIa IIa, FXa A1 A2 C2 C1 A3 N N C C A1 A2 A3 C1 C2 B Vlot et al., 1998
Factor de von Willebrand: Cr 12
ADAMTS 13
Sadler JE, 2005 vWF Ensamble y Catabolismo Proteolisis aumentada Depuración aumentada Plasma Inicial k proteolisis k depuración ADAMTS-13 k secreción
FVIII/VWF - Propiedades FVIII VWF ClínicaHemofilia vWD ProducciónS. Hepáticos C. Endoteliales Megacariocitos Megacariocitos GenCromosoma X Cromosoma 12 MoléculaHeterodímero Multímero FunciónCoagulación Cofactor Adhesión Adhesión Endotelio/Sub Endotelio/Sub Transporta FVIII Transporta FVIII
FVIII/VWF - Nomenclatura Factor VIII Antígeno FVIII:Ag Función FVIII Factor von Willebrand Proteína Madura VWF Antígeno VWF:Ag Cofactor Ristocetina VWF:RCo Unión al Colágeno VWF:CB Unión al Factor VIII VWF:FVIIIB ISTH
Recesiva Ligada al sexo (gen FVIII Cr X) PORTADORA HEMOFILIA A HEMOFILICO
HEMOFILIA Modo de Herencia
HEMOFILIA
q28 Cromosoma X Factor VIIIG6PD F8A F8B Exon 22 Exon 23 5’3’ GEN FACTOR VIII
HEMOFILIA Diagnóstico “sencillo” - APTT prolongado - FVIII disminuido
HEMOFILIA - Clasificación Severa< 1% VIII Moderada1-5% VIII Leve>5% VIII
Alteración heterogénea Alteración heterogénea Afecta diferentes regiones Afecta diferentes regiones del gen No aplicable a todos los casos No aplicable a todos los casos Análisis de ADN Complejo
Inversión del intrón 22 ↓ 50% hemofílicos severos IDENTIFIACION DIRECTA Certeza
Inversiones Inversiones Deleciones Deleciones Inserciones Inserciones Mutaciones “sin sentido” Mutaciones “sin sentido” Mutaciones “sentido falso” Mutaciones “sentido falso” IDENTIFIACION DIRECTA
Recesiva Ligada al sexo (gen FIX Cr X) PORTADORA HEMOFILIA B HEMOFILICO
HEMOFILIA - Clasificación Severa< 1% IX Moderada1-5% IX Leve>5% IX
HEMOFILIA B Diagnóstico “sencillo” - APTT prolongado - FIX disminuido
protómero dominios funcionales ligandos Colágeno GPIIb-IIIa FVIII GPIb Heparina Heparina Colágeno Sulfátidos D 1 D 2 D’ D 3 A 1 A 2 A 3 D 4 BC 1 C 2 D’ D 3 A 1 A 2 A 3 D 4 BC 1 C S I S I S RGD RGD Enfermedad de von Willebrand Propéptido Subunidad Madura
Sadler JE, 2005 vWF Ensamble y Catabolismo Proteolisis aumentada (vWD2A) Depuración aumentada (vWD1 Vicenza) Plasma Inicial k proteolisis k depuración ADAMTS-13 k secreción
VWF Expresión Variable Penetrancia Incompleta Chance Modificadores Ambientales edad, género, trauma Enfermedad primaria mutación ? Genes modificadores Ginsburg D, 2001 Difícil Diagnóstico Niveles Variables VWF
VWD Clasificación Revisada Sadler E, 1994 Tipo 1Deficiencia cuantitativa parcial Tipo 2Alteración cualitativa Tipo 3“Ausencia”de VWF
VWD – TIPOS Frecuencia (%) TIPO 1 TIPO 2 TIPO 3 Tuddenham (134) Lenk (111) Nilson (106f) Hoyer (116) Awidi (65) 5929,511,5 Berliner (60) Castaman G, 2003
