CT 24 NUEVO DIAGNOSTICO, IDENTIFICACION Y DISTRIBUCION DE ESPECIES DE Leishmania EN EL TERRITORIO COLOMBIANO. Ronald G. Peláez Sánchez, Carlos E. Muskus López, Iván Darío Vélez y Marcel Marín Villa. La leishmaniasis es un conjunto de patologías producidas por varias especies de parásitos del genero Leishmania, que van desde las formas cutáneas con curación espontánea hasta la forma crónica visceral. Es por ello importante la implementación de técnicas de diagnostico e identificación de especies que eviten procesos traumáticos y/o difíciles de realizar, ofreciendo una alta sensibilidad y especificidad. En el presente trabajo se desarrollo la técnica de PCR-RFLP del gen de la proteasa de cisteína, la cual permitió realizar el diagnostico e identificación de las diferentes especies del subgénero Viannia y Leishmania que se encuentran causando la leishmaniasis en Colombia. ANALISIS BIOINFORMÁTICO METODOLOGÍA Identificación de enzimas con cortes diferenciales (NEB CUTTER) Alineamiento de secuencias (CLUSTAL W) Diseños de cebadores específicos (PRIMER 3) ANALISIS EXPERIMENTAL -Cultivos de Leishmania -Toma de muestras de pacientes -Purificación del ADNA Diagnostico por PCR Amplificación de la CPB en las diferentes especies de Leishmania. Nivel de detección de la técnica. Detección RX cruzadas con Tripanosoma y Plasmodium. Identificación de especies mediante (RFLP) APORTES AL ESTUDIO EPIDEMIOLOGICO DE LA ENFERMEDAD IMPLEMENTACION DE LA TECNICA EN EL DIAGNOSTICO CLÍNICO Validación de la prueba diagnostica Diagnostico a partir de DNA extraído de pacientes. Distribución geográfica de las especies de Leishmania en el país (Tipificación de 422 ). Posible incriminación de reservorios DISCUSIÓN: En el presente trabajo se diseñaron tres pares de cebadores, con los cuales se logra amplificar el gen de la proteasa de cisteina en las 6 especies de Leishmania (aportando tres nuevas secuencias a las bases de datos) y logrando con esto el diagnostico molecular de la patología. Mediante análisis bioinformático se obtuvo un patrón de cortes diferenciales en las secuencias de la proteasa de cisteina para identificar cada una de las especies de Leishmania presentes en nuestro país mediante PCR-RFLP . La técnica de PCR tiene la capacidad de detectar hasta 10 parásitos en una muestra y no presenta reacciones cruzadas con ninguno de los dos serotipos de Tripanosoma. La técnica fue exitosa en el diagnostico de 26 pacientes, con una sensibilidad, especificidad y valor predictivo del 100%. Como valor agregado se tipificaron 422 muestras provenientes del sur del país, donde se encontró una alta prevalencia de Leishmania braziliensis. Además se logro el diagnósticos e identificación de 5 perros con lesiones típicas de leishmaniasis indicando la utilidad de esta técnica para el estudio epidemiológico de la enfermedad, tanto en humanos como en reservorios. CONCLUSIÓN: Como resultado final se implemento una técnica con la cual, se puede realizar el diagnostico e identificación de las diferentes especies de Leishmania presentes en nuestro país. Teniendo como valor agregado que es una valiosa herramienta para estudios epidemiológicos, con la cual en un primer estudio , se encontró una mayor prevalencia de Leishmania braziliensis del centro hacia el sur del país, contrario a lo reportado en la literatura, donde se considera a Leishmania panamensis como la especie mas predominante en todo el territorio colombiano.