La importancia del Laboratorio de Biología Molecular Hepatitis Virales La importancia del Laboratorio de Biología Molecular Bioquímico Alejandro Kuc Servicio de Inmunología Hospital “Dr. Julio C. Perrando”

Virus de la Hepatitis C Bioq. Alejandro Kuc *Servicio de Inmunología Hospital “Dr. Julio C. Perrando” *Cátedra Virología Clínica FaCENa - UNNE

HCV Agente etiológico de las HNANB transmitidas por transfusiones Flia: Flaviviridae Género: hepacivirus Esférico Envuelto ARN (+) sc

evasión de la respuesta inmune Genoma capside Proteina de cubierta proteasa/helicasa RNA polimerasa 5’ URT 3’ URT core E1 E2 NS2 NS3 NS4 NS5 región hipervariable evasión de la respuesta inmune 7 7 7

Variabilidad Genética Genotipo: >70% identidad 6 hasta ahora Subtipo: > 90% Cuasiespecie: Intraindividuo En Argentina: 1a: 39% 1b: 33% 2a: 19% 3a: 7%

Hepatitis por virus C Vías de transmisión Intrafamiliar 0-2% Percutánea 90-50% Vertical 5 % ¿Desconocido? 5%

Vías de transmisión Exposición a sangre o fluidos contaminados Transmisión vertical: madre-recién nacido Depende de la carga viral (> 2 x 10 6 copias/ml)‏ Aumenta en coinfección HIV-HCV Lactancia materna: no contraindicada Transmisión horizontal: exposición percutánea o de las membranas mucosas al material infectado

Hepatitis C – Datos Clínicos Periodo de Incubación: Media 6-7 sem Clínica (ictericia): 20-30% Hepatitis crónica (HCV RNA>6 meses): 70-85% Manif. Extrahepáticas: 40% Inmunidad: No Anticuerpos protectores 8 8 9 8

Historia natural INFECCIÓN 10 años Hepatitis crónica 15 años Cirrosis Hepatocarcinoma

Infección Aguda

Infección Crónica

Patrones de Viremia

14 14 14 15

Diagnóstico de Laboratorio Anticuerpos Anti-VHC: F(-) en la fase aguda y en inmunosuprimidos. VENTANA: 7-8 semanas. EIA o RIA: Screening. S: 98,8-100% RIBA o LIA: Ensayo suplementario para confirmar. E: 100% Antígeno VHC - mediante EIA: Acorta el período de ventana en el screening RNA-VHC: Cualitativo: Puede utilizarse para diagnosticar la infección por VHC en la fase aguda. Cuantitativo (Carga Viral): Para monitorizar la respuesta a la terapia antiviral Genotipificación

Marcadores durante la infección temprana HCV RNA Anti-HCV 12 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 Infection Day 0 HCV RNA Day 12 HCV Antibody Day 70

NAT Cualitativa Acorta el período de Ventana: baja de 2 meses a 1-2 semanas Importante en Bancos de Sangre Accidentes transfusionales: 1/276.000 a 1/2.000.000 Control posterapéutico Dx de Hepatitis Aguda

NAT Cuantitativa (Carga Viral) Pronóstico de evolución y respuesta al Tto La carga viral basal Curva viral (4 y 12 sem) Indica el cese del tratamiento No esta relacionada directamenete con riesgo de transmisión sexual ni nivel de daño hepático

Genotipificación Predice la respuesta al Tto y la duración del mismo Determina la dosis de Ribavirina Genotipos 2 y 3 responden mejor y mas rápido que 1

Genotipificación Secuenciación es el Gold Standard 5’ 3’ core E1 E2 NS2 NS3 NS4 NS5 Secuenciación es el Gold Standard Amplificación de secuencias genotípicas especificas + RFLP Core 5´URT NS5 Hibridación Reversa (INNO-LiPA HCV, Innogenetics) Serotipifiación de genotipos (MurexTM HCV Serotyping 1 Assay)

Algoritmo Diagnóstico

Accidentes tranfusionales y avance diagnóstico

Importancia de la BM en el Seguimiento y Tratamiento

Hepatitis C Oculta HCV erradicada: HCV RNA (-) >24 sem de terminado el Tto Pero se observo que 40-45% de estos pacientes pueden tener HCV RNA detectable en biopsias Hep o Celulas mononucleares de Sangre circulante

Hepatitis por virus c Profilaxis. No se dispone de vacuna (gran variabilidad genómica del virus)‏ No se dispone de gamma globulina

Profilaxis de la Hepatitis C Screening de donantes de sangre y órganos Modificación de conductas de riesgo Precauciones con la sangre y fluidos corporales 15 15 28 15