INMUNOHEMATOLOGIA HEMATOLOGIA CLINICA 2013 Ivan Maria Victoria

Karl Landsteiner

Modelos de la estructura de las principales proteínas activas de grupo sanguíneo

Antígenos Eritrocitarios

CLASIFICACION SEGÚN SU NATURALEZA QUIMICA CARBOHIDRATOS ABO, LEWIS, Hh P GLICOLIPIDO GLICOPROTEINA Kell, Xg, Scianna, Kx, MNSs (GPA GPB), Dombrock (GPI-linked) PROTEINA Rh, LuTHERAN (iGsf), Duffy(ECR), Kidd ( Urea Transp.), Diego (Banda 3), Colton (Acuaforina-1), LW (IgSF),Chido/Rogers (C4A C4B),

CLASIFICACION ISBT: DEFINICIONES SISTEMA DE GRUPO SANGUINEO Sistema formado por uno o más antigenos controlados por un único locus o por un complejo de genes homólogos estrechamente ligados que no recombinan durante la meiosis

Inmunogenicidad Nombre Sistema Inmunogenicidad

SISTEMA ABO

SISTEMA ABO Clasificación ISBT: ABO, 001 Expresión: Soluble: Saliva y otros fluidos corporales, excepto LCR (en los secretores) Otras células sanguíneas: linfocitos, plaquetas (adsorbidos del plasma) Tejidos: Amplia distribución. Células epiteliales y endoteliales. Ubicación: 9q34.1-q34.2 Nombre del gen: ABO Producto del gen: A: a(1,3)N-Acetilgalactosaminiltransferasa (353 aa) B: a(1,3)Galactosaminiltransferasa (353 aa)

LOS GRUPOS SANGUÍNEOS SON ALOGÉNICOS La mayoría de los individuos desarrollan anticuerpos frente a los antígenos ABO alogénicos aunque no hayan sido expuestos a eritrocitos extraños; esta sensibilidad se debe al contacto con epítopos idénticos que casualmente expresan de forma rutinaria una gran cantidad de microorganismos.

SISTEMA ABO: IMPORTANCIA CLINICA Reacciones hemolíticas postransfusionales severas Enfermedad hemolítica del RN leve a moderada Asociación con la enfermedad: Debilitamiento de la expresión de A y B en leucemias y enfermedades que inducen éstres en la hemopoiesis (talasemia, anemia de Diamond Blackfan). Los antígenos A y B son marcadores tumorales (modificaciones en las cadenas de azúcares son características de cánceres y eritroleucemias).

SISTEMA ABO ADULTOS RECIEN NACIDOS A1 810.000 - 1.700.000 250.000 - 370.000 A2 240.000 - 290.000 140.000 B 610.000 - 830.000 200.000 - 320.000

TIPIFICACION ABO DE RUTINA Suero vs. % GR vs. GRUPO ABO B N Anti-A Anti-B Anti-A,B GR A1 GR B GR O A B AB 49 27 20 4 4 0 0 0 + 0 + 0 + + + + + + + 0 0 + 0 + 0 0 - - -

RESULTADOS FALSO NEGATIVO RESULTADOS FALSO POSITIVO CAUSAS COMUNES DE RESULTADOS FALSO POSITIVO FALSO NEGATIVO EN LA TIPIFICACION ABO RESULTADOS FALSO NEGATIVO No se agregó reactivo o suero. Proporción inapropiada de suero y de eritrocitos. Centrifugación insuficiente. Incubación a más de 20 -24ºC. Interpretación o registro incorrecto de los resultados. RESULTADOS FALSO POSITIVO Centrifugación excesiva. Uso de reactivos, glóbulos rojos o solución salina contaminada. Uso de material de vidrio sucio. Interpretación o registro incorrecto de los resultados.

TIPIFICACION ABO DE RUTINA Suero vs. GR vs. GRUPO ABO Anti-A Anti-B Anti-A,B GR A1 GR B GR O ? 0 0 0 + 0 + 0 + + + + + + + 0 + + 0 + + + DISCREPANCIA

CAUSAS DE DISCREPANCIA SUBGRUPOS DEL ABO PRESENCIA DE ANTICUERPOS IRREGULARES POLIAGLUTINACION

Conclusiones: presencia de anti-A1 GR vs. Suero vs. Anti-A Anti-B Anti-A,B GRA1 GRB GRO + 0 + + + 0 Anti-A Anti-B Anti-A,B GRA1 GRA2 GRB GRO + 0 + + 0 + 0 Conclusiones: presencia de anti-A1

SUBGRUPOS DEL A (excluidos A1 y A2) Métodos: 1)Aglutinación con anti-A y anti-A,B 2)Presencia o Ausencia de anti-A1 3)Presencia o ausencia de A en saliva 4)Presencia o ausencia de H en saliva 5)presencia de diversas glicosil transferasas

