La descarga está en progreso. Por favor, espere

La descarga está en progreso. Por favor, espere

Diagnóstico Virológico Bioq. Alejandro Kuc Servicio de Inmunología - Hospital Dr. Julio C. Perrando Servicio de Inmunología - Hospital Dr. Julio C. Perrando.

Presentaciones similares


Presentación del tema: "Diagnóstico Virológico Bioq. Alejandro Kuc Servicio de Inmunología - Hospital Dr. Julio C. Perrando Servicio de Inmunología - Hospital Dr. Julio C. Perrando."— Transcripción de la presentación:

1 Diagnóstico Virológico Bioq. Alejandro Kuc Servicio de Inmunología - Hospital Dr. Julio C. Perrando Servicio de Inmunología - Hospital Dr. Julio C. Perrando Cátedra de Virología - FaCENA - UNNE Cátedra de Virología - FaCENA - UNNE Área de Inmunología - IMR - UNNE Área de Inmunología - IMR - UNNE

2 Importancia Determinar una intervención terapéutica Determinar una intervención terapéutica Definir el pronóstico en la evolución de un paciente Definir el pronóstico en la evolución de un paciente Indicar la necesidad de una vacunación Indicar la necesidad de una vacunación Adoptar medidas de salud pública en una comunidad: epidemiología. Adoptar medidas de salud pública en una comunidad: epidemiología. Tendencia: Sensibilidad y Rapidez Tendencia: Sensibilidad y Rapidez

3 Métodos de Diagnóstico Directos: presencia de virus en muestras clínicas Directos: presencia de virus en muestras clínicas Agente infeccioso: aislamiento viral Agente infeccioso: aislamiento viral Partícula viral: microscopía electrónica Partícula viral: microscopía electrónica Antígenos virales: inmunomarcación Antígenos virales: inmunomarcación Genomas virales: biología molecular Genomas virales: biología molecular Indirectos: respuesta de anticuerpos específicos antivirales en el suero del paciente Indirectos: respuesta de anticuerpos específicos antivirales en el suero del paciente

4 Tipo de Muestras Virus respiratorios: aspirado nasofaríngeo Virus respiratorios: aspirado nasofaríngeo Lesiones Cutáneas: raspado e hisopado Lesiones Cutáneas: raspado e hisopado Sangre: aislamiento viral Sangre: aislamiento viral Suero: búsqueda de anticuerpos (serología) Suero: búsqueda de anticuerpos (serología) Materia Fecal: enterovirus Materia Fecal: enterovirus Orina: aislamiento de CMV Orina: aislamiento de CMV LCR: enterovirus y parotiditis LCR: enterovirus y parotiditis Muestras oculares: hisopado Muestras oculares: hisopado Tejidos: aislamiento viral o inmunohistoquímica Tejidos: aislamiento viral o inmunohistoquímica

5 Transporte y conservación Aislamiento Aislamiento Inmediatamente (inactivación y contaminación) Inmediatamente (inactivación y contaminación) No congelar No congelar Conservación Conservación Temp amb: horas Temp amb: horas 4ºC: 1-2 días 4ºC: 1-2 días -20ºC: meses -20ºC: meses -70ºC: años -70ºC: años

6 Métodos Directos

7 1- Aislamiento Viral Huevos, Animales o Células Huevos, Animales o Células Tipos de cultivos celulares Tipos de cultivos celulares Primario: directamente del tejido humano o animal; 1-2 subpasajes Primario: directamente del tejido humano o animal; 1-2 subpasajes Diploide: derivado del tejido fetal o de RN; subpasajes Diploide: derivado del tejido fetal o de RN; subpasajes Hetroploide: extraídas de tejido tumoral o tranformado; infinitos subpasajes Hetroploide: extraídas de tejido tumoral o tranformado; infinitos subpasajes Variación en susceptibilidad Variación en susceptibilidad Es indispensable el Diagnóstico presuntivo Es indispensable el Diagnóstico presuntivo

8 Inoculación e incubación (ATB) Inoculación e incubación (ATB) Decontaminar muestras no estériles Decontaminar muestras no estériles Inocular en tubos de cultivo: µL de muestra en medio con ATB Inocular en tubos de cultivo: µL de muestra en medio con ATB 1 hr a 37º para permitir la adsorción 1 hr a 37º para permitir la adsorción Añadir medio de cultivo y cambiarlo cada 2- 3 días. Añadir medio de cultivo y cambiarlo cada 2- 3 días.

