RESISTENCIA EN HIV Bioq. María Eugenia Ochiuzzi Bioq. Ariel Gianecini

Presentación del tema: "RESISTENCIA EN HIV Bioq. María Eugenia Ochiuzzi Bioq. Ariel Gianecini"— Transcripción de la presentación:

1 RESISTENCIA EN HIV Bioq. María Eugenia Ochiuzzi Bioq. Ariel Gianecini
Htal. Francisco J. Muñiz

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3 . Linfocitos T . Células Dendríticas
. Linfocitos B Stem Cells . Macrófagos Células NK

4

5 CCR5 VIRUS R5 Infecta Macrófagos Expresión en etapas tempranas CXCR 4 VIRUS X4 Infecta Linfocitos Expresión en etapas tardías

6 C5/X4

7 Cuasiespecies 10 – 10 Virus/día 10 Mutaciones/día 9 10 6
“Fitness” Viral

8 Viral Sex

9 Cuasiespecies Viral Sex SUBTIPOS VIRALES
Formas Recombinantes Circulantes

10 B/F

11 INHIBIDORES DE INTEGRASA INHIBIDORES DE FUSIÓN/ENTRADA
ANTIRETROVIRALES INHIBIDORES DE INTEGRASA INHIBIDORES DE TR INHIBIDORES DE P INHIBIDORES DE FUSIÓN/ENTRADA

12 NRTI (Inhibidores nucleosídicos/ nucleotídicos de TR)
-Análogos de timidina: Zidovudina (AZT ) Stavudina (D4T) -No análogos de timidina: Lamivudina (3TC) Didanosina (DDI) Zalcitabina (DDC) Abacavir (ABC) Emtricitabina (FTC) Nucleotídicos: Tenofovir (TFV)

13 NNRTI (Inhibidores no nucleosídicos de TR)
Nevirapina Efavirenz Delavirdina Etravirina (NVP) (EFV) (DLV ) (TMC 125)

14 INHIBIDORES DE PROTEASA
Saquinavir (SQV) Ritonavir (RTV) Indinavir (IDV) Nelfinavir (NFV) Amprenavir (APV) Fosamprenavir (APV) Lopinavir (LPV) Atazanavir (ATV) Tipranavir (TPV) Darunavir (TMC 114)

15 INHIBIDORES DE ENTRADA
-Inhibidores de attachment -Antagonistas de los co-receptores -Inhibidores de fusión

16 Inhibidores de attachment
Inhibidores de fusión Enfuvirtide (T-20) membrana viral gp120 gp41 A Inhibidores de attachment BMS-488,043, TNX-355

17 Inhibidores de CCR5/CXCR4
Inhibidores de CXCR4: AMD Inhibidores de CCR5: AK602, PRO 140, SCH-C, SCH-D, TAK-652, UK

18 INHIBIDORES DE LA INTEGRASA INHIBIDORES DE MADURACIÓN

19 Terapia ARV: - clínica del paciente - CD4 -carga viral
Terapia ARV: - clínica del paciente CD carga viral * Indicado : CD4 ‹ 300 cél/μl y/o paciente sintomático

20 HAART: TERAPIA COMBINADA ALTAMENTE ACTIVA NRTIs NNRTI/IP TDF + 3TC lovinapir/ ritonavir TDF + FTC fosamprenavir/ ritonavir ABC + 3TC efavirenz nevirapine AZT + 3TC saquinavir/ ritonavir AZT + FTC

21 Efectos adversos:. toxicidad mitocondrial. alteraciones GI
Efectos adversos: .toxicidad mitocondrial alteraciones GI pancreatitis toxicidad medular .alteraciones renales hepatotoxicidad alteraciones del SNC polineuropatía periférica .alteraciones neurológicas acidosis láctica .alteraciones hematológicas reacciones de alergia .necrosis avascular osteopenia, osteoporosis .dislipemia hiperglucemia .lipodistrofia

22 Efectos adversos:. toxicidad mitocondrial. alteraciones GI
Efectos adversos: .toxicidad mitocondrial alteraciones GI pancreatitis toxicidad medular .alteraciones renales hepatotoxicidad alteraciones del SNC polineuropatía periférica .alteraciones neurológicas acidosis láctica .alteraciones hematológicas reacciones de alergia .necrosis avascular osteopenia, osteoporosis .dislipemia hiperglucemia .lipodistrofia

23 Efectos adversos:. toxicidad mitocondrial. alteraciones GI
Efectos adversos: .toxicidad mitocondrial alteraciones GI pancreatitis toxicidad medular .alteraciones renales hepatotoxicidad alteraciones del SNC polineuropatía periférica .alteraciones neurológicas acidosis láctica .alteraciones hematológicas reacciones de alergia .necrosis avascular osteopenia, osteoporosis .dislipemia hiperglucemia .lipodistrofia

