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HEMOGLOBINOPATÍAS ALTERACIONES CUALITATIVASALTERACIONES CUALITATIVAS –Hemoglobinopatías estructurales ALTERACIONES CUANTITATIVASALTERACIONES CUANTITATIVAS.

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1 HEMOGLOBINOPATÍAS ALTERACIONES CUALITATIVASALTERACIONES CUALITATIVAS –Hemoglobinopatías estructurales ALTERACIONES CUANTITATIVASALTERACIONES CUANTITATIVAS –Síndromes Talasémicos

2 Hemoglobinas normales: variantes Cadenas tipo : 16 p AA Cadenas tipo no : 11 p AA AA2F Gower I II Portland (Bart´s)(H) 1 2 A G

3 Síntesis de cadenas de globina % en embrión, feto y lactante

4 Estudio de las hemoglobinopatías 1) Criterios generales: a) Noción de frecuencia y manifestaciones atípicas de una patología frecuente. b) Estudio simultáneo del paciente, su familia y un control normal. c) Evitar el estudio de un paciente transfundido. 2) Datos clínicos: a) Procedencia geográfica del paciente y sus antecesores. b) Miembros afectados en una familia y patrón de herencia. c) Evidencia de hemólisis. d) Incremento de la hemólisis o de la anemia por infecciones intercurrentes o drogas oxidantes. e) Crisis dolorosas abdominales, óseas, esplenomegalia, litiasis vesicular, cianosis, poliglobulia. 3) Valores e índices hematimétricos y morfología de hematíes. 4) Pruebas específicas.

5 Beta-talasemia heterocigota Laboratorio - Anemia moderada o ausente - VCM disminuído - Morfología eritrocitaria: - Anisocitosis - Microcitos - Hipocromía - Ovalocitos - Punteado basófilo - Ferremia normal o ligeramente aumentada - Ferritina normal o ligeramente aumentada - Hemoglobina A 2 aumentada - Hemoglobina Fetal normal o lig. aumentada - Resistencia osmótica aumentada

6 Sindromes talasémicos Estudio de laboratorio 1) Electroforesis de Hb en acetato de celulosa buffer TEB, pH coloracion: Ponceau S. 2) Electroforesis de Hb en acetato de celulosa buffer fosfato 0,1M pH 7.0 3) Cuantificación de Hb A 2. 4) Cuantificación de Hb F. 5) Distribución intracelular de la Hb F. 6) Cuerpos de Heinz. 7) Resistencia osmótica de los hematies. 8) Perfil de hierro. 9) Velocidad de síntesis de cadenas. 10) Estudio molecular de los genes de globina para identificación de la mutación.

7 HEMOGLOBINA S Hemoglobina S: ß 6(A3) Glu Val. Electroforesis pH alcalino: entre A y A2. Hb S heterocigota (A/S). Asintomático. No anemia. Hb S: 40-45%. Hb S homocigota (S/S). Anemia drepanocítica. Severidad variable Células falciformes irreversibles. Hb S: 90-95%. Haplotipos. Doble heterocigota S/C. Cuadro clínico semejante al S/S. Hb S: 55% Hb C: 45%. Doble heterocigota S/talasemia. ßS/α-tal: menor porcentaje de Hb S. ßS/ß-tal: cuadro clínico más severo.

8 SINDROMES CON Hb S, C, D, E, G 1) Electroforesis de Hb en acetato de celulosa buffer TEB, pH ) Cuantificación de Hb A 2 3) Drepanocitos. 4) Solubilidad de la Hb. 5) Cuantificación de la Hb anormal 6) Cuantificación de Hb F (desnaturalización alcalina). 7) Electroforesis en gel de agar. buffer citrato, ph ) Separación de cadenas de globina. electroforesis en acetato de celulosa de hemolizados tratados con urea y mercaptoetanol, buffer TEB -urea mercaptoetanol, pH 8.9 9) Digestión tríptica con separación de péptidos en cromatografía líquida de alta presión (HPLC) en fase reversa. 10) Estudio molecular para identificación de la mutación.

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11 Cuantificación de Hemoglobina Fetal Desnaturalización alcalina 1) Técnica de Singer - desnaturalizar 1 minuto con NaOH 0.083M - neutralizar con solución a media saturación de sulfato de amonio - valor normal: hasta 2 % 2) Técnica de Betke - convertir el hemolisado a cianmetahemoglobina - desnaturalizar 2 minutos con NaOH 1.3N - neutralizar con solución saturada de sulfato de amonio - valor normal hasta 1 %

12 Sindromes talasémicos Métodos diagnósticos a nivel ADN Monodiagnósticos: ASO, enzimas, ARMS Oligodiagnósticos: kits comerciales Polidiagnósticos: - de screening: DGGE, SSCP - diagnósticos: secuenciamiento Indicaciones de estudios a nivel ADN Estudio poblacional Confirmación casos dudosos Diagnóstico - prenatal - preimplante

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