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CULTIVOS Métodos Tradicional y Automatizado Dra. Susana Poggi Lab. de Micobacterias Dr. Abel Cetrangolo Cátedra de Neumonología – Inst. Dr. Raúl Vaccarezza.

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1 CULTIVOS Métodos Tradicional y Automatizado Dra. Susana Poggi Lab. de Micobacterias Dr. Abel Cetrangolo Cátedra de Neumonología – Inst. Dr. Raúl Vaccarezza Hospital F.J. Muñiz.

2 CARACTERISTICAS DEL CULTIVO Complementa a la baciloscopía, pone en evidencia bacilos viables de la muestra (10 – 100 b/ml). Tiene mayor sensibilidad, es más compleja y más cara que la baciloscopía. Caracteriza los bacilos y permite diferenciar el M. tuberculosis del MOTT. Permite hacer ATB. Tiene 100% de especificidad. Es el método de referencia con el que se tiene que evaluar todo nuevo método.

3 REQUERIMIENTOS QUE LIMITAN LA IMPLEMENTACION DE CULTIVOS Mayor dedicación del personal. Entrenamiento en prácticas de mayor riesgo biológico. Equipos de mediano y alto costo con mantenimiento asegurado. Laboratorio espacioso con direccionamiento y purificación del aire.

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5 POBLACIONES MICROBIANAS EN LAS LESIONES DE LA TUBERCULOSIS HUMANA

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7 FORMAS DE PRESENTACION SEGÚN MEDIO DE CULTIVO Formación de colonias en medio sólido (Löwenstein Jensen y Stonebrink). Turbidez en un caldo (Dubos). Cambio de color en sensor incorporado (MBBact) o emisión de fluorescencia (MGIT) cuando el bacilo libera CO 2 o consume O 2. Medición con isótopos radiactivos de CO 2 (Bactec 460) liberado por las micobacterias y medido en una escala.

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13 COMPOSICION DEL MEDIO DE LÖWENSTEIN-JENSEN

14 COMPOSICION DEL MEDIO DE STONEBRINK

15 COMPOSICION DEL MEDIO DE MIDDLEBROOK

16 PREPARACION DE MUESTRAS PARA REALIZAR CULTIVOS Muestras con flora acompañante decontaminar con NaOH al 4% (se puede agregar Nacetil-cisteína ) neutralización con SO 4 H 2 al 12% lavado con agua (método de Petroff). Muestras tomadas asépticamente de sitio estéril: se siembran sin tratar y tratadas con el método de Petroff.

17 SEGUIMIENTO DEL CULTIVO Siembra Verde (ácido) Amarillo (básico) A las 48 hs se tapa, se revisa que no hubiera contaminación. Revisar la estufa cada 7/10 días. Sacar los positivos e informar. Descartar los negativos a los 60 días.

18 LECTURA DE CULTIVOS Fecha en que se observó el cultivo. Cuantificación de colonias Positivo 1 a 19 colonias + 20 a 100 colonias colonias separadas +++ colonias incontables Morfología de las colonias (rugosas, lisas, otras características peculiares) Pigmentación (no pigmentada, amarillenta, anaranjada)

19 CARACTERISTICAS DEL BACILO La luz solar, la desecación y el calor son bactericidas. El fenol, formol, formalheido e hipoclorito de sodio son letales. Puede resistir a bajas temperaturas. (2 a 4º C hasta -70º C). También a ciertos desinfectantes como trifosfato de Na y a bases fuertes como el NaOH. Se divide cada 18/24 hs, es aeróbeo y una atmósfera de CO 2 al 10% favorece su crecimiento.

20 IDENTIFICACION DEL M. tuberculosis Colonias rugosas, secas de color crema. Test de identificación positivo y NAP. Métodos moleculares (sondas). Pruebas bioquímicas. Niacina + Catalasa inhibida a 68º C Nitratasa + Velocidad de desarrollo lenta.

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22 MEDIOS LIQUIDOS Dubos Cepario Reactivación de cepas CIM Middlebrook Bactec MBBact Mgit

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