GRUPO DE PATÓLOGOS DEL NOROESTE REUNIÓN ACADÉMICA 2013 BIOLOGÍA MOLECULAR BÁSICA PARA EL PATÓLOGO Luis Muñoz Fernández Centenario Hospital Miguel Hidalgo.

Presentación del tema: "GRUPO DE PATÓLOGOS DEL NOROESTE REUNIÓN ACADÉMICA 2013 BIOLOGÍA MOLECULAR BÁSICA PARA EL PATÓLOGO Luis Muñoz Fernández Centenario Hospital Miguel Hidalgo."— Transcripción de la presentación:

1 GRUPO DE PATÓLOGOS DEL NOROESTE REUNIÓN ACADÉMICA 2013 BIOLOGÍA MOLECULAR BÁSICA PARA EL PATÓLOGO Luis Muñoz Fernández Centenario Hospital Miguel Hidalgo Biopath México Aguascalientes, Ags.

2 López-Corella E. Patología 1991; 29: 65-66.

3 EL CONOCIMIENTO DEL CÁNCER A LOS LARGO DEL TIEMPO DeVita VT et al. Primer of the Molecular Biology of Cancer 2011: 4-5.

4 EL CONOCIMIENTO DEL CÁNCER A LOS LARGO DEL TIEMPO De Vita VT el al. Primer of the Molecular Biology of Cancer 2011: 4-5.

5 LiVolsi V, Upton MP. Am J Clin Pathol 2012;137: 341-342.

6 DIAGNÓSTICO MOLECULAR Blakey GL, Farkas DH. Basic Concepts of Molecular Pathology 2009: 62.

7 BIOMARCADORES Es una característica que se mide objetivamente como un indicador de: Un proceso biológico normal. Una enfermedad. Las respuestas farmacológicas a una intervención terapéutica. Tipos: Biomarcador pronóstico: evolución. Biomarcador predictivo: sensibilidad a cierto tratamiento. Biomarcador de monitorización: respuesta a un tratamiento. Jaffe CC. Arch Pathol Lab Med 2009; 133: 547-549.

8 BIOMARCADORES Biomarcadores pronósticos: La mayoría de los que detectamos en patología. Un buen ejemplo son los índices mitósicos o de proliferación (PCNA, Ki 67). Biomarcadores predictivos: Her2-neu en cáncer de mama. Mutación de KRAS en cáncer de colon. Biomarcadores de monitorización: Fluorodesoxiglucosa en tomografía por emisión de positrones (PET scan). Jaffe CC. Arch Pathol Lab Med 2009; 133: 547-549.

9 BIOMARCADORES PRONÓSTICOS EN NEOPLASIAS HEMATOLÓGICAS Bahler D. Molecular Pathology of Hematolymphoid Diseases 2010: 66.

10 FIJADORES USADOS EN PATOLOGÍA Hunt JL. Arch Pathol Lab Med 2008; 132: 251.

11 TÉCNICAS MOLECULARES EN TEJIDOS FIJADOS EN FORMOL Y EMBEBIDOS EN PARAFINA Hibridación in situ fluorescente o cromógenica (FISH, CISH). Reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Secuenciación del ADN. Pruebas en ARN, como la PCR con transcripción reversa (RT-PCR). Microarreglos para determinar la expresión génica. Dry, S et al. Am J Clin Pathol 2012; 137: 346-355.

12 DEGRADACIÓN DEL ADN EN TEJIDOS FIJADOS EN FORMOL Y EMBEBIDOS EN PARAFINA Para los estudios moleculares, el tiempo de fijación en formol debe ser entre 6 y 24 horas. El formol establece enlaces cruzados con el ADN, las histonas y otras proteínas, fraccionando las moléculas: Este proceso prosigue en los bloques tisulares a lo largo de los años: Después de 10 a 20 años, la degradación puede impedir la amplificación con PCR. Dry, S et al. Am J Clin Pathol 2012; 137: 346-355.

13 Hunt JL. Arch Pathol Lab Med 2008; 132: 250.

14 PROTOCOLOS DE DIAGNÓSTICO MOLECULAR Blakey GL, Farkas DH. Basic Concepts of Molecular Pathology 2009: 62.

15 EXTRACCIÓN DE LOS ÁCIDOS NUCLEICOS Hunt JL, Sanja D. Basic Concepts of Molecular Pathology 2009: 70.

16 FLUJO UNIDIRECCIONAL EN EL LABORATORIO DE PATOLOGÍA MOLECULAR Hunt JL. Arch Pathol Lab Med 2008, 132: 256. Blakey GL, Farkas DH. Basic Concepts of Molecular Pathology 2009: 67.

