DETECCIÓN DE CHLAMYDIA PSITTACI GENOTIPO A EN MUESTRAS DE PACIENTES CON SOSPECHA DE PSITACOSIS. M E Cadario* 1, C Frutos2, J Origlia3, MB Arias1, C S Lara1, J Zintgraff1, M Santos1, M A Moscoloni1, M Regueira1, V Zelaya4, V Ré2, C Cuffini2. 1-INEI-ANLIS MALBRAN, CABA; 2-Instituto Virología JM Vanella. Fac. C. Médicas. UNC , Córdoba; 3-Cátedra de Patología de Aves y Pilíferos. Facultad C. Veterinarias. UNLP, La Plata; 4-UOCCB-ANLIS MALBRAN, CABA. Argentina INTRODUCCION: La psitacosis es una zoonosis de denuncia obligatoria producida por Chlamydia psittaci (Cps). Se conocen 9 genotipos: A -F y E/B relacionados con aves, M56 y WC asociados con mamíferos. El genotipo A es el más frecuente y altamente virulento. Generalmente la sospecha de esta enfermedad es baja debido a que el paciente puede presentar diferente grado de compromiso respiratorio y/o extrapulmonar y durante la consulta médica se omite el dato de contacto con aves u otras mascotas. La confirmación por métodos moleculares y la genotipificación de Cps sobre muestras respiratorias humanas así como sobre muestras del ave o mamífero presentan relevancia diagnóstica y epidemiológica. OBJETIVO: Presentar casos de psitacosis con y sin nexo epidemiológico conocido, confirmados por técnicas moleculares y genotipificados. Materiales y Métodos: Se seleccionaron casos con resultados positivos estudiados desde 2010 a 2014 con información clínico epidemiológica completa, disponibilidad de muestras de suero, respiratoria y un caso con hisopado ocular. Sobre las muestras humanas (respiratorias y un hisopado ocular) y una muestra de aves se realizó una PCR múltiple anidada (PCRMA) que amplifica una porción del gen de C. psittaci que codifica para 16SrRNA (Trudy O. Messmer y col. J.Clin. Microbiol., Aug.1997, p.2043-2046 Vol. 35. Protocolo modificado ) y otra PCR anidada que amplifica la región de la ompA (PCRA ompA)(Sachse K , Hotzel H. Method Mol Biol 2002; 216:123-36) dominio variable III y IV. Los productos de PCR fueron secuenciados. Se analizaron las secuencias con el programa MEGA 5 y se elaboraron los dendogramas con el método de Neighbor joining y p-distancia. . RESULTADOS: Se confirmó C. psittaci por PCRMA y PCRA ompA. El análisis de las secuencias determinó que todas las muestras pertenecen al genotipo A . Tabla 1: Características clínico-epidemiológicas de los casos estudiados. Casos/ Id. muestra Año Localidad y Provincia Sexo Edad Cuadro Tipo de muestra Tiempo de evolución Nexo epidemiológico I/67-10 2010 San Miguel - Buenos Aires F 62a NAC grave AT 5d Gallinas II/325-10 CABA M 45a Pancreatitis/ Neumonía BAL 20 días No conocido III/38-11 2011 Santa Rosa- La Pampa 38 a NAC sin internación HNyF 4 días Loro enfermo III-ave - HO e HC IV/38-13 2013 San Antonio Oeste - Río Negro 48 a IRA Caso índice de un brote que afectó a 32 personas 25 días Veterinario- acopio de loros provenientes de venta ilegal. V/619-13 Trenque Lauquen- Buenos Aires 26 años Conjuntivitis de evolución tórpida HO 23 días Nido de palomas en el patio de su casa VI/357-13 Resistencia- Chaco 5 años Sospecha clínica de coqueluche con resultado negativo para B. pertussis, B. parapertussis y B. holmesii ANF 12 días Se desconoce contacto con aves. VII/43-14 2014 Neuquén 43 años IRA/ Psitacosis 6 días Contacto con loro enfermo Figura 1: Dendograma obtenido de un fragmento de 290 nt del dominio variable IV del gen ompA de muestras de Chlamydia, construido por el método de Neighbor joining y p-distancia. Entre paréntesis se indica el genotipo al cual corresponden las cepas y códigos de acceso al banco de genes. La secuencia de C. felis VR120 se incluyó como grupo externo. Son indicados los valores de bootstrap (2.000 pseudoréplicas) mayores de 50, en los nodos de las ramas. CONCLUSIONES: Se pudo determinar la presencia de C. psittaci genotipo A en los casos humanos seleccionados y uno aviar relacionado, provenientes de diferentes regiones de Argentina. Sin embargo, otros investigadores encontraron genotipos diferentes en la Provincia de Córdoba. En el caso III, la genotipificación aportó mayor información sobre el nexo epidemiológico entre humano y ave. La limitación de este estudio radica en que es infrecuente la recepción de muestras respiratorias para el estudio de psitacosis. Generalmente se reciben muestras de sueros, que si bien aportan información, no son las muestras adecuados para establecer la fuente de un brote. También es escaso el número de muestras de aves relacionadas enviadas al laboratorio que el Centro de Zoonosis local establezca o al Instituto Pasteur. AGRADECIMIENTOS : Apoyo económico de PICTO-ANLIS 2011-0180