Bqca. QM Alicia I. Cuesta, Consultora Internacional de la FAO Aseguramiento de calidad EQUIPOS MANIPULACION DE MUESTRAS Norma ISO 17025 Bqca. QM Alicia I. Cuesta, Consultora Internacional de la FAO

Objetivos de la clase: EQUIPOS: Requisitos de la Norma 17025. Equipos habituales de un laboratorio microbiológico. Calibración y verificación de equipos: Definición y concepto. Programas para calibración, verificación, limpieza y mantenimiento. Registros del equipamiento. MANIPULACION DE MUESTRAS: Requisitos de la Norma 17025. Transporte de las muestras. Recepción de las muestras. Manipulación de las muestras. Almacenamiento de las muestras. Disposición final de las muestras.

REQUISITOS: EQUIPOS El laboratorio debe estar provisto de todos los equipos necesarios para la correcta ejecución del ensayo.

Equipos habituales de un laboratorio microbiológico : Material de uso general: Material de vidrio o plástico (Ejemplo: tubos de ensayo, placas de Petri, etc.), instrumentos de muestreo, ansas de siembra, etc. Equipos volumétricos como pipetas, distribuidores automáticos, sembradores en espiral, etc. Instrumentos de medida: termómetros, cronómetros, balanzas, medidor de pH, contadores de colonias, etc. Estufas, autoclaves, baños termostáticos, heladeras, congeladores, campanas de flujo laminar, equipos de filtración, etc.

REQUISITOS: EQUIPOS (cont) Los equipos y su soporte lógico usados en la realización del ensayo y muestreo deben permitir lograr la EXACTITUD REQUERIDA y cumplir con las especificaciones establecidas para los ensayos. Hay equipos cuya exactitud es clave en el impacto sobre la incertidumbre de los resultados, por lo que es imprescindible que cumplan siempre con las especificaciones más relevantes del método. Ejemplo de la temperatura de un baño 45+0.5 º C tengo que tener un termómetro o instrumento de medición que nos permita medir con mucha exactitud esa medida. ¿ Qué operaciones podemos realizar en la práctica para conocer la exactitud de un equipo? Soporte lógico es el software.

Definición: Calibración. Conjunto de operaciones que PERMITEN ESTABLECER, en condiciones especificadas, LA RELACIÓN EXISTENTE ENTRE : los valores indicados por el instrumento de medida o un sistema de medida o un material de referencia y los correspondientes valores conocidos del mensurando. (valores de una magnitud obtenidos mediante un patrón de referencia) Comparo lo que me da mi instrumento con el patrón conocido.

Formas de establecer esta relación es mediante: Tablas de corrección Calibración: Formas de establecer esta relación es mediante: Tablas de corrección Rectas o curvas de calibración otras CALIBRACION Obtengo datos en paralelo del instrumento a calibrar y el patrón cuyo comportamiento conozco. Elimina el error CORRECCION Incertidumbre

Ejemplo: Calibración de termómetro TABLA 1 Termómetro a calibrar (Tx) Termómetro patrón (Tp) ¿Qué hago? 1. Mido n veces a una Temperatura y completo la TABLA 1. Termómetro a calibrar (ºC) Termómetro patrón (ºC) Mido el 0 siempre Tx Tp Baño de agua El baño se pone a Ti

Ejemplo: Calibración de termómetro TABLA 1 Termómetro a calibrar (Tx) Termómetro patrón (Tp) ¿Qué hago? 2. Esto lo realizo para diferentes temperaturas (Ti) según los requerimientos. 3. Calculo la corrección e incertidumbre para cada punto. Termómetro a calibrar (ºC) Termómetro patrón (ºC) Mido el 0 siempre

Certificado de calibración de un termómetro Ejemplo de resultados Indicación del termómetro (º C) Corrección Incertidumbre 5.5 -0.4 +0.1 30.0 0.2 +0.2 36.8 42.1 0.0 +0.3

Certificado de calibración de un termómetro Debe figurar: Descripción e identificación del instrumento que se calibró. Fecha de calibración. Fecha de emisión del certificado de calibración nombre del cliente Metodología empleada para calibrar. Rango de calibración. Resultados: corrección e incertidumbre para cada temperatura. Certificado de calibración de un termómetro

Definición: Incertidumbre de la medición Parámetro asociado al resultado de la medición, que caracteriza la dispersión de los valores que podrían ser razonablemente asignados al mensurando. INDICA LA CALIDAD DE UNA MEDICIÓN.

Relación de exactitud (RE): ISO 100012 recomienda RE>3:1 Preferiblemente hasta 10:1 RE = Especificación Incertidumbre

Definición: VERIFICACIÓN. Confirmación por examen y provisión de evidencia de que los requerimientos especificados han sido satisfechos. Ejemplo: Verificar diariamente una balanza con una pesa calibrada.

