ESTUDIO DE LA REGULACIÓN EPIGENÉTICA DE GENES ASOCIADOS A ESCLEROSIS MÚLTIPLE M. Delgado García 1, R. Mondéjar García 1, F. Solano Manchego 1, F. Matesanz Del Barrio 2, G. Izquierdo Ayuso 1, M. Lucas Lucas 1 (1)Hospital Universitario Virgen de la Macarena, Sevilla (2)Instituto de Parasitología y Biomedicina López Neyra, Granada INTRODUCCIÓN La Esclerosis Múltiple es una enfermedad crónica autoinmune del sistema nervioso central, caracterizada por inflamación, desmielinización y degeneración axonal. Los estudios de GWAS han demostrado la asociación de muchos genes a la susceptibilidad de padecer Esclerosis Múltiple, la mayoría de ellos pertenecientes al sistema inmune. No obstante, la falta de significación funcional sugiere de la existencia de otros mecanismos, como los de regulación epigenética. El ácido valproico (VPA) y el fenilbutirato de sodio (NaPB) son inhibidores de desacetilasas de histonas. Estos compuestos están siendo estudiados actualmente en diversas patologías, ya que disminuyen el grado de compactación de la cromatina y aumentan la expresión génica. En este trabajo hemos hipotetizado que los mecanismos epigenéticos podrían potenciar el significado biológico de los genes asociados a Esclerosis múltiple. OBJETIVOS Determinar si la expresión de genes asociados a Esclerosis Múltiple mediante estudios de GWAS, pueden ser modificados por mecanismos epigenéticos. MATERIAL Y MÉTODO Se purificaron células blancas a partir de sangre periférica de una cohorte de 19 pacientes de Esclerosis Múltiple y 16 controles. Las células fueron cultivadas bajo condiciones de reposo y en la presencia de acetato de forbol miristato (PMA), VPA y NaPB. El ARN total fue purificado y retrotranscrito a ADN complementario. Por PCR a tiempo real fue analizado el grado de expresión de los genes IL2RA, IL7RA, CD6, TNFRSF1A, PTGER4, UBAC2 y RORγ, normalizándolos en relación al gen constitutivo HPRT1. RESULTADOS El PMA fue utilizado como control de activación celular, incrementó el ratio de expresión basal de controles y pacientes en IL2RA (~p<10-6) e IL7RA (p ~ 0,03). El VPA incrementó en pacientes con Esclerosis Múltiple los niveles de los transcritos de los genes TNFRSF1A (p= 0,026) con respecto al valor de expresión registrado con el PMA y RORg(p= 0,04) con respecto al valor basal y al medido con el PMA. En las células de controles sanos no modificó los niveles basales de expresión. El NaPB no alteró de forma significativa el ratio de transcripción génica en ningún caso. Los resultados fueron analizados estadísticamente mediante el test U Mann-Whitney en SPSS. (Figura 1) * * * * * CONCLUSIÓN Nuestros datos sugieren que, bajo condiciones experimentales, los genes asociados a Esclerosis Múltiple pueden ser regulados por fenómenos epigenéticos. No obstante, pese a que los resultados son estadísticamente significativos, el bajo número muestral y la alta variabilidad biológica hacen necesario continuar el estudio para dilucidar los mecanismos subyacentes. * Figura 1: Representación de los niveles de expresión génica alcanzados en células de controles sanos (barras oscuras) y pacientes de Esclerosis Múltiple (barras claras). La barra horizontal roja corresponde al valor basal de expresión. Los asteriscos señalan los ensayos que resultaron significativos después de aplicar el test U Mann-Whitney. 8º Congreso Nacional del Laboratorio Clínico. Sevilla 15-17 de Octubre de 2014