17 REACTIVOS DE LA PCR Polimerasa termoestable: Taq polimerasa u otra: Pfu, Pwo, Tgo, Tli, Tth. Cebadores (primers). Desoxinucleótidos. Solución amortiguadora (buffer). Magnesio. Dwight O. Basic Concepts of Molecular Pathology 2009: 77-78.

18 PCR Hunt JL. Arch Pathol Lab Med 2008 132: 254.

19 PCR: CICLOS TÉRMICOS Dwight O. Basic Concepts of Molecular Pathology 2009: 75.

20 Dwight O. Basic Concepts of Molecular Pathology 2009: 74.

21 Dwight O. Basic Concepts of Molecular Pathology 2009: 75.

22 DETECCIÓN Y ANÁLISIS DE LOS PRODUCTOS DE LA PCR (“AMPLICONES”) Blakey GL, Farkas DH. Basic Concepts of Molecular Pathology 2009: 62.

23 VARIEDADES DE PCR Hot start: mayor especificidad. Nested: mayor producción y especificidad. Específica para metilación. Multiplex: se amplifican varias regiones simultáneamente. PCR con transcripción reversa (RT-PCR): amplificación de secuencias de ARN. Dwight O. Basic Concepts of Molecular Pathology 2009: 78-79.

24 PCR EN TIEMPO REAL Dwight O. Basic Concepts of Molecular Pathology 2009: 80.

25 PCR EN TIEMPO REAL Dwight O. Basic Concepts of Molecular Pathology 2009: 80.

26 MATRICES DE ADN (MICROARRAYS) Quackenbush J. N Engl J Med 2006, 354: 2463-2472.

27 MATRICES DE ADN (MICROARRAYS) http://www.columbia.edu/~bo8/undergraduate_research/projects/sahil_mehta_project/work.htm

28 APLICACIONES DE LAS MATRICES DE ADN Blakey GL, Farkas DH. Basic Concepts of Molecular Pathology 2009: 66.

29 Perou ChM et al. Nature 2000, 406: 747-752.

30 PERFILES DE EXPRESIÓN GENÉTICA EN CANCER DE MAMA Lester SC. Pathologic Basis of Disease 2010.

31 ONCOTYPE PARA CÁNCER DE MAMA http://www.oncotypedx.com/en-US/Breast.aspx

32 CÁNCER COLORRECTAL: UNA ENFERMEDAD HETEROGÉNEA Diferentes vías moleculares de la carcinogénesis: Vía supresora convencional (60%): APC/β-catenina/Wnt. Vía de inestabilidad hereditaria de microsatélites (Lynch, 2 al 7%): MSH2, MLH1, MSH6, PSM2. Vía de la mucosa aserrada (35%): Silenciamiento epigenético (metilación de islas CpG). TGFβ y BAX. Shi Ch, Washington K. Am J Clin Pathol 2012, 137: 847-859.

33

34 TRATAMIENTO DEL CARCINOMA DE PULMÓN QUE NO ES DE CÉLULAS PEQUEÑAS (NSCLC) La neoplasia maligna que se diagnostica con mayor frecuencia en el mundo. Más del 50% de los pacientes están en etapa IV cuando se les hace el diagnóstico. En el 10 al 15% de los casos de carcinoma que no es de células pequeñas (NSCLC) existen mutaciones del EGFR: gefitinib, erlotinib. Rearreglos del gen ALK (gen de fusión EML4- ALK) en el 5% de los NSCLC: crizotinib. Aisner DL, Marshall CB. Am J Clin Pathol 2012, 138: 332-346.

35

36 TRATAMIENTO DEL CARCINOMA DE PULMÓN QUE NO ES DE CÉLULAS PEQUEÑAS (NSCLC) La mutación de KRAS es un predictor negativo de las mutaciones de EGFR y de los rearreglos de ALK. La amplificación de MET se asocia a la resistencia al tratamiento con inhibidores de EGFR. Aisner DL, Marshall CB. Am J Clin Pathol 2012, 138: 332-346.

37