João Ernesto de Carvalho

Presentación del tema: "João Ernesto de Carvalho"— Transcripción de la presentación:

1 João Ernesto de Carvalho
Actividad anti-cáncer de los extractos y sus compuestos activos obtenidos de productos naturales RIBECANCER Itajaí – SC - BR 26 – 28/11/2012 João Ernesto de Carvalho

2 Búsqueda de nuevos medicamentos contra el cáncer
Triage (screening) inicial en cultura de células tumorales humanas Estudios de los mecanismos de acción Modelos experimentales de cáncer en animales de laboratorio Estudios de toxicidad Estudios clínicos

3 Triage (screening) inicial: líneas celulares de cáncer humano
Leucemia (K 562) Pulmón (NCI H460) Mama (MCF 7) Ovario con fenotipo de resistencia a múltiplos fármacos (NCI ADR) Melanoma (UACC 62) Riñón (786 0) Colon (HT 29) Ovario(OVCAR 03) Próstata (PCO 3) Glioma (U251)

4 Triage in vitro Inoculación placas de 96 pocillos RPMI +
soro fetal bovino Incubación 24 horas Fijación ácida de la placa controle (tiempo cero) Adición de las muestras Incubación 48 horas Fijación: adición de ácido Coloración SRB Solubilización del colorante (trizma base) Densidad óptica 540 nm

5 Branco substância teste
Contr célula Branco meio Branco substância teste 1 D1 D2 D3 2 4 5 3

6 Doxorrubicina

7 Holbeck, S.L. Update on NCI in vitro drug screen utilities
European Journal of Cancer 40 (2004) 785–793

8 UNIVALI/RIBECANCER

9 de los extractos activos
Colecta y Identificación Material vegetal diclorometano Material vegetal Extracto orgânico etanol 70% Teste de actividad anticâncer in vitro 5-10 mg Extracto hidroalcoólico segunda colecta Fraccionamiento de los extractos activos

10 De los extractos activos Extración y aislamiento
Fraccionamento De los extractos activos Teste de actividad anticâncer in vitro 5-10 mg Aislamiento princípios activos Estudios agronômicos y cultivo Teste atividade antiproliferativa Identificación princípios activos Identificación princípios activos Extración y aislamiento en gran cuantidad síntesis

11 animales de laboratorio
Testes in vivo Testes en animales de laboratorio 0,1 – 100 gramos Formulación farmacéutica Mecanismo de acción Toxicología pre-clínica Estudios clínicos Fases I, II, III e IV

12 EBD - Pothomorphe umbellata (Piperaceae) - pimienta
Sacoman et al. Braz. J. Medical Biological Res. 41: 411, 2008

13 Numero y fechas de las muertes ANOVA y curva de sobrevida Kaplan-Meier
Tumor ascitico de Ehrlich en ratones Inoculación 0,5 mL 104 celulas del tumor de Ehrlich en el abdomen de ratones Tratamientos: 40, 110 y 180dia Controle negativo: salina Controle positivo: doxorrubicina 5 mg/ kg EBD 100, 200 y 400 mg/ kg ip. via Pós-inoculación n=10 Numero y fechas de las muertes ANOVA y curva de sobrevida Kaplan-Meier Sacoman et al. Braz. J. Medical Biological Res. 41: 411, 2008

14 Tumor ascítico de Ehrlich: curva de sobrevida

15 Tumor sólido Ehrlich en ratones
Las celulas del tumor de Ehrlich son inoculadas en la pata Evaluación: medida del volumen de la pata peso relativo del tumor analises histológicas aumento de peso de los animales

16 Pletismometro: determinación del volumen tumoral
16

17 Tumor sólido de Ehrlich en ratones
Dosis de 30 mg/kg  inibición de crecimiento

18 Metástasis pulmonar inducida pela linaje B16-F10 (melanoma)

19 Fibra semipermeable (Hollow-fiber)
- Encapsulamiento de la linaje tumoral y incubación por 24 horas Implante de las fibras en ratones Balb-C, tejido subcutáneo dorsal y abdomen Tratamientos - Sacrificio en el 14º. día para evaluación de la viabilidad celular por MTT

20 Fibra semipermeable: tejido subcutáneo dorsal y abdomen

21 Hollow-Fiber – K. coriacea (Fr7)
Hollow-fiber: abdomen

22 Hollow-Fiber model – K. coriacea (Fr7)
Hollow-fiber: subcutáneo dorsal

23 Metodologías en desarrollo
Tumor xenográfico Citometria de flujo

24 João Ernesto de Carvalho Divisão de Farmacologia e Toxicologia
Gracias João Ernesto de Carvalho Divisão de Farmacologia e Toxicologia CPQBA – Unicamp