24 Efectos adversos:. toxicidad mitocondrial. alteraciones GI
Efectos adversos: .toxicidad mitocondrial alteraciones GI pancreatitis toxicidad medular .alteraciones renales hepatotoxicidad alteraciones del SNC polineuropatía periférica .alteraciones neurológicas acidosis láctica .alteraciones hematológicas reacciones de alergia .necrosis avascular osteopenia, osteoporosis .dislipemia hiperglucemia .lipodistrofia

25 Fracaso terapéutico Variantes Resistentes

26 tiempo niveles de RNA viral
cuasiespecies virales originales presión de selección ejercida por drogas clon resistente clones resistentes tiempo niveles de RNA viral cuasiespecies virales nuevas

27 RESISTENCIA PRIMARIA. 10-20%: Europa y USA. 2003-2004: NRTI: 7
RESISTENCIA PRIMARIA *10-20%: Europa y USA * : NRTI: 7.1% NNRTI: 9.1% IP: 3.2% *7.7% :Argentina

28 Resistente Resistente Inicio de tto Infección tiempo
Replicación continua Mutaciones primarias Mutaciones secundarias Sensible

29 Resistencia a NRTI

30 Resistencia a NRTI

31 Mutaciones - NRTI

32 Resistencia a NNRTI

33 Mutaciones - NNRTI

34 Resistencia a IP

35 Resistencia a Inhibidores de Entrada

36 Fenómenos asociados a Resistencia: -R cruzada -Reversión de la R -R múltiple: MDR

37 Fenómenos asociados a Resistencia: -R cruzada -Reversión de la R -R múltiple: MDR

38 Fenómenos asociados a Resistencia: -R cruzada -Reversión de la R -R múltiple: MDR

39 Fenómenos asociados a la Resistencia: -R cruzada -Reversión de la R -R múltiple: MDR

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41 ENSAYOS DE RESISTENCIA ->10% de R primaria: realizar estudio de Resistencia -pacientes que no responden al tratamiento ‹ tiempo posible desde diagnóstico de HIV > 1000 copias/ml no detectan especies minoritarias o presentes en SNC, tracto genital no interrumpir el tratamiento ENSAYOS GENOTÍPICOS Y FENOTÍPICOS

42 -Secuenciación directa: - Método de Sanger (ddNTP) Gene Chip -Mutaciones puntuales: - PCR alelo específica LIPA GENOTIPO

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44 Análisis de secuencias
-HIV Genotyping System (Applied Biosystem) -TrueGene (Visible Genetics)

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47 Gene Chip -HIV PRT Gene Chip Assay (Affymetrix)

48 * PCR alelo específico *LIPA

49 INCONVENIENTES -diversidad genética del HIV1 -Interpretación del genotipo

50 Métodos Fenotípicos IC 50 IC 90

51 Métodos Fenotípicos - Ensayos Convencionales
. Ensayo de Reducción de Placa o Foco Sincicial . Inhibición de la Producción de Antígeno p24 - Ensayos Virus Recombinantes

52 Ensayo Convencional P24/TR CMSP pac CMSP Stock Viral Cultivo Celular
Células Mononucleares Sangre Periférica . Requieren CMSP donantes sanos Stock Viral . Seleccionan subpoblaciones virales . Muy laboriosos y de alto riesgo Cultivo Celular P24/TR

53 Plasma/Suero CMSP RT-PCR TR PR Línea Celular Vector Viral

54 Cut-Off FC = Cut- Off FC > Cut- Off Respuesta Máxima
Respuesta Mínima

55 Factor Ponderado de Resistencia Mutaciones Asociadas a Resistencia
Fenotipo Virtual Secuencia de nucleótidos de la muestra (ensayo genotípico de resistencia) BASE DE DATOS - Virco Genotipo Fenotipo RLM cada droga ARV MARs RWFs Factor Ponderado de Resistencia FC Mutaciones Asociadas a Resistencia

56 Directa SI Sencillas SI
Propiedades Determinación de sensibilidad Interpretación de Resultados Detección precoz de resist. Información genética complementaria Efecto de combinación de diferentes mutaciones Sensibilidad para combianciones de drogas Detección de cuasiespecies Complejidad M. Genotípicos Indirecta M. Fenotípicos Directa Compleja SI NO Sencillas Sencilla NO SI Compleja No variantes < 20% No variantes < 20%

57 Utilidad Genotipo y Fenotipo
Fracaso Terapéutico Información Fenotípica Información Genotípica Complejidad Mutacional / Experiencia Tratamiento

58 Conclusiones Mejorar la potencia y farmacocinética de las drogas
Esquemas de dosificación mas simples Desarrollo de nuevas drogas de mayor potencia y menor toxicidad Nuevas técnicas de menor complejidad y mayor facilidad de interpretación Detección precoz de mutantes resistentes emergentes

59 Muchas Gracias !!!!