Verificación del instrumento de medición TOMO DECISION Asignar a la tarea de medición Reparar/ ajustar Usarlo para otro equipo Declararlo fuera de uso

REQUISITOS: EQUIPOS (cont) Antes de poner en servicio un equipo (incluido el empleado para el muestreo) se lo debe calibrar o verificar con el fin de asegurar que responde a las exigencias especificadas del laboratorio y está conforme a las especificaciones normalizadas pertinentes. El equipo debe ser verificado o calibrado antes de su uso. Soporte lógico es el software. Ejemplo Rto coliformes a 45º C necesito un termómetro con una pequeña incertidumbre ya que la tolerancia es de 0.5º C

REQUISITOS: EQUIPOS (cont) El laboratorio debe documentar e implementar Programas para calibración y/o verificación limpieza, mantenimiento y esterilidad de los equipos cuando sea necesario. (Los que tengan una influencia directa en los resultados de los ensayos). Como parte de un sistema de calidad, el laboratorio debe documentar e implementar programas para la limpieza, mantenimiento, calibración y/o verificación y esterilidad de los equipos cuando sea necesario. El laboratorio debe establecer un programa para la calibración y/o verificación de los equipos que tengan una influencia directa en los resultados de los ensayos. La frecuencia de estas calibraciones y/o verificaciones se establecerá en función de la experiencia documentada y se basará en el uso, tipo y resultados previos de las calibraciones de los equipos. Los intervalos entre sucesivas calibraciones y/o verificaciones deben ser más cortos que el período de tiempo durante el cual se observan desviaciones del equipo fuera de los límites aceptables.

REQUISITOS: EQUIPOS (cont) REQUISITOS PROVEEDORES DE CALIBRACION DE EQUIPOS: La calibración de los equipos debe ser llevada a cabo por laboratorios de calibración que demuestren su competencia y su capacidad de medición y trazabilidad. (Laboratorio acreditado o aceptado por el organismo de acreditación) Las mediciones hechas por el laboratorio de calibración deben ser trazables al Sistema Internacional de Unidades (SI).

de la calibración y/o verificación de los equipos La frecuencia de la calibración y/o verificación de los equipos o patrón de referencia depende de: La naturaleza del equipo. Condiciones de uso. Gravedad de las consecuencias de una falta de calibración y/o verificación. Historia previa del equipo o patrón de referencia. Recomendaciones del fabricante. Depende de la estabilidad que demuestra el equipo.

Directrices para calibración de equipos en el laboratorio de microbiología. G-ENAC-04REV. 2 Marzo 97.Guía para la acreditación de laboratorios que realizan análisis microbiológicos Material volumétrico, requerimiento: calibración por pesada requiere la tolerancia.

Directrices para la puesta en servicio y verificación de equipos en el laboratorio de microbiología. G-ENAC-04REV. 2 Marzo 97.Guía para la acreditación de laboratorios que realizan análisis microbiológicos Autoclave: se realiza perfil térmico

Directrices para la puesta en servicio y verificación de equipos en el laboratorio de microbiología. G-ENAC-04REV. 2 Marzo 97.Guía para la acreditación de laboratorios que realizan análisis microbiológicos

REQUISITOS: EQUIPOS (cont) Es de primordial importancia que el laboratorio cuente con un programa formal, documentado e implementado de mantenimiento de equipos. El mantenimiento de los equipos esenciales debe realizarse a intervalos especificados. (por el departamento de mantenimiento, por el proveedor, fabricante, etc). En el documento ISO 7218: 1996 (E), se facilitan directrices sobre el mantenimiento de los equipos.

Directrices para el mantenimiento de equipos en el laboratorio de microbiología. G-ENAC-04REV. 2 Marzo 97.Guía para la acreditación de laboratorios que realizan análisis microbiológicos

REQUISITOS: EQUIPOS (cont) PARA CADA EQUIPO UTILIZADO EN LOS ENSAYOS EL LABORATORIO DEBE TENER: Identificación inequívoca y registro del equipo (con su soporte lógico o software). Los resultados de las calibraciones y verificaciones. Las instrucciones actualizadas de uso y mantenimiento del equipo disponibles (incluido el manual suministrado por el fabricante) para el uso del personal del laboratorio. EN EL IDIOMA DEL PAIS Deben estar disponible las instrucciones actualizadas de uso y mantenimiento del equipo (incluido el manual suministrado por el fabricante) para el uso del personal del laboratorio. EN EL IDIOMA DEL PAIS

