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Actividad anti-cáncer de los extractos y sus compuestos activos obtenidos de productos naturales João Ernesto de Carvalho RIBECANCER Itajaí – SC - BR 26.

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1 Actividad anti-cáncer de los extractos y sus compuestos activos obtenidos de productos naturales João Ernesto de Carvalho RIBECANCER Itajaí – SC - BR 26 – 28/11/2012

2 Búsqueda de nuevos medicamentos contra el cáncer l Triage (screening) inicial en cultura de células tumorales humanas l Estudios de los mecanismos de acción l Modelos experimentales de cáncer en animales de laboratorio l Estudios de toxicidad l Estudios clínicos

3 Triage (screening) inicial: líneas celulares de cáncer humano l l Leucemia (K 562) l l Pulmón (NCI H460) l l Mama (MCF 7) l l Ovario con fenotipo de resistencia a múltiplos fármacos (NCI ADR) l l Melanoma (UACC 62) l l Riñón (786 0) l l Colon (HT 29) l l Ovario(OVCAR 03) l l Próstata (PCO 3) l l Glioma (U251)

4 Triage in vitro Inoculación placas de 96 pocillos Adición de las muestras Fijación ácida de la placa controle (tiempo cero) Fijación: adición de ácidoColoraciónSRBSolubilización del colorante (trizma base) Densidadóptica 540 nm Incubación 24 horas Incubación Incubación 48 horas Incubación RPMI + soro fetal bovino RPMI + soro fetal bovino

5 ContrcélulaBrancomeio Branco substância teste 1 D1D2D

6 Doxorrubicina

7 Holbeck, S.L. Update on NCI in vitro drug screen utilities European Journal of Cancer 40 (2004) 785–793

8 UNIVALI/RIBECANCER

9 Colecta y Identificación Material vegetal Extracto orgânico Material vegetal Extractohidroalcoólico diclorometano etanol 70% Teste de actividad anticâncer in vitro 5-10 mg segundacolecta Fraccionamiento de los extractos activos

10 Fraccionamento De los extractos activos Teste de actividad anticâncer in vitro 5-10 mg Aislamiento princípios activos Teste atividade antiproliferativa Identificación princípios activos Estudios agronômicos y cultivo Identificación princípios activos Extración y aislamiento en gran cuantidad síntesis

11 Mecanismo de acción Testes en animales de laboratorio 0,1 – 100 gramos Formulaciónfarmacéutica Toxicologíapre-clínica Estudios clínicos Fases I, II, III e IV Testes in vivo

12 EBD - Pothomorphe umbellata (Piperaceae) - pimienta Sacoman et al. Braz. J. Medical Biological Res. 41: 411, 2008

13 Tumor ascitico de Ehrlich en ratones Inoculación 0,5 mL 10 4 celulas del tumor de Ehrlich en el abdomen de ratones ip. via Tratamientos: 4 0, 11 0 y 18 0 dia Controle negativo: salina Controle positivo: doxorrubicina 5 mg/ kg EBD 100, 200 y 400 mg/ kg Pós-inoculación Numero y fechas de las muertes ANOVA y curva de sobrevida Kaplan-Meier n=10 Sacoman et al. Braz. J. Medical Biological Res. 41: 411, 2008

14 Tumor ascítico de Ehrlich: curva de sobrevida

15 Tumor sólido Ehrlich en ratones l Las celulas del tumor de Ehrlich son inoculadas en la pata l Evaluación: –medida del volumen de la pata –peso relativo del tumor –analises histológicas –aumento de peso de los animales

16 Pletismometro: determinación del volumen tumoral

17 Tumor sólido de Ehrlich en ratones Dosis de 30 mg/kg inibición de crecimiento

18 Metástasis pulmonar inducida pela linaje B16-F10 (melanoma)

19 Fibra semipermeable (Hollow-fiber) - Encapsulamiento de la linaje tumoral y incubación por 24 horas -Implante de las fibras en ratones Balb-C, tejido subcutáneo dorsal y abdomen Tratamientos - Sacrificio en el 14º. día para evaluación de la viabilidad celular por MTT

20 Fibra semipermeable: tejido subcutáneo dorsal y abdomen

21 Hollow-Fiber – K. coriacea (Fr7) Hollow-fiber: abdomen

22 Hollow-Fiber model – K. coriacea (Fr7) Hollow-fiber: subcutáneo dorsal

23 Metodologías en desarrollo Tumor xenográfico Citometria de flujo

24 Gracias João Ernesto de Carvalho Divisão de Farmacologia e Toxicologia CPQBA – Unicamp


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