CROMATOGRAFÍA repaso

 Conceptos generales Origen, definición, objetivos, tipo de fases.  Clasificación Según naturaleza de las fases y métodos de separación. Según disposición física de la FE. Según la dirección de movimiento de la FM.

Cromatograma con picos no resueltos Mejora por aumento en separación de bandas Mejora por disminución del ancho de bandas Problema cromatográfico

Optimización de la columna aumentar la separación entre bandas:  t R Modificar variables termodinámicas disminuir el ancho de bandas Modificar variables cinéticas

SEÑAL DETECTOR t R TIEMPO t´ R Cromatograma compuesto no retenido por FE analito t M

Factor de separación (factor de selectividad) Factor de retención (factor de capacidad)  = kBkB kAkA k = nEnE nMnM Constante de reparto K = CECE CMCM Constantes termodinámicas t R - t M tMtM = t R = t M (1 + k) t R = t M (1 + K V E /V M )

señal detector tiempo   W= 4  punto de inflexión Ancho de banda

N = 16 (t R / W) 2 H =  2  /L N = L /H Ancho de banda

Ecuación relacionada con la eficiencia H = A + B/  + C E  + C M  Ecuación de Van Deemter modificada resistencia a transferencia de masa desde y hacia la FE resistencia a transferencia de masa dentro de la FM difusión en remolino difusión longitudinal

 H H mínimo  óptimo A B/  CECE CMCM H = A + B/  + C E  + C M  Ecuación de Van Deemter modificada

Resolución 2  t r (W(W A + W B ) R = k B R = 1+ k B   4 N R > 1.5

Información del cromatograma 1) Posición de la banda (t R ): función de constantes termodinámicas 2) Ancho de la banda (N, H): función de parámetros cinéticos En conclusión:

Optimización de la columna aumentar la separación entre bandas (  t R ) Modificar variables termodinámicas (K, k y  ) modificando FM, FE y temperatura disminuir el ancho de bandas Modificar variables que permiten ↓H y ↑N (ecuación van Deemter modificada)

FASE ESTACIONARIA MÉTODOINTERACCIÓN Líquida convencional y fase ligada RepartoSolubilidad (ver fase normal/reversa) SólidaAdsorción Fuerzas de van der Walls, puente hidrógeno Resina intercambiadora Intercambio iónico Fuerzas electrostáticas Gel poroso Exclusión molecular Tamizado Soporte con ligando unido AfinidadReacción específica CROMATOGRAFÍA DE LÍQUIDOS

 Naturaleza de las fases (FM y FE)  Descripción de la FE  Ejemplos de fases utilizadas  Fundamento de separación  Fuerzas involucradas  Serie eluotrópica de solventes (parámetros involucrados)  Ejemplos de aplicaciones

Cromatografía líquida de alta eficiencia HPLC  Características, ventajas y desventajas.  Esquema del equipo de HPLC y descripción de cada una de sus partes (solventes, bomba, inyección, pre- columna, columna, rellenos, detectores)

 Elución isocrática, elución con gradiente  Eficiencia de la columna en HPLC Cromatografía líquida de alta eficiencia HPLC

Cromatografía de gases  Características, ventajas y desventajas.  Tipos de fases e interacciones  Esquema de cromatógrafo de gases y descripción de cada una de sus partes (gas portador, reguladores presión y caudal, inyección, horno, tipo de columnas y sus características).

Cromatografía de gases  Elución isotérmica vs. gradiente de temperatura.  Detectores (conductividad térmica, ionización de llama, captura electrónica).