REQUISITOS: EQUIPOS (cont) Los registros del equipamiento deben incluir como mínimo: Nombre del fabricante, modelo, número de serie u otros datos que lo identifique. Datos de comprobación de cumplimiento de las especificaciones a su ingreso. Ubicación del equipo dentro del laboratorio, cuando corresponda (ver Plano del laboratorio) Fecha de adquisición y puesta en servicio. Instrucciones del fabricante o la referencia a su ubicación. Informes de todas las calibraciones (debe contener fecha de calibración y resultados), fecha prevista de la próxima calibración, los ajustes, los criterios de aceptación. Plan de mantenimiento (cuando corresponda ) y mantenimiento llevado a cabo hasta la fecha Todo daño, mal funcionamiento, modificación o reparación del equipo. Esto debe mantenerse durante toda la vida útil del equipo y hasta dos años después de sacarlo de servicio. Cada equipo tiene una carpeta que contiene todo esto

REQUISITOS: EQUIPOS (cont) Los equipos bajo el control del laboratorio que requieren una calibración deben ser rotulados y identificados Se deben colocar las etiquetas en el equipo : Identificación del equipo. Indicando si el equipo está en funcionamiento o fuera de servicio. Su estado de calibración. Ejemplo: Etiqueta A: Nº de inventario. Etiqueta B: color verde: equipo/patrón en funcionamiento o color rojo: equipo/patrón fuera de período de calibración/verificación. Etiqueta C: Fecha de calibración/verificación Fecha de la próxima calibración/verificación.

Autoclave Además de controlar directamente la temperatura, tiempo y presión del autoclave, se comprueba la eficacia de su funcionamiento en cada ciclo de esterilización o descontaminación. mediante: Indicadores Químicos. La cinta de autoclave o las tiras indicadoras (controles químicos) permiten distinguir que una carga ha sido procesada. Indicadores Biológicos.

Autoclave Los controles biológicos: Evalúan la efectividad de la totalidad del proceso de esterilización. Contienen esporas de género Bacillus. En todos los casos los resultados obtenidos de controles químicos y biológicos se deben registrar. Debe haber un registro de procesos de esterilización y descontaminación en donde consten las temperaturas y tiempos.

Verificación de la temperatura de trabajo: Se realiza un monitoreo continuo de las temperaturas de las estufas, heladeras, congeladores usados para la realización del ensayo. La temperatura del baño termostático se registra antes de su uso. Registro de control de temperatura: Equipo. Nº de inventario. Instrumento: Corrección e incertidumbre del termómetro. Rango de aceptación. Tolerancia. Los termómetros se calibran en un laboratorio que permita seguir la trazabilidad a patrones nacionales o internacionales

Ejemplo Cálculo del rango de aceptación REGISTRO DE CONTROL DE TEMPERATURA: Equipo: estufa de cultivo de 30º C. Nº de inventario_ _ _ Instrumento: termómetro Nº de inventario_ _ _ CORRECCIÓN DEL TERMÓMETRO (º C ): + 0.3 INCERTIDUMBRE DEL TERMÓMETRO (º C ): + 0.2 TOLERANCIA según metodología usada + 1 º C

Ejemplo Cálculo del rango de aceptación (cont) Rango aceptado por la técnica es 29 y 31 º C Cuando leo en el instrumento 29º C en realidad tengo que leer (es 28.7+0.2) o sea 28.9. Cuando leo en el instrumento 31º C en realidad tengo que leer (es 30.7-0.2) o sea 30.5. Rango de aceptación es 28.9 a 30.5 º C RANGO DE LECTURA aceptada de las temperaturas leídas con ese termómetro con esa calibración.

Síntesis parcial Requisitos equipos: Los equipos y su soporte lógico usados en la realización del ensayo y muestreo deben permitir lograr la exactitud requerida y cumplir con las especificaciones establecidas para los ensayos. El laboratorio debe documentar e implementar programas para la limpieza, mantenimiento, calibración y/o verificación y esterilidad de los equipos cuando sea necesario.

MANIPULACIÓN DE LAS MUESTRAS El laboratorio debe tener procedimientos para : El transporte La recepción La protección, el almacenamiento. La manipulación La conservación o la disposición final de las muestras a ensayar. Ahora nos ocuparemos de la muestra a ser analizada.

Requisitos: MANIPULACIÓN DE LAS MUESTRAS MUY IMPORTANTE: El laboratorio debe tener un sistema para la identificación unívoca de las muestras a ensayar. La identificación debe ser conservada a lo largo de la vida de la muestra en el laboratorio. El sistema debe ser diseñado y operado de modo tal que asegure que las muestras no puedan ser confundidas físicamente o cuando se haga referencia a ellas en registros u otros documentos. Auditorias: seguimiento vertical de una muestra. Chequeo de ese requisito de la Norma.

Requisitos: MANIPULACIÓN DE LAS MUESTRAS El laboratorio debe tener: procedimientos e instalaciones apropiadas para evitar el deterioro, la pérdida o daño de las muestras durante su: manipulación, preparación y almacenamiento.

