ESTUDIO MEDIANTE ANALISIS SERIADO DE EXPRESIÓN GÉNICA (SAGE) DEL TRANSCRIPTOMA IMPLICADO EN LA RESPUESTA A CISPLATINO EN EL CARCINOMA NO MICROCÍTICO DE PULMÓN (CNMP) Cejas P (1), Belda-Iniesta C (1), Sánchez JJ (2), Machado-Pinilla R (3), Rodríguez-Fanjul V (3), Ibanez de Cáceres I (3), Feliu J (1), Nistal M (4), Perona R (3),González Barón M (1), de Castro J (1). Unidad de Oncología Translacional CSIC/UAM. Servicio de Oncología Médica. Hospital Universitario La Paz. Universidad Autónoma de Madrid. 2. Departamento de Medicina Preventiva, Universidad Autónoma de Madrid. 3. Unidad de Oncología Translacional CSIC/UAM. Instituto de Investigaciones Biomédicas “Alberto Sols”. Madrid 4. Departamento de Anatomía Patológica. Hospital Universitario La Paz. Madrid.

QuimioterapiaAdyuvante Serial Analysis of Gene Expression (SAGE) en la respuesta a cisplatino en CPNM Cáncer de pulmón no microcítico (CPNM) Estadios localizados Estadios Avanzados Cirugía Quimioterapia QuimioterapiaAdyuvante CISPLATINO Respuesta, SLP, SG SLE El SAGE es una prueba muy potente para estudiar la situación génica tumoral Nuestro grupo ha intentado explorar mediante sage los mecanismos de sensibilidad a cisplatino. Cisplatino es un fármaco fundamental para la enfermedad avanzada pero en casos de enfermedad potencialmente curable mediante cirugía la QT adyuvante basada en cisplatino consigue aumentar entre un 5 y un 10% la supervivencia. Para el estudio de la sensibilidad a cisplatino, en la enfermedad avanzada la respuesta es un buen objetivo pero para valorar el beneficio potencial de la QT adyuvante la SLE podría ser el mejor indicador Uno de los genes más implicados ha sido ERCC1 (Olausen, NEJM) pero no se han hecho estudios que traten de estudiar un análisis amplio de genes potencialmente implicados en la resistencia al platino www.sagenet.org Velculescu VE, Zhang L, Vogelstein B, Kinzler KW. Serial analysis of gene expression. Science. 1995; 270(5235):484-7.

Aplicación del SAGE al estudio de la Resistencia a la QT adyuvante en CPNM (estadios quirúrgicos) Objetivo: Identificar mecanismos de resistencia al platino que pudieran reducir la eficacia a un tratamiento adyuvante en pacientes con CPNM sometidos a cirugía y quimioterapia adyuvante basada en cisplatino. Muestras: Pieza congelada Pieza en fresco Análisis de sensibilidad (in vitro) Cisplatino/ Taxol/ Vinorelbina/ Gemcitabina La QT adyuvante basada en platino es el estándar pero solo ofrece un beneficio residual a costa de una toxicidad importante. Identificar genes que pudieran estar implicados en la falta de eficacia de platino en esta situación es muy importante y para eso se hace el estudio. 50 tumores (prospectivamente) 3 casos muy sensibles 3 casos muy resistentes SAGE

Resultados SAGE http://www.ncbi.nlm.nih.gov/sage/

Resultados. Análisis in silico. Oncomine*. KRT6A HSPB1 R S R S R S R S KRT14 PGK1 EGR1 AKR1C2 R S R S R S R S CLDN3 POU5F1 ONCOMINE: a cancer microarray database and integrated data-mining platform. Neoplasia. 2004 Jan-Feb;6(1):1-6. R S R S BMC Cancer 2006/06/30 29 samples S100A7 Information mRNA 12,427 measured genes Reporter Information Human Genome U133A Array Cisplatin Resistant (5) Cisplatin intermediate resistant (20) Cisplatin Sensitive (4)

Resultados. Evolución del proyecto SAGE análisis Otros proyectos/ bibliografía Colección prospectiva de 50 tumores de cáncer de pulmón operados y estudio in vitro de la sensibilidad a drogas 6 pacientes (3 sensibles y 3 resistentes) estudio SAGE Proyectos de interés (transición epitelio mesénquima/ equilibrio REDOX, respuesta a drogas) Selección de genes con cambios significativos y comprobación in silico Selección de 10 genes Selección de 12 genes 22 genes candidatos qPCR (TLDAs) 22 genes 6 HK pacientes estadios operables con adyuvancia (tejidos congelados) pacientes avanzados estadios IIIB y IV (tejidos fijados, fibrobroncoscopia)

Resultados. Genes seleccionados. Estudio qPCR http://string.embl.de/ Pacientes: Avanzados N=30 Estadios quirúrgicos n=51

Resultados . Perfil de 4 genes predictivo de recaída (estadios operables con adyuvancia n=51) Características No. de pacientes (%) Mediana de edad [rango] 62 [36-85] Genero Masculino Femenino 41 (80) 10 (20) Histología Epidermoide Adenocarcinoma Broquioloalveolar Célula grande 21 (41) 15 (29) 4 (8) 11 (22) Estadio 1b 2 a 3 a 3 b desconocido 12 (24) 19 (37) 8 (16) 7 (14) 5 (9) Recaída Si No 20 (39) 26 (51) 5 (10) Ordena la diapo haymuchos datos

Resultados . Perfil de 4 genes predictivo de recaída (estadios operables con adyuvancia n=51) MODELO COX CON SLE FRAP1: MTOR mechanistic target of rapamycin (serine/threonine kinase) TWIST: twist homolog 1 AKR1C2: aldo-keto reductase family 1, member C2 (dihydrodiol dehydrogenase 2; bile acid binding protein; 3-alpha hydroxysteroid dehydrogenase, type III HSPB1: Heat-shock protein beta-1 (Heat shock 27 kDa protein) (HSP 27) Involved in stress resistance and actin organization P=0.003 Ordena la diapo haymuchos datos

Conclusiones Utilizando una estrategia combinada -(SAGE)/ estudio in silico / qPCR -, se han encontrado cuatro genes que pueden relacionarse con la resistencia a cisplatino y que podrían asociarse con la ausencia de beneficio de la quimioterapia adyuvante y la recaída en pacientes con CPNM sometidos a cirugía La ampliación de la serie y su validación en una serie independiente permitirían probar este perfil en un ensayo clínico para definir su valor como herramienta clínica