MEDIOS DE CULTIVO Primera parte Microbiología General Universidad Nacional de San Luis Agosto 2013

Clasificación de los microorganismos según la fuente de energía y carbono

PROCARIOTAS EUCARIOTAS Bacterias Hongos y levaduras Cianobacterias www.profesorenlinea.cl EUCARIOTAS urbinavinos.blogspot.com Cianobacterias Protozoos

CONDICIONES QUÍMICAS Elementos energéticos y constitutivos: a) Macroelementos Fuente de carbono Fuente de nitrógeno Fuente de fósforo Fuente de azufre Fuente de calcio, magnesio y potasio Fuente de sodio Fuente de Fe b) Microelementos o trazas: Cr, Co, Cu, Mn, Mo, Ni, Au, Ag, Cd, Cr, Pb c) Factores de crecimiento 2. Agua 3. Agentes solidificantes: agar, gelatina, agarosa, silicagel, albúmina

Factores de crecimiento A ---- B ---- C ---- Histidina No es factor de crecimiento   A ---- B --X-- ….. ---- ……. Es factor de crecimiento Ejemplos: *vitaminas, como las del complejo B *algunos aminoácidos *purinas y pirimidinas

CONDICIONES FÍSICAS Temperatura pH Humedad Luz Requerimientos de O2

Requerimientos de O2 Aerobios estrictos Anaerobios obligados Anaerobios facultativos Microaerófilos Anaerobios aerotolerantes

CO2 ………………… burbujeo continuo KNO3 ……………. 1 g/l MgSO4 …………… 0.5 g/l Medio para fototrofos   (sintético o químicamente definido) CO2 ………………… burbujeo continuo KNO3 ……………. 1 g/l MgSO4 …………… 0.5 g/l KH2PO4 …………… 0.035 g/l Trazas …………….. 10-4 - 10 -5 g/l (NaVO3, NiSO4, ZnCl2, H3BO3,….., etc) H2O ………………………… 1000 ml solidificante ?? Exponer a la luz solar o artificial.

Medio de cultivo sintético para quimioorganotrofos

Para QUIMIOOGANOTROFOS Medio de cultivo A Medio de cultivo B (sintético o quimícamente (complejo o natural)  definido) K2HPO4 ............ 7 g KH2PO4 ……… 2 g Extracto de carne ….. 3 g (NH4)2SO4 …… 1 g Peptona ……………. 5 g MgSO4 ……… 0.1 g NaCl ………………… 5 g CaCl2 ……….. 0.02 g Agua dest. ……. 1000 ml Glucosa ……. 4-10 g Trazas: pH 7 Fe, Co, Mn, Zn, Cu, Ni, Mo) …….... 2-10 µg c/u Agua destilada …….. 1000 ml pH 7

Producto de la hidrólisis de proteínas: mezcla PEPTONAS Producto de la hidrólisis de proteínas: mezcla Peptona: mezcla de aa y péptidos. Proteína de origen vegetal o animal Hidrólisis ácida o enzimática Sólo para QUIMIOORGANOTROFOS -Fuente de nitrógeno -Fuente de carbono y energía, cuando no hay azúcares en el medio de cultivo

de carne: concentrado de componentes hidrosolubles de la carne. EXTRACTOS de carne: concentrado de componentes hidrosolubles de la carne. de levadura: producto de lisis ácida o enzimática de levaduras de malta: producto de cebada malteada, reemplaza al extracto de levadura Sólo para QUIMIOORGANOTROFOS -aportan factores de crecimiento, especialmente vitaminas. Factores de crecimiento

Agar nutritivo (para bacterias quimioorganotrofas)   Peptona de carne ………….. 0.5 g Extracto de carne ………….. 0.3 g NaCl ………………………… 0.5 g Agar ……………………… 1.5 – 2 g Agua destilada ……………. 100 ml

CLASIFICACION DE LOS MEDIOS DE CULTIVO -por origen: - sintético o químicamente definido fórmula química exactamente conocida - natural o complejo fórmula química no se conoce con exactitud -por consistencia: - líquido (sin agar) -sólido (con agar: al 0.3% semisólido al 1.5 – 2% sólido)

- comunes: AGAR NUTRITIVO -peptona de carne -NaCl -agua destilada -por su composición: - comunes: AGAR NUTRITIVO -peptona de carne -extracto de carne -NaCl -agar 2% -agua destilada - enriquecidos: AGAR SANGRE

Por su función: -de transporte: - medio de Stuart - medio de Cary Blair Contiene buffer + sustancias criopresevantes (glicerol)

Por su función: - de enriquecimiento (líq.) - selectivos (sólidos) Caldo Mac Conkey (inhibidor + lactosa + púrpura de bromocresol Agar Mac Conkey (inhibidor + lactosa + rojo neutro)

Agar triple azúcar hierro (TSI) Por su función: -diferencial Fermentación de. -glucosa ? -sacarosa ? -lactosa ? Producción de H2S ? El medio incluye los 3 azúcares, sal de Fe2+ y un indicador de pH (rojo neutro) Enterobacter Shigella Pseudomonas Proteus Agar triple azúcar hierro (TSI)