DESEMPEÑO CROMATOGRÁFICO Licda. Carol Villatoro de Santisteban Análisis Instrumental Departamento de Fisicoquímica Escuela de Química USAC
PROCESO DE SEPARACIÓN Sistema Ingreso de muestra Flujo Interacciones Fenómenos Desempeño
Fenómenos y desempeño Dilución Velocidades diferenciales Ensanchamiento de banda Velocidades diferenciales Coeficiente de distribución Tiempo de retención Factor de retención (o de capacidad) Factor de selectividad Eficacia Resolución
Coeficiente de distribución
Tiempo de retención
Velocidad de migración
Velocidad de migración
Experimentalmente
Velocidad de migración Factor de retención o de capacidad: Describe velocidades de migración de los solutos en las columnas Ideal entre 2 y 10 Factor de selectividad Resolución
Velocidades de migración relativas B más fuertemente retenida que A α > 1 siempre
Experimentalmente B B
Velocidad de migración Factor de retención o de capacidad: Describe velocidades de migración de los solutos en las columnas Ideal entre 2 y 10 Factor de selectividad: Comparación de velocidades de migración entre dos solutos Resolución
Resolución
Resolución
Velocidad de migración Factor de retención o de capacidad: Describe velocidades de migración de los solutos en las columnas Ideal entre 2 y 10 Factor de selectividad: Comparación de velocidades de migración entre dos solutos Resolución Medida de la capacidad para separar dos analitos
Eficacia Teoría de platos Teoría cinética Equilibrio Parámetros de eficacia Teoría cinética Movimiento al azar Explicación más completa
Eficacia
Experimentalmente
Ensanchamiento de banda Movimiento aleatorio Cada molécula hace “recorrido” ligeramente distinto Tiempo de retención es un promedio Ensanchamiento es el incremento del rango de tiempos individuales de las moléculas Se evalúa por medio de H Varios factores influyen
Fenómenos que contribuyen al ensanchamiento de banda Caminos múltiples de flujo Difusión longitudinal Transferencia de masa entre fases
Ensanchamiento de banda
Ecuación de van deemter
ANÁLISIS CROMATOGRÁFICO Análisis cualitativo Análisis cuantitativo Optimización “El problema general de la elución”
RESOLUCIÓN Eficacia en cromatografía: capacidad para resolver mezclas = capacidad para separar analitos Resolución “Medida cuantitativa de la capacidad para separar dos analitos”
FACTORES QUE AFECTAN
FACTORES QUE AFECTAN Número de platos /altura de plato Selectividad Largo columna Ensanchamiento de banda Selectividad Retención
Tiempo
Variación de N Aumentar largo de columna Disminuir altura de plato Disminuir tamaño de partícula (HPLC) Disminuir viscosidad de FM en c. líquida
Variación de k’ Aumentar T en c. de gases Variar FM en c. de líquidos (relación solventes)
Variación de alfa Variar FM en c. de líquidos (identidad solventes) Variar T (intercambio iónico) Variar FS Opciones específicas
El problema general de la elución
Análisis cualitativo Tiempo de retención Comparación con estándar Necesidad de separación previo a análisis Confirmación de ausencia ¿Evidencia de presencia? Técnicas combinadas: detectores cualitativos
Análisis cuantitativo Señal proporcional a concentración Comparación con estándares Altura de pico o área de pico Varios métodos
Métodos de cuantificación Curva de calibración Patrón interno Normalización de áreas
fin Muchas Gracias por su atención