1) REACCION CELULAR CON ANTI-A Y ANTI-A,B AGLUTINACION DEBIL NO AGLUTINACION A3 AX Aend(Bantu) Am Ay Ael

AX A3 Aend Campo mixto (30%) Aglutina con anti-A,B Campo mixto (10%) 4000 sitios antigénicos 200.000 sitios en los aglutinados 70.000 a 100.000 sitios antigénicos Transferasa débil y heterogénea Transferasa débil No Transferasa en suero Anti-A1 Anti-A1 s/Anti-A1 No secretor de A secretor de H Secretor de A No secretor de A no secretor de H Alelo dominante Alelo dominante Alelo dominante

SUBGRUPOS DEL B B 0 4+ 4+ 0 4+ 0 0 B&H B3 0 1+cm 2+cm 4+ 4+ 0 0 B&H GR vs: Eritrocito a-A a-B a-A,B a-H GRA GRB GR0 secretores Fenotipo saliva de Suero vs: B 0 4+ 4+ 0 4+ 0 0 B&H B3 0 1+cm 2+cm 4+ 4+ 0 0 B&H Bm 0 0 0/+ 4+ 4+ 0 0 B&H Bx 0 0/+ 0/2+ 4+ 4+ 0 0 H

Conclusiones: Oh (BOMBAY) GR vs. Suero vs. Anti-A Anti-B Anti-A,B GRA1 GRB GRO 0 0 0 + + + DB UE GR O GROh 0 0 + 0 Conclusiones: Oh (BOMBAY)

SISTEMA ABO: GENÉTICA. Interacción con el sistema Hh El locus ABO tiene tres alelos: A, B y O, y por el hecho de ser diploide todo individuo será portador de dos alelos.

SISTEMA ABO SUSTANCIA PRECURSORA SUSTANCIA H GEN Hh L-Fucosa Fucosil transferasa SUSTANCIA PRECURSORA SUSTANCIA H SISTEMA ABO L-Fucosa Azúcar inmunodominante GEN A GEN B GEN 0 N-AcGalactosaminil transferasa D-Galactosil transferasa GEN AMORFO N-AcGalactosamina D-Galactosa Azúcar inmunodominante

Un gen H situado en un locus separado codifica la sustancia precursora sobre la que actúan los productos de los genes A y B.

LECTINA anti-A1 de Dolichos biflorus. Los subgrupos de A : A1 y A2 serológicamente se diferencian por su comportamiento frente a extractos vegetales denominados “LECTINAS”. LECTINA anti-A1 de Dolichos biflorus. LECTINA anti-H de Ulex europeaus. Fenotipo A1 A2 Frecuencia 80 % 20 %

GRUPO BOMBAY Los individuos con genotipo HH o Hh producen la enzima 1,2-fucosiltransferasa que transforma la sustancia precursora en Sustancia H. Los individuos con fenotipo BOMBAY con genotipo hh no producen dicha enzima, por lo que no pueden modificar la sust. precursora, lo que hace que no puedan sintetizar SUSTANCIA H. Esto condiciona a que los genes del sistema ABO (si los tuviesen ) no pueden expresarse, por lo que parecen ser del grupo O. Presentan de manera constante además de anti-A y anti-B, un anticuerpo natural anti-H muy activo a 37ºC, capaz de hemolisar los hematíes de cualquier individuo que no sea de fenotipo BOMBAY.

Recordar… Los títulos de anti­A y anti­B con frecuencia están disminuidos en pacientes ancianos y con hipogammaglobulinemia, por lo que puedo tipificar erróneamente cuando haga el GRUPO SERICO. Los RN no producen títulos normales de anti­A y anti­B hasta los 3­6 meses de edad, alcanzando el titulo máximo entre los 5 a 10 años de edad.

El gen ABO está organizado en 7 exones y 6 intrones El gen ABO está organizado en 7 exones y 6 intrones. Las modificaciones polimórficas ocurren tanto a nivel de exones como de intrones. El tamaño del gen es de 18 kb Los alelos del grupo O en su mayoría tienen deleciones de un único nucleótido en el exón 6, lo que produce un producto no funcional. Esta deleción genera un codón stop.

SISTEMA ABO 156 176 216 235 266 268 291 352 A1 Pro Arg Phe Gly Leu Asp Variaciones de aminoacidos en las transferasas según alelos 156 176 216 235 266 268 291 352 A1 Pro Arg Phe Gly Leu Asp A2 A3 Asn AX Ile

SISTEMA ABO 156 176 216 235 266 268 291 352 B Pro Gly Phe Ser Met Ala Variaciones de aminoacidos en las transferasas según alelos 156 176 216 235 266 268 291 352 B Pro Gly Phe Ser Met Ala Asp Arg B3 Trp Cis-A,B Leu B(A)

SISTEMA ABO 156 176 216 235 266 268 291 352 Pro Gly Phe Leu Arg Asp Variaciones de aminoacidos en las transferasas según alelos 156 176 216 235 266 268 291 352 Pro Gly Phe Leu Arg Asp Produce una proteína sin actividad enzimática de 116 aa. Después de Val en el residuo 86 se produce una mutación de una base en el codon 87 (nt 261), generando un codon stop.

