Diagnóstico Virológico

Presentación del tema: "Diagnóstico Virológico"— Transcripción de la presentación:

1 Diagnóstico Virológico
Bioq. Alejandro Kuc Servicio de Inmunología - Hospital “Dr. Julio C. Perrando” Cátedra de Virología - FaCENA - UNNE Área de Inmunología - IMR - UNNE

2 Importancia Determinar una intervención terapéutica
Definir el pronóstico en la evolución de un paciente Indicar la necesidad de una vacunación Adoptar medidas de salud pública en una comunidad: epidemiología. Tendencia: Sensibilidad y Rapidez

3 Métodos de Diagnóstico
Directos: presencia de virus en muestras clínicas Agente infeccioso: aislamiento viral Partícula viral: microscopía electrónica Antígenos virales: inmunomarcación Genomas virales: biología molecular Indirectos: respuesta de anticuerpos específicos antivirales en el suero del paciente

4 Tipo de Muestras Virus respiratorios: aspirado nasofaríngeo
Lesiones Cutáneas: raspado e hisopado Sangre: aislamiento viral Suero: búsqueda de anticuerpos (serología) Materia Fecal: enterovirus Orina: aislamiento de CMV LCR: enterovirus y parotiditis Muestras oculares: hisopado Tejidos: aislamiento viral o inmunohistoquímica

5 Transporte y conservación
Aislamiento Inmediatamente (inactivación y contaminación) No congelar Conservación Temp amb: horas 4ºC: 1-2 días -20ºC: meses -70ºC: años

6 Métodos Directos

7 1- Aislamiento Viral Huevos, Animales o Células
Tipos de cultivos celulares Primario: directamente del tejido humano o animal; 1-2 subpasajes Diploide: derivado del tejido fetal o de RN; subpasajes Hetroploide: extraídas de tejido tumoral o tranformado; infinitos subpasajes Variación en susceptibilidad Es indispensable el Diagnóstico presuntivo

8 Inoculación e incubación (ATB)
Decontaminar muestras no estériles Inocular en tubos de cultivo: µL de muestra en medio con ATB 1 hr a 37º para permitir la adsorción Añadir medio de cultivo y cambiarlo cada 2-3 días.

9 Detección de los efectos de los virus
Acción citopatogénica: tipo, magnitud, velocidad y cultivo

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12 Detección de los efectos de los virus
Acción citopatogénica: tipo, magnitud, velocidad y cultivo Hemadsorción

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14 Detección de los efectos de los virus
Acción citopatogénica: tipo, magnitud, velocidad y cultivo Hemadsorción Hemaglutinación

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16 Detección de los efectos de los virus
Acción citopatogénica: tipo, magnitud, velocidad y cultivo Hemadsorción Hemaglutinación Interferencia Dx presuntivo: debe confirmarse Identificación Inmunofuoresencia Imunoperoxidasa Cuantificación de virus Titulación de punto final Plaqueo bajo agarosa

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18 2- Microscopía Electrónica
Métodos Inmunoelectromicroscopía Coloración negativa Ventajas Rápido (pocas muestras) Desventajas Costo del ME Baja Sensibilidad

19 3- Inmunoflourescencia
Técnica Directa Indirecta Ventajas Muestra estable Muy Sensible Muy Específica Rápido Desventajas Costo del MF Observador experimentado

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27 4- Aglutinación Ventajas Desventajas Sencillo Rápido
No requiere equipamiento Desventajas Poco especifica

28 5- Enzimoinmunoensayo (EIA)
Ventajas Muy Sensible No se necesita observador experimentado Gran numero de muestras simultáneamente Automatizable Desventajas Falsos Positivos (necesita confirmación)

29 Enzyme Linked Immuno- Sorbent Assay
ELISA Enzyme Linked Immuno- Sorbent Assay

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48 Tests Rápidos en un solo paso

49 5- Radioinmunoensayo (RIA)
Fundamento idéntico a ELISA Ventajas Similar al ELISA Desventajas Reactivos Inestables Residuos Radiactivos Relativamente mas Costoso

50 Métodos Indirectos

51 Métodos Indirectos Detección de IgM Detección de IgG Seroconversión
Infección aguda Infección congénita FR: f+ ↑ IgG: f- IgM Captura Detección de IgG Seroconversión Recién Nacidos Avidez Δ >4 títulos

52 Técnicas Aglutinación de partículas IFI EIA RIA Western Blott ELISA
LIA RIA Western Blott

53 Western Blot Muy especifica Método confirmatorio

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56 Western Blot

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