HEPATITIS C Dra Maria G Morales Nutrición-Gastroenterología Bioquímica-Terapias alternativas

Valoraciones Prevención Diagnostico Pronostico Tratamiento Virus – Hospedero- Tratamiento

Antecedentes El virus de la hepatitis C (VHC) fue inicialmente reconocido como agente productor de la hepatitis no-A, no-B, Clonado posteriormente en 1989 Se calcula que un 3% de la población mundial, aproximadamente entre 170 y 200 millones de personas, están infectadas, correspondiendo 4 millones a USA y unos 5 millones a Europa. La prevalencia varía según los distintos países, su grado de desarrollo o, incluso, las diferentes zonas y circunstancias sanitarias dentro del mismo país. Alrededor del 80% de los infectados evolucionan a la cronicidad Entre un 10-20% desarrollan una cirrosis en un plazo de unos 20 años Anualmente, el 2% de los pacientes desarrollan un hepatocarcinoma

Esquema de la historia natural de la infección por el virus de la hepatitis C

Biología Molecular y características de los virus de las hepatitis By C Propiedades VHB VHC Ac nucleico DNA RNA Estructura del genoma Parcial de doble cadena SC + Lineal Tamaño del genoma 3.2 Kb 9.5 Kb Envoltura Si Transmisión Parenteral Clínica Aguda/crónica Aguda/ crónica HCC Si

Genoma del virus de la hepatitis C

Heterogeneidad genética Conceptos Heterogeneidad genética Genotipo Subtipo Aislado Cuasiespesies--- Variación intragenoma Variabilidad genética La cinética de replicación La baja fidelidad de la enzima responsable de la replicación (RpRd) son los dos principales factores que explica Vida media del virus en sangre 2.5 h Producción diaria de partículas virales ( 10 *12 ) infección crónica Tasa de error de la polimerasa 10* -4 Basado en modelo de VIH Probabilidad de mutación puntual 10* -4 Doble mutación 10* -11 Producción diaria de virus aproximadamente 3,300 virus

Homologia y nomenclatura de las variantes del VHC

Fundamento e interpretación de INNO LIPA HCV II

Distribución geográfica de los principales genotipos y subtipos del VHC Cuba

Implicaciones de la variabilidad genética del VHC Sobre la patogenicidad En las manifestaciones extrahepáticas En la aparición de hepatocarcinoma En el diagnóstico Métodos serológicos Métodos moleculares

Implicaciones de la variabilidad genética del VHC En la resistencia el tratamiento. Papel de NS5: PKR y región ISDR Papel de NS3 Sobre la epidemiología Variabilidad geográfica Marcadores epidemiológicos Vacunaciones

TRATAMIENTOS EN HEPATITIS C

Tratamientos Ribavirina. Nucleótido análogo de guanosina, que posee un amplio espectro de actividad antiviral. Ej Virus sincytial respiratorio virus influenza virus estomatitis v Interferón Inmunomodulador Antiviral Anticancerígeno

OBJETIVO GENERAL Evaluar si la RBV puede ser diana de la polimerasa del VHC en ensayos clínicos

MATERIALES Y METODOS PACIENTES: 15 H. crónica, ALT elevada, anti HVC, HVC-RNA, biopsia 6 y 12 meses previos Seguimiento. ALT medida 2-3 veces 8 semanas antes de iniciar el estudio con la droga. TRATAMIENTO 5 Pacientes– Ribavirina 600 mg x2vxdia vía oral 2 Pacientes :Placebo 2 Placebo y 2 ptes con RBV,recibieron previamente INF alfa 4/5 RBV , ALT normal 2 Placebos ALT elevada 8 Ptes INF alfa ( 6 peginterferon alfa y 2 INF alfa) X 48 semanas y seguimiento x 24 semanas

MATERIALES Y METODOS 1. RT-PCR. Primer región NS5B- 1 kb 2.-Amplificados-- clonaje en VECTOR pCR 2.1 TOPO 3.-Secuenciación – DNASIS software 4.-Genotipos – region NS5 Ensayo Inno Lipa 5.- CULTIVO CELULAR. Huh7 Construcciones: HVC subgenomicos NS5B415F y NS5B415 Y en cell Hub7 6.- HVC RNA Cuantitativo 7.- Modelaje molecular y análisis estructural

RESULTADOS Tabla 2 I.- Obj : La RBV acelera la divergencia en la evolución de cuaciespecies del VHC en pacientes Evolución de cuasiespecies de VHC : No de cuasiespecies / frag de genoma en mas de un subclon

RESULTADOS Tabla 3 Obj: Determinar si la RBV e INF alfa generan una proporción de errores similares en la región NS5B en genomas del VHC circulantes Definido: Como No. de sustituciones de base/ No. total de nucleótidos secuenciados RBV INF alfa Placebo p Nucleótidos 9.13 + 3.09 5.87 + 4.29 3.05 + 2.93 0.100 * 10 -3/sitios/año NS Aa 8.24 + 2.58 4.45 + 5.33 2.94 + 3.13 0.065 Confirma que: La RBV es el mutágeno del VHC clave en el tratamiento en clínica

Tran-- * Tran-- Tranv---

Emergencia de mutación de sustitución en la región NS5B 415 F------Y en respuesta a RBV Objetivo: Si el tratamiento con RBV podría seleccionar ciertas mutaciones de aa Región NS5B antes y después del tratamiento K 254 R D 375 G F 415 Y--------------------------sustitución presente en todos los ptes Q 544 R En el seguimiento emergió la variante NS5B 415 F (Tiene ventaja para la replicación en ausencia de RBV

CONCLUSIONES (DEL ARTICULO) Los resultados demuestran que la variante con Phe----- tir en NS5B sitio 415 se detecto en el genotipo 1a VHC durante la monoterapia con Ribavirina La mutación confiere resistencia a RBV in vivo La RBV tiene efecto directo en RpRd en VHC in vivo.

Conclusiones En HEPATITIS C RT-PCR . Con oligos especificos PCR cuantitativo Genotipos Tratamiento . Inf alfa –Ribavirina Resistencia. Emergen mutaciones especificas, por la terapia con RBV

CUBA PROGRAMA NACIONAL Diagnostico ELISA RT PCR-Secuenciación Tratamiento INF alfa leucocitario INF alfa 2b recombinante Profilaxis Proyecto de vacuna 2006