9 Detección de los efectos de los virus Detección de los efectos de los virus Acción citopatogénica: tipo, magnitud, velocidad y cultivo Acción citopatogénica: tipo, magnitud, velocidad y cultivo

10

11

12 Detección de los efectos de los virus Detección de los efectos de los virus Acción citopatogénica: tipo, magnitud, velocidad y cultivo Acción citopatogénica: tipo, magnitud, velocidad y cultivo Hemadsorción Hemadsorción

13

14 Detección de los efectos de los virus Detección de los efectos de los virus Acción citopatogénica: tipo, magnitud, velocidad y cultivo Acción citopatogénica: tipo, magnitud, velocidad y cultivo Hemadsorción Hemadsorción Hemaglutinación Hemaglutinación

15

16 Detección de los efectos de los virus Detección de los efectos de los virus Acción citopatogénica: tipo, magnitud, velocidad y cultivo Acción citopatogénica: tipo, magnitud, velocidad y cultivo Hemadsorción Hemadsorción Hemaglutinación Hemaglutinación Interferencia Interferencia Dx presuntivo: debe confirmarse Dx presuntivo: debe confirmarse Identificación Identificación Inmunofuoresencia Inmunofuoresencia Imunoperoxidasa Imunoperoxidasa Cuantificación de virus Cuantificación de virus Titulación de punto final Titulación de punto final Plaqueo bajo agarosa Plaqueo bajo agarosa

17

18 2- Microscopía Electrónica Métodos Métodos Inmunoelectromicroscopía Inmunoelectromicroscopía Coloración negativa Coloración negativa Ventajas Ventajas Rápido (pocas muestras) Rápido (pocas muestras) Desventajas Desventajas Costo del ME Costo del ME Baja Sensibilidad Baja Sensibilidad

19 3- Inmunoflourescencia Técnica Técnica Directa Directa Indirecta Indirecta Ventajas Ventajas Muestra estable Muestra estable Muy Sensible Muy Sensible Muy Específica Muy Específica Rápido Rápido Desventajas Desventajas Costo del MF Costo del MF Observador experimentado Observador experimentado

20 IFI

21

22

23

24

25

26

27 4- Aglutinación Ventajas Ventajas Sencillo Sencillo Rápido Rápido No requiere equipamiento No requiere equipamiento Desventajas Desventajas Poco especifica Poco especifica

28 5- Enzimoinmunoensayo (EIA) Ventajas Ventajas Muy Sensible Muy Sensible No se necesita observador experimentado No se necesita observador experimentado Gran numero de muestras simultáneamente Gran numero de muestras simultáneamente Automatizable Automatizable Desventajas Desventajas Falsos Positivos (necesita confirmación) Falsos Positivos (necesita confirmación)

29 ELISA Enzyme Linked Immuno- Sorbent Assay

30

31

32

33

34

35

36

37

38

39

40

41

42

43

44

45

46

47

48 Tests Rápidos en un solo paso

49 5- Radioinmunoensayo (RIA) Fundamento idéntico a ELISA Fundamento idéntico a ELISA Ventajas Ventajas Similar al ELISA Similar al ELISA Desventajas Desventajas Reactivos Inestables Reactivos Inestables Residuos Radiactivos Residuos Radiactivos Relativamente mas Costoso Relativamente mas Costoso

50 Métodos Indirectos

51 Detección de IgM Detección de IgM Infección aguda Infección aguda Infección congénita Infección congénita FR: f+ FR: f+ IgG: f- IgG: f- IgM Captura IgM Captura Detección de IgG Detección de IgG Seroconversión Seroconversión Recién Nacidos Recién Nacidos Avidez Avidez Δ >4 títulos

52 Técnicas Aglutinación de partículas Aglutinación de partículas IFI IFI EIA EIA ELISA ELISA LIA LIA RIA RIA Western Blott Western Blott

53 Western Blot Muy especifica Muy especifica Método confirmatorio Método confirmatorio

54 1 2

55 3 4

56 Western Blot

57


Descargar ppt "Diagnóstico Virológico Bioq. Alejandro Kuc Servicio de Inmunología - Hospital Dr. Julio C. Perrando Servicio de Inmunología - Hospital Dr. Julio C. Perrando."

Presentaciones similares


Anuncios Google