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Publicada porSusana Aranda Córdoba Modificado hace 8 años
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CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA DE ALTA RESOLUCIÓN (HPLC)
Licda. Carol Villatoro de Santistaban Análisis Instrumental Departamento de Fisicoquímica Escuela de Química USAC
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¿Por qué? Cromatografía clásica Cromatografía instrumental
Más: rapidez, resolución Menos: ensanchamiento de banda altura de plato teórico Automatización
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INSTRUMENTACIÓN Fase estacionaria Fase móvil Muestra Columna
Horno Fase móvil Suministro de solventes Desgasificación Bombas Tubería Muestra Inyector Detector
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Cromatógrafo básico
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Suministro de solventes
Solvente libre de partículas y de gases Filtración off-line y on-line Reservorios para varios solventes Programación para mezcla de solventes
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Suministro de solventes
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Desgasificadores Vacío Destilación Agitación con calentamiento
Purga con gas inerte
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Programador de gradiente
Mezcla de solventes para gradiente Gradiente de alta presión Simple, pero caro Una bomba por solvente Volumen controlado por velocidad de bomba Gradiente de baja presión Barato Una sola bomba Volumen controlado por tiempo de apertura de válvulas
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Programación en alta presión
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Programación en baja presión
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Bombas Altas presiones (>6000 psi) Libre de pulsaciones
Amplio intervalo de caudal ( ml/min) Reproducibilidad Resistencia a la corrosión Tipos Recíprocas De desplazamiento Neumáticas
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Bomba neumática
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Bomba neumática Simple Barata Libre de impulsos
Ventajas Desventajas Simple Barata Libre de impulsos Primera utilizada, todavía se usa para empacar columnas Capacidad limitada Caudal depende de viscosidad y presión de retorno Presión menor a 2000 psi Sólo condiciones isocráticas Bomba neumática
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Bomba de desplazamiento
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Bomba de desplazamiento
Ventajas Desventajas Flujo independiente de viscosidad y contrapresión Libre de pulsaciones Capacidad limitada Problemática para cambio de solventes Rellenado lento Bomba de desplazamiento
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Bomba recíproca
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Bomba recíproca Alta presión de salida
Ventajas Desventajas Alta presión de salida Adaptable fácilmente a elución con gradiente Caudal independiente de viscosidad y contrapresión Flujo pulsado Bomba recíproca
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Recíproca de un pistón
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Recíproca de dos pistones
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Tubería Ensanchamiento extra columna
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Tubería
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Columna
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Horno
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Inyección Características: Volumen pequeño (<500 µL)
Sistema a alta presión Problemas de reproducibilidad Variabilidad de volúmenes Vulnerabilidad a abrasión
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Inyección
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Inyector Septum Resistencia a alta presión (10,000 psi)
Acero inoxidable Volumen fijo y constante (5 – 500 µL) Inyector de bucle
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Inyector
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FIN
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