VWD Serie 1885 Pacientes (Tipo I 91%) FVIII 61,6% FVIII 61,6% VWF:Ag62,2% VWF:Ag62,2% TS 58,4% TS 58,4% Woods AI, 2001
Individual Individual Familiar Familiar VWF-Variabilidad
VWF-Variabilidad Factores 40% no genéticos 40% no genéticos 60% genéticos 60% genéticos
VWF-Variabilidad Factores no-genéticos Edad Edad Estrés Estrés Ejercicio Ejercicio H. Tiroideas H. Tiroideas Estrógenos Estrógenos F. Aguda F. Aguda
VWF-Variabilidad Factores genéticos Grupo ABO 20-30% variabilidad Grupo ABO 20-30% variabilidad Grupo “O” VWF Hipótesis Glicosilación Alteración procesamiento procesamiento estabilidad estabilidad secreción secreción
VWD Distribución según grupo ABO “AB” 0,6% difícil diagnóstico “AB” 0,6% difícil diagnóstico “O” 70% más sintomático “O” 70% más sintomático > frecuencia de consulta Woods AI, 2001
Cuantitativa Cualitativa VWF:Ag SI NO VWF:RCo SI SI VWF:CB SI SI Multímeros SEMI SI VWF Pruebas Específicas
VWFpp-ELISA VWFpp Síntesis VWF (independiente ABO) (independiente ABO) Tipo 1VWFpp Tipo 1VWFpp Tipo 3VWFpp ausente Tipo 3VWFpp ausente
VWF:RCo Plaquetasnormales Plasma del paciente Ristocetina Plaquetas del paciente Plasma Ristocetina RIPA Agreg. c/Ristocetina Agregometría Agregometría PRP
Agregación c/Ristocetina Kasper C, 2005 Normal vWD-Tipo 1 vWD-Tipo 2A vWD-Tipo 3
2A función plaquetaria Multímeros APM e intermedio vWD-Tipo 2 Clasificación Revisada Sadler E, 1994
Normal 2A Línea 1 Línea 2 Línea 3 Lane 2> Lane 1> Lane 3> Línea 2= 95% Línea 3= 3% VWF-Análisis Multimérico grandes intermedios-pequeños (banda 1)(banda 2)
2A función plaquetaria Multímeros APM e intermedio vWD-Tipo 2 Clasificación Revisada Sadler E, B afinidad VWF-GPIb-IX
Agregación c/Ristocetina Kasper C, 2005
2B Normal 2A Línea 1 Línea 2 Línea 3 Lane 3> VWF-Análisis Multimérico grandes intermedios-pequeños (banda 1)(banda 2)
2A función plaquetaria Multímeros APM e intermedio vWD-Tipo 2 Clasificación Revisada Sadler E, B afinidad VWF-GPIb-IX 2M función plaquetaria c/Multímeros APM 2N afinidad VWF-FVIII* * símil Hemofilia A, autosómica
protómero dominios funcionales ligandos Colágeno GPIIb-IIIa FVIII GPIb Heparina Heparina Colágeno Sulfátidos D 1 D 2 D’ D 3 A 1 A 2 A 3 D 4 BC 1 C 2 D’ D 3 A 1 A 2 A 3 D 4 BC 1 C S I S I S RGD RGD Factor von Willebrand Propéptido Subunidad Madura X
2N-Variante Normandy Biología Molecular -Secuenciación -Enz. restricción
VWF- Arg19Trp (C2594T) Exón 18 Enzima BspMI pb pb 3-96 pb Normal 148 pb 96 pb Mutado 244 pb 123 MutaciónNormal
T. Sangría T. Sangría APTT (fVIII) APTT (fVIII) Adhesividad Adhesividad Tiempo de obstrucción (PFA) Tiempo de obstrucción (PFA) Screening VWD Estrategia Diagnóstica * *no permiten excluir VWD
