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TALLER DE PRUEBAS BIOQUÍMICAS BÁSICAS UTILIZADAS EN EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA UNIVERSIDAD CENTROOCCIDENTAL LISANDRO ALVARADO DECANATO DE CIENCIAS.

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1 TALLER DE PRUEBAS BIOQUÍMICAS BÁSICAS UTILIZADAS EN EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA UNIVERSIDAD CENTROOCCIDENTAL LISANDRO ALVARADO DECANATO DE CIENCIAS DE LA SALUD DEPARTAMENTO DE MEDICINA PREVENTIVA Y SOCIAL SECCION DE MICROBIOLOGÍA Microbiología Médica I Yudy Aranguren, octubre 2011

2 PASOS PARA EL DIAGNOSTICO: 1.- MUESTRA: 2.- DIRECTO: Coloraciones: Gram 3.- CULTIVO 4.- PRUEBAS BIOQUIMICAS

3 PRUEBAS BÁSICAS PARA EL DIAGNÓSTICO MICROBIOLÓGICO DE COCOS GRAM POSITIVO

4 PRUEBA DE LA CATALASA La determinación de la presencia de catalasa Se pone en contacto una pequeña cantidad de cultivo bacteriano de horas de incubación, con en peróxido de hidrógeno (H 2 O 2 ) al 3%. La liberación de O 2 indica la presencia de catalasa. H 2 O 2 + catalasa = H 2 O + ½ O 2 Son catalasa positivo: Son catalasa negativo:

5 PRUEBA DE LA REDUCCIÓN DE NITRATOS A NITRITOS Permite determinar la capacidad de un organismo de reducir el nitrato en nitritos por algunas especies bacterianas que poseen la enzima nitrato-reductasa - + Se agrega a un cultivo en caldo unas gotas de: - Reactivo A: solución de dimetilnaftilamina 0,6%. - Reactivo B: solución de ácido sulfanílico 0,8%. Se observa un cambio de color: Positivo: Rojo ladrillo Negativo: Sin cambio de color

6 AGAR SALADO MANITOL La fermentación de un carbohidrato (azucares) por un microorganismo en particular ayuda a su identificación. - + FERMENTACIÓN DE CARBOHIDRATOS La acidez que se produce en el medio se pone en evidencia a través del cambio de color de un indicador de pH Se puede evidenciar la producción de gas

7 PRUEBAS SEGUNDARIAS 1.- COAGULASA 2.- SENSIBILIDAD O RESISTENCIA A LA NOVOBIOCINA

8 PRUEBA DE LA COAGULASA COAGULASA POSITIVANEGATIVA Staphylococcus aureus Staphylococcus epidermidis Staphylococcus saprophyticus La determinación de la presencia de la enzima coagulasa: Se pone en contacto una pequeña cantidad de cultivo bacteriano con plasma con anticoagulante e incubar 4 horas a 37ºC.

9 PRUEBA DE SENSIBILIDAD

10 SENSIBILIDAD A LA NOVOBIOCINA SENSIBLE-SIN CRECIMIENTO RESISTENTE-CON CRECIMIENTO Staphylococcus epidermidis Staphylococcus saprophyticus SENSIBILIDAD A LA NOVOBIOCINA NOVOBIOCINA Con crecimiento alrededor del disco de Novobiocina Sin crecimiento alrededor del disco de Novobiocina

11 - + CRECIMIENTO EN ALTAS CONCENTRACIONES DE SAL COCOS GRAM POSITIVOS Género Staphylococcus crece a altas concentraciones de sal (7% NaCl) Género Streptococcus NO crece a altas concentraciones de sal (7% NaCl) Género Enterococcus crece a altas concentraciones de sal de 6,5% per o NO a 7% NaCl

12 Agar Salado Manitol: Crecimiento con o sin fermentación de manitol 1.- Género Streptococcus no crece a 7% de NaCl 3.- Staphylococcus aureus crece y fermenta el manitol (color amarillo del medio) 2.- Staphylococcus epidermidis y Staphylococcus saprophyticus Crecen y NO fermentan el manitol (color rosado del medio) CRECIMIENTO EN ALTAS CONCENTRACIONES DE SAL