Diagrama de flujo de manipulación de las muestras

REQUISITOS: Transporte de las muestras. Se debe evitar durante el transporte al laboratorio cualquier alteración de las muestras. Las muestras deben ser enviadas con la mayor brevedad posible al laboratorio. Se documenta quién es el responsable del transporte . El transporte debe realizarse: Acondicionados adecuadamente dependerá del estado físico del producto (líquido, sólido o semisólido). En recipientes adecuados A temperaturas adecuadas de conservación del alimento.

Transporte de las muestras: Dependiendo del tipo de alimento que se trate, se prestará particular atención en mantener las temperaturas de almacenamiento durante el transporte en los rangos aceptables según figura en el cuadro. Referencia: Norma ISO 7218:1996 (E)

REQUISITOS: RECEPCIÓN DE LAS MUESTRAS. Las condiciones de llegada al laboratorio de las muestras deben ser verificadas por el personal perteneciente al mismo. Si la muestra es: Insuficiente o se encuentra en mal estado por deterioro físico, temperatura inapropiada, envase roto o etiquetado defectuoso: El laboratorio debe consultar con el cliente antes de decidir si analiza o rechaza la muestra. Debe indicar su estado en el informe del ensayo. Una vez recibidas las muestras se analizarán lo antes posible. Si la muestra es insuficiente o se encuentra en mal estado por deterioro físico, temperatura inapropiada, envase roto o etiquetado defectuoso, el laboratorio debe consultar con el cliente antes de decidir si analiza o rechaza la muestra. Ejemplo: muestras de leche cruda que llegan al laboratorio a una temperatura de 20º C, (el máximo dado por la especificación adoptado por el laboratorio es 5º C).

Recepción de las muestras. El personal técnico debe etiquetar y almacenar cada muestra: N ° PE: N ° muestra: Fecha de ingreso al laboratorio: Descripción de la muestra: Fecha vencimiento de la muestra

Manipulación de las muestras: La preparación de las muestras y porciones de ensayo realizado por el laboratorio inmediatamente antes del ensayo debe efectuarse conforme a procedimientos documentados basados en normas nacionales o internacionales, si es que existen, o a métodos internos validados. Los procedimientos de preparación de las muestras y porciones de ensayo deben diseñarse teniendo en cuenta las directrices generales contenidas en los documentos en ISO 6887 e ISO 7218. Se debe llevar los registros del desarrollo del trabajo.

REQUISITOS Almacenamiento de las muestras: Las muestras que se encuentren a la espera de ser analizadas deben almacenarse en condiciones adecuadas para reducir al mínimo cualquier modificación en la población microbiana presente. El laboratorio debe definir y registrar dichas condiciones de conservación.

Esto debe ser mencionado en el informe de ensayo. Los tiempos límites de almacenamiento dependerán del tipo de producto Referencia: Norma ISO 7218:1996 (E) (1) Si no se puede procesar en ese tiempo, las muestras se pueden congelar por debajo -18 º C. Esto debe ser mencionado en el informe de ensayo. Precaución: En algunos productos el congelamiento produce un cambio de la composición de la flora. En algunos casos existe la posibilidad de agregar un conservante permitido para prolongar el tiempo permitido de almacenamiento y su procesamiento posterior.

REQUISITOS Disposición final de las muestras: Debe existir un procedimiento documentado para la conservación y eliminación de muestras. Las muestras deben conservarse hasta que se hayan obtenido los resultados del ensayo, o más tiempo según sea necesario. Cuando se sepa que algunas porciones de muestras de ensayo del laboratorio están altamente contaminadas, deben descontaminarse antes de su eliminación.

REQUISITOS Disposición final de las muestras: La correcta eliminación de materiales contaminados puede no afectar directamente a la calidad de los análisis de las muestras, aunque los procedimientos deben diseñarse para reducir al mínimo la posibilidad de contaminación del lugar donde se realiza el ensayo o los materiales utilizados en el mismo. No obstante, es un aspecto de la correcta gestión de un laboratorio y debe respetarse la legislación nacional e internacionales sobre medio ambiente, salud y seguridad (véase también ISO 7218).

Síntesis final El laboratorio debe tener procedimientos para : el transporte, recepción, la protección, el almacenamiento, la manipulación y disposición final de las muestras. El laboratorio debe tener un sistema para la identificación unívoca de las muestras a ensayar, conservada a lo largo de la vida de la muestra en el laboratorio. Se deben registrar los apartamientos de las condiciones especificadas para las muestras en el momento de su recepción en el laboratorio. El laboratorio debe tener instalaciones apropiadas para evitar el deterioro, la pérdida o daño de las muestras durante manipulación, preparación y almacenamiento