-VWF plasma/plaquetas VWD Estrategia Diagnóstica Diagnóstico VWF:Ag VWF:Ag VWF:RCo VWF:RCo VWF:CB VWF:CB -FVIII en plasma
Multímeros Multímeros RIPA RIPA Unión GP plaquetarias Unión GP plaquetarias VWF:FVIIIB VWF:FVIIIB Biología Molecular Biología Molecular VWD Estrategia Diagnóstica Clasificación
vWD- Importancia Dignóstica VWF:RCo Prueba más sensible VWF:Ag Correlaciona VWF:RCo Ratio=1 Tipo1 Ratio<1 Tipo2 FVIII Util para el manejo clínico T. Sangría Correlaciona VWF:RCo (T1) Detecta defecto plaquetario RIPA Detecta Tipo 2B Castaman G, 2003
vWD- Importancia Dignóstica A.Multimérico Discrimina Tipo 2M, 2A, 2B VWF plaquetario Predice respuesta DDAVP Tipo 1 VWF:FVIIIB Detecta Tipo 2N VWF:CB Correlaciona VWF:RCo (T1) Sensibilidad colágeno CT PFA-100 Especificidad (?) Castaman G, 2003
HEMOFILIA VON WILLEBRAND Diagnóstico Diferencial
Cofactor de ristocetina * Cofactor de ristocetina * Antígeno de factor vW o N Antígeno de factor vW o N Factor VIII o N* Factor VIII o N* Tiempo de Sangría o N Tiempo de Sangría o N *excepto la variante 2N Enfermedad de von Willebrand
Cofactor de ristocetinaN Cofactor de ristocetinaN Antígeno de factor vW N Antígeno de factor vW N Factor VIII Factor VIII Tiempo de Sangría N Tiempo de Sangría N Hemofilia
Hemofilia VWD2N Hemofilia VWD2N VWF:RCo N N Factor VIII VWF:FVIIIB N Hemofilia-VWD 2N
Fragmentos de degradación (intraplaquetario normal) Fragmentos de degradación (intraplaquetario normal) VWFpp depuración VWFpp depuración aVWF (inhibición VWF:RCo, VWF:Ag, FVIII) aVWF (inhibición VWF:RCo, VWF:Ag, FVIII) VWD - Adquirido Laboratorio Mecanismos
OTROS DESORDENES HEREDITARIOS
DESORDENES HEREDITARIOS-Recesivos Frecuencia Depende del tipo población Grado de cosanguinidad
DEFICIT DE FACTOR XII -Generalmente, no asociado a desórdenes hemorrágicos -IAM, TEP -Menorragias, hemorragias subaracnoideas
DEFICIT PRECALICREINA - Sin complicaciones hemorrágicas - Riesgo de IAM, TEP, stroke
DEFICIT PRECALICREINA Diagnóstico - TTPA -Corrige con normal -Corrige con incubación prolongada (10 min a 37º C) - PK (actividad coagulante)
DEFICIT PRECALICREINA Diagnóstico - TTPA -Corrige con normal -Corrige con incubación prolongada (10 min a 37º C) - PK (actividad coagulante)
DEFICIT DE QUININOGENOS DE ALTO PESO MOLECULAR Sin asociación con desórdenes hemorrágicos Riesgo de TVP y TEP
FACTOR XI Vida media en plasma: hs. Nivel hemostático: 15-20% Déficit Prevalencia: 1 en (población general) 1 en 190 (judíos Ashkenazi)
DEFICIT DE FACTOR XI Clínica -Sangrado espontáneo raro -Hematomas fáciles, sangrado post extracción dentaria, cirugía, parto -Sangrado en sitios ↑ Fibrinolisis (cavidad oral, nariz y útero)
DEFICIT DE FACTOR XI Clínica ¿Por qué sangra sólo el 50% de los pacientes y sin relación con los niveles plasmáticos de FXI?