MEDIADAS POR LA INMUNIDAD Hemolítica transfusional Aguda: Causa: Incompatibilidad ABO Fisiopatología: Fase I : Interacción AG-AC. Fase II: Activación Fagocítica Fase III: Respuesta Sistémica Causas: error administrativo, por lo cual se desconoce su verdadera prevalencia

Hemolítica Transfusional Aguda Presentación: Fiebre Nauseas / Vómitos Dolor Hipotensión Shock Disnea Complicaciones: Fallo Renal Agudo Coagulación Intravascular Diseminada

SISTEMA RH Philip Levine

Antígenos del Sistema Rh

Asignación Cromosomal Los Ags. de este Sistema son gobernados por 2 genes: RHD y RHCE con una localización en el Cromosoma 1 (1p36.13-p34.3)

Flegel WA; Transfusion and Apheresis Science 44 (2011) 81–91

Cartron JP et al; Vox Sanguinis 1998; 74 (Suppl. 2): 29-64

Cómo la proteína puede formar una estructura símil barril dentro de la membrana y con función de transporte en la misma

DENSIDAD ANTIGÉNICA

Rol Biológico Sugerencia de Función Estructural: Sujetos Rh Null (carecen Ag. Rh29) padecen un Síndrome con estomatocitos. Disminución de la expresión antigénica de los Ags. del Sistema Rh en Leucemias y otras Enfermedades Oncohematológicas. Función de Transporte en la Membrana: Aumento de permeabilidad catiónica. También se ha postulado recientemente que las proteinas Rh podrían funcionar como un canal de gas para CO2

RELACIÓN CON CONDICIONES HEMATOLÓGICAS PARTICULARES Sugerencia de función estructural Sind. Rh Nulo (sin Rh:29): Estomatocitos

Antígenos del Sistema Rh son sintetizados en el glóbulo rojo son detectados solamente en los hematíes sus determinantes proteicos están representando el producto primario codificado por un gen se heredan como rasgos Codominantes

Definiciones Básicas Las dos principales razones por las cuales los hematíes no pueden ser genotipados son: las pruebas serológicas revelan la presencia o ausencia de antígenos, no de genes, y los hematíes en circulación no poseen núcleo y por lo tanto no expresan genes. Dado que un genotipo de grupo sanguíneo es una interpretación del fenotipo de un individuo, deberá calificarse como un genotipo probable.

Nomenclaturas Ha sido usado un número de diferentes tipos de nomenclaturas: letras mayúsculas (D, G, V); letras mayúsculas con minúsculas (C y c, E y e); superíndices (Cw, Cx), números (Rh32; Rh33) y hasta tortuosos jeroglíficos (RoHar, ha, rhw2, DCor, R̿N, rhii), generando tanta inconsistencia como confusión, ambas altamente indeseables.

Definiciones Básicas En este sistema las notaciones emplean simples letras (CDE), superíndices (Cw, Goa, Bea, etc.) y términos numéricos (Rh2) Los genes se escriben en itálicas empleando el nombre del sistema y el número del antígeno como un superíndice, p. ej., Rh4.

Definiciones Básicas El fenotipo puede anotarse con letras (D+C+E-c+e+) o con números (Rh:1,2,-3,4,5). Un complejo génico (haplotipo) puede indicarse en términos CDE o mediante el uso de un símbolo de gen. El uso de un símbolo de gen solo se aplica cuando se usa CDE taquigráfico (corto). El símbolo de gen R denota la presencia de un gen D; en tanto que r indica la ausencia de un gen D.

Madre: Rh + Padre: Rh+ Rh DD = Rh + Rh Dd = Rh + Rh dd = Rh - Niño

Principales genes o haplotipos Rh R1 CDe r cde R2 cDE Ro cDe r’ Cde r” cdE Rz CDE ry CdE

Como convertir Nomenclatura de Fisher-Race a la de Wiener D R D r Considere sólo los genes C y/o E en el haplotipo Gen R Gen r CE 1 ’ CE 2 ” CE o CE z y

PROBABILIDADES DE UNA MADRE Rh- DE TENER UN HIJO Rh+ SEGÚN LAS CARACTERÍSTICAS DEL PADRE

Base Genética de la Proteína Rh La proteína Rh cruza la membrana del G.R. Gen RHD :10 exones codificando regiones Código para proteínas 3pares de bases 1 triplete = 1 aminoácido

Base Genética de la Proteína Rh La proteína Rh cruza la membrana del G.R. Gen RHD :10 exones codificando regiones Código para proteínas 3pares de bases 1 triplete = 1 aminoácido

Base Genética de la Proteína Rh Gen RHD :10 exones codificando regiones Código para proteínas

Rh Positivo Rh Negativo Gen RHD Proteína D Gen RHCE Proteína Cc y Ee Intrón 4, 600 pares de bases más largo que el Intrón 4 del gen RHD

Gen RHD Proteina RhD

Gen RHCE Proteina RhCcEe