IDENTIFICACIÓN Y MEDICIÓN CUANTITATIVA DE AMINOÁCIDOS Y PROTEÍNAS PROFESOR: MC. MIGUEL ÁNGEL SÁNCHEZ RODRÍGUEZ ALUMNA: CARMEN CORPUS

PRUEBA DE AZUFRE Reacción de los aminoácidos azufrados: Se comprueba por la formación de un precipitado negruzco de sulfuro de plomo. separación mediante un álcali del azufre de los aminoácidos, el cual al reaccionar con una solución de acetato de plomo, forma el sulfuro de plomo.

Técnica: 1. Poner en el tubo de ensayo de 2 a 3ml de albúmina de huevo (clara de huevo). 2 Añadir 2ml de solución de hidróxido sódico al 20%. 3. Añadir 10 gotas de solución de acetato de plomo al 5%. 4. Calentar el tubo hasta ebullición.

Resultados: Si se forma un precipitado de color negruzco indica que se formó sulfuro de plomo utilizándose el azufre de los aminoácidos, lo que nos sirve para identificar proteínas que tienen en su composición aminoácidos con azufre.

Otra explicación: Reacción con acetato de Plomo alcalino Los Aminoácidos azufrados como Metionina, Cisteina y Cistina se reconocen por la formación de precipitados de Sulfuro de Plomo de color gris oscuro o negro que se forman cuando reacciona con Acetato de Plomo en medio alcalino.

b) Determinar el contenido de nitrógeno proteico y multiplicar por un factor de conversión de nitrógeno a proteína. (METODOS DE DETERMINACION DE PROTEINAS) Se han utilizado diversos métodos para separar la proteína de compuestos nitrogenados no proteicos entre los que se señalan: 1. Diálisis y ultrafiltración por membrana; 2. Coagulación por calor (no es efectivo para caseína y gelatina); 3. Reacciones de precipitación: que a su vez, pueden subdividirse en dos grupos: sin desnaturalización y por desnaturalización.

PRECIPITACIÓN POR DESNATURALIZACIÓN: Uso de agentes precipitantes como: ácido túngstico, ácido tricloroacético, hidróxido de cobre, óxido férrico, acetato de plomo, ácido fosfotúngstico, ácido metafosfórico, ácido tánico, ácido sulfosalicílico, etanol, mezcla cloroformo y octanol (8:1), mezcla fenol, ácido acético y agua (1:1:1).

Desventajas Diferencias en las fracciones proteicas obtenidas por los diversos métodos. posibles retenciones sobre la proteína precipitada de pequeñas moléculas no proteicas por adsorción o intercambio iónico. Problemas relacionados con el uso del factor de conversión de nitrógeno a proteína.

PRECIPITACIÓN DE PROTEÍNAS CON CATIONES Y ANIONES Objetivo: Evaluar la solubilidad de proteínas frente a diferentes tipos de soluciones iónicas. Método: Precipitación y redisolución de la proteína con ácido y base. Un anión es un ion (átomo o molécula) con carga eléctrica negativa, que se produce como resultado de haber ganado uno o varios electrones. Un anión es opuesto al catión, el cual posee un ion de carga positiva.

La mayoría de las proteínas pueden precipitarse en las soluciones acuosas por la adición de ciertos ácidos, tales como el tricloroacético y el perclórico, los cuales forman con la proteína sales insolubles en ácido.

Estos reactivos se emplean para “aclarar” los fluidos biológicos o extractos celulares de proteínas antes de realizar los análisis para determinar la existencia de moléculas de bajo peso molecular, tales como la glucosa y los aminoácidos.

Otros precipitantes análogos de las proteínas son los ácidos túngstico, ortotúngstico y metafosfórico. Las proteínas también pueden ser precipitadas por cationes, tales como Zn+2 y el Pb+2.

Importante: Las proteínas se pueden precipitar de las soluciones mediante un agente precipitante de carga opuesta a la de las proteínas; esto requiere que el pH de la solución debe ser controlado de tal modo que la proteína quede en el lado ácido o básico de su punto isoeléctrico.

Materiales: Reactivos: 8 tubos de ensayo Gotario Pipeta HCl 0,01N NaOH 0,1N Albumina Acetato de plomo 10% Sulfato de Zinc 10% Tungstato de sodio 10% Ferrocianuro de potasio 1,0%

Procedimientos: PRECIPITACION EN ACIDO: 1- Enumerar 4 tubos de ensayo 2- Añadir a cada uno 1mL de HCl 0,01 N + 1mL de albumina 3- Añadir: Tubo Tubo 1) 1 mL de Acetato de plomo 10% Tubo Tubo 2) 1 mL de Sulfato de Zinc 10% Tubo Tubo 3) 1 mL de Tungstato de Sodio 10% Tubo Tubo 4) 1 mL de Ferrocianuro de Potasio 1,0% 4- Observar la presencia de precipitado y anotar

PRECIPITACION EN BASE: 1- Enumerar 4 tubos de ensayo 2- Añadir a cada uno 1mL de NaOH 0,01 N + 1mL de albumina 3- Añadir: Tubo Tubo 1) 1 mL de Acetato de plomo 10% Tubo Tubo 2) 1 mL de Sulfato de Zinc 10% Tubo Tubo 3) 1 mL de Tungstato de Sodio 10% Tubo Tubo 4) 1 mL de Ferrocianuro de Potasio1,0% 4- Observar la presencia de precipitado y anotar

El zinc forma un precipitado en medio básico. El sodio forma un precipitado en medio ácido. El potasio forma un precipitado en medio ácido. El plomo forma un precipitado en medio básico. ácido básico

Conclusiones Las proteínas se pueden precipitar mediante un agente precipitante de carga opuesta a la de las proteínas; esto se requiere que el pH de la solución debe ser controlado de tal modo que la proteína quede en el lado ácido o básico de su punto isoeléctrico. Las proteínas pueden precipitar con la adición de cationes (Zinc y Plomo) en medio básico, y con aniones (Sodio y Potasio) en medio acido