13 PATRONES DE HEMÓLISIS

14 ALFA BETA GAMMA AGAR SANGRE BETA: Lisis total de los glóbulos rojos GAMMA: Sin lisis ALFA: Lisis parcial de los glóbulos rojos

15 Prueba de CAMP: Las especies del genero Streptococcus del grupo B ( BETA HEMOLITICOS) produce un factor que aumenta la beta hemólisis de una cepa indicadora de Staphylococcus aureus. Streptococcus pyogenes Staphylococcus aureus Streptococcus agalactiae PRUEBA DE CAMP

16 TIPO DE HEMÓLISIS AUTOEVALUACIÓN NO HEMOLITICO

17 CLASIFICACION DE LANCEFIELD PARA ESTREPTOCOCOS BETA HEMOLITICOS

18 Extracto soluble de la pared celular por acción enzimática + Partículas de látex cubiertos de anticuerpos específicos CLASIFICACION DE LANCEFIELD PARA BETA HEMOLITICOS

19 Pruebas para diferenciar estreptococos Beta hemolíticos (Grupo A y Grupo C) PRUEBA DE SENSIBILIDAD A LA BACITRACINA Con crecimiento alrededor del disco de Bacitracina Sin crecimiento alrededor del disco de Bacitracina

20 Pruebas para diferenciar Streptococcus pneumoniae y otros estreptococos Alfa hemolíticos (Streptococcus mitis) DISCO DE OPTOQUINA Sin crecimiento alrededor del disco de Optiquina Con crecimiento alrededor del disco de Optiquina PRUEBA DE SENSIBILIDAD A LA OPTOQUINA Streptococcus pneumoniae Streptococcus mitis

21 Pruebas para diferenciar Streptococcus pneumoniae y otros estreptococos Alfa hemolíticos (Streptococcus mitis) PRUEBA DE SENSIBILIDAD A BILIS Streptococcus pneumoniae lisado en presencia de Bilis Streptococcus mitis NO lisado en presencia de Bilis

22 PRUEBAS BÁSICAS PARA EL DIAGNÓSTICO MICROBIOLÓGICO DE BACILOS GRAM NEGATIVOS PRUEBAS BÁSICAS PARA EL DIAGNÓSTICO MICROBIOLÓGICO DE BACILOS GRAM NEGATIVOS

23 4.- PRUEBAS BIOQUIMICAS PASOS PARA EL DIAGNOSTICO: 1.- MUESTRA: 2.- DIRECTO: Coloraciones: Gram 3.- CULTIVO

24 FERMENTACIÓN DE LACTOSA EN MEDIO MAC CONKEY

25 PRUEBA DE MOVILIDAD Permite conocer si las bacterias en estudio son móviles o no, eso ayuda en el proceso de clasificación Se realiza una siembra pinchando el medio con la aguja bacteriológica, y tras incubar 24 h, se observa si se ha producido crecimiento entorno a la zona inoculada.

26 Se cultiva la especie en estudio en un caldo rico en triptofano para que se produzca el Indol Se agrega al cultivo tres gotas del reactivo de Kovack (P-dimetil-aminobenzaldehido ) Se determina la presencia de Indol a través de la formación de un anillo rojo en la superficie del caldo PRUEBA DEL INDOL + -

27 Determina si el organismo bacteriano en cuestión se desarrolla o no en un medio que contiene citrato como única fuente de carbono. PRUEBA DEL CITRATO Medio citrato de Simmons

28 KLIGLER: Agar triple azucar hierro

29 Permite conocer la presencia o ausencia del citocromo C en bacterias y es una característica fisiológica muy utilizada en taxonomía PRUEBA DE LA OXIDASA Este reactivo es rápidamente transformado a un producto oxidado de color púrpura dentro de 30 segundos en presencia de citocromo oxidasa. Se toma una pequeña cantidad de cultivo bacteriano de horas de edad y se transfiere a un trozo de papel filtro previamente embebido en n,n-dimetil p-fenilendiamina Prueba de oxidasa Prueba secundaria


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