Congénitas Adquiridas COAGULOPATIAS
Adquiridas DéficitInhibición
Neutralizantes EF Ac No neutralizantes Ac EF ESPECIFICOS INHIBIDORES ADQUIRIDOS
ESPECIFICOSESPECIFICOS Neutralizantes INHIBEN ACTIVIDAD Afectan las pruebas de la coagulación EF Ac
ANTICUERPOS aFVIII ALOANTICUERPOS - Respuesta inmune a proteínas exógenas (terapéutica) AUTOANTICUERPOS - Autoinmunidad (neo-epitopes) ALOANTICUERPOS - Respuesta inmune a proteínas exógenas (terapéutica) AUTOANTICUERPOS - Autoinmunidad (neo-epitopes)
XIIXIIa XIXIa IXIXa FL Ca 2+ IXIXa FL Ca 2+ FCFC XXaVaFL XXaVaFL II IIIIa IIa Fibrinógeno Fibrina FibrinaFibrinógeno HEMOFILIA A Tratamiento Tratamiento FVIIIFVIII
XIIXIIa XIXIa IXIXa FVIIIa FVIIIaFL Ca 2+ IXIXa FVIIIa FVIIIaFL Ca 2+ FCFC XXaVaFL XXaVaFL II IIIIa IIa Fibrinógeno Fibrina FibrinaFibrinógeno a-FVIIIa-FVIII aparecen durante el aparecen durante el 1 er año de tratamiento aparecen durante el aparecen durante el 1 er año de tratamiento INHIBIDORES aFVIII
INHIBIDORES aFVIII (aFVIII neutralizantes) CLINICA Hemorrágica aFVIII Complican la terapéutica sustitutiva post-cirugía/trauma Hemofílicos
ANTICUERPOS aFVIII AUTOANTICUERPOS Hemofilia Adquirida AUTOANTICUERPOS Hemofilia Adquirida
ANTICUERPOS aFVIII Hemofilia Adquirida Embarazo-Parto Enf. Autoinmune Neoplasia Idiopáticos (Edad ) Hemofilia Adquirida Embarazo-Parto Enf. Autoinmune Neoplasia Idiopáticos (Edad ) Cohen AJ & Kessler CM, 1996
Inhibición tiempo y temperatura-dependiente aFVIII Neutralizantes Característica
Detección
APTT prolongado APTT prolongado No corrige con plasma normal No corrige con plasma normal Potencia con incubación Potencia con incubación No aumenta la actividad por dilución No aumenta la actividad por dilución aFVIII Neutralizantes Detección
Incubación (1 h a 37°C) P : 75 seg N : 32 seg P+N inm : 50 seg P+N inc : 70 segP+N inc : 50 seg POTENCIANO POTENCIA Incubación (1 h a 37°C) P : 75 seg N : 32 seg P+N inm : 50 seg P+N inc : 70 segP+N inc : 50 seg POTENCIANO POTENCIA INHIBICION TIEMPO DEPENDIENTE INHIBICION TIEMPO DEPENDIENTE
INHIBIDORES DE INTERFERENCIA Inhibidor Lúpico Paraproteínas PDF/pdf Heparina-Heparinoides Inhibidor Lúpico Paraproteínas PDF/pdf Heparina-Heparinoides
COAGULPATIAS Orientación Diagnóstica
XII XIIa XI XIa IX IXa VIIIaFL Ca 2+ FC XXaVaFL IIa IIa Fibrinógeno M. Fibrina M. Fibrina Fibrina FibrinaFibrinógeno M. Fibrina M. Fibrina Fibrina Fibrina FTVIIa Ca 2+ XIIIa Activación II V. INTRINSECA TTPA V. EXTRINSECA TP V. FINAL TT TT PRUEBAS
INTERPRETACION Pruebas DEFECTO (probable) TP APTT, TT, TS Normales V. Extrínseca (FVII) Déficit de factores Vit K Dep. Hepatopatía TP, APTT TT, TS Normales V. Común, Déficit de factores Vit K Dep., Hepatopatía TP, APTT, TT, TS Hepatopatía, CID ↑ TP, APTT, TT TS Normal V. Final Fibrinógeno APTT TP, TT, TS Normal V. Intrínseca (FVIII, FIX, FXI, FXII) Hemofilia, VWD ↑ APTT, TS TP, TT Normales VWD
INTERPRETACION Pruebas DEFECTO (probable) TP APTT, TT, TS Normales V. Extrínseca (FVII) Déficit de factores Vit K Dep. Hepatopatía TP, APTT TT, TS Normales V. Común, Déficit de factores Vit K Dep., Hepatopatía TP, APTT, TT, TS Hepatopatía, CID ↑ TP, APTT, TT TS Normal V. Final Fibrinógeno APTT TP, TT, TS Normal V. Intrínseca (FVIII, FIX, FXI, FXII) Hemofilia, VWD ↑ APTT, TS TP, TT Normales VWD
INTERPRETACION Pruebas DEFECTO (probable) TP APTT, TT, TS Normales V. Extrínseca (FVII) Déficit de factores Vit K Dep. Hepatopatía TP, APTT TT, TS Normales V. Común, Déficit de factores Vit K Dep., Hepatopatía TP, APTT, TT, TS Hepatopatía, CID ↑ TP, APTT, TT TS Normal V. Final Fibrinógeno APTT TP, TT, TS Normal V. Intrínseca (FVIII, FIX, FXI, FXII) Hemofilia, VWD ↑ APTT, TS TP, TT Normales VWD
INTERPRETACION Pruebas DEFECTO (probable) TP APTT, TT, TS Normales V. Extrínseca (FVII) Déficit de factores Vit K Dep. Hepatopatía TP, APTT TT, TS Normales V. Común, Déficit de factores Vit K Dep., Hepatopatía TP, APTT, TT, TS Hepatopatía, CID ↑ TP, APTT, TT TS Normal V. Final Fibrinógeno APTT TP, TT, TS Normal V. Intrínseca (FVIII, FIX, FXI, FXII) Hemofilia, VWD ↑ APTT, TS TP, TT Normales VWD
INTERPRETACION Pruebas DEFECTO (probable) TP APTT, TT, TS Normales V. Extrínseca (FVII) Déficit de factores Vit K Dep. Hepatopatía TP, APTT TT, TS Normales V. Común, Déficit de factores Vit K Dep., Hepatopatía TP, APTT, TT, TS Hepatopatía, CID ↑ TP, APTT, TT TS Normal V. Final Fibrinógeno APTT TP, TT, TS Normal V. Intrínseca (FVIII, FIX, FXI, FXII) Hemofilia, VWD ↑ APTT, TS TP, TT Normales VWD
INTERPRETACION Pruebas DEFECTO (probable) TP APTT, TT, TS Normales V. Extrínseca (FVII) Déficit de factores Vit K Dep. Hepatopatía TP, APTT TT, TS Normales V. Común, Déficit de factores Vit K Dep., Hepatopatía TP, APTT, TT, TS Hepatopatía, CID ↑ TP, APTT, TT TS Normal V. Final Fibrinógeno APTT TP, TT, TS Normal V. Intrínseca (FVIII, FIX, FXI, FXII) Hemofilia, VWD ↑ APTT, TS TP, TT Normales VWD
INTERPRETACION Pruebas DEFECTO (probable) TP APTT, TT, TS Normales V. Extrínseca (FVII) Déficit de factores Vit K Dep. Hepatopatía TP, APTT TT, TS Normales V. Común, Déficit de factores Vit K Dep., Hepatopatía TP, APTT, TT, TS Hepatopatía, CID ↑ TP, APTT, TT TS Normal V. Final Fibrinógeno APTT TP, TT, TS Normal V. Intrínseca (FVIII, FIX, FXI, FXII) Hemofilia, VWD ↑ APTT, TS TP, TT Normales VWD