Taxonomía Fungal La clasificación fungal es nueva y ha cambiado Clasificación, según Bar (1988): División Eumycota Subdivisión Mastigomycota Clase Chytridiomycetes Orden Spizellomycetales Familia Neocallimasticaceae

Género El género es distinguido por la morfología Thallus: Monocéntrico y policéntrico. Rizoide: Filamentos y bulbos. Zoosporas: Uni- o Multiflageladas Todos los géneros rizoides tiene filamentos, excepto las especies caecomyces. (Trinci et al. 1994)

Piromyces y Caecomyces Especies Son separadas por sus características morfológicas y estructurales. Las Piromonas y Sphaeromonas se asumía que eran protozoarios por lo que fueron cambiados a: Piromyces y Caecomyces (Trinci et al. 1994)

Fungis Policéntricos Neocallimastix joyonii (Breton et al. 1989) Orpinomyces joyonii (Trinci et al. 1994) debido asu patrón de crecimiento policéntrico Ruminomyces y Anaeromyces tienen características similares al monocéntrico

Aislamiento y Enumeración Han sido aislados de: bovinos, ovinos, caballos, canguros y elefantes En heces y tractos gastrointestinales y fluido ruminal Orpinomyces fue aislado en charcos y pasturas de las vacas La dieta animal tiene efectos sobre las poblaciones fungales (Trinci et al. 1994)

La biomasa fungal es difícil determinar La estimación:método gravimétrico con digestión enzimática con quitina El conteo (103 – 107 ml) no provee una adecuada estimación fungal Para el tamaño de las poblaciones fungales se han utilizado diluciones en agar y otra soluciones

Condiciones para aislamiento Anaerobiosis pH de 6.5 a 6.7 T° de 39° Materiales para aislamiento Bufer: Carbonato/Fosfato Fluido ruminal Resazurina (indicador redox) Carbohidratos Antibióticos

Almacenamiento T° de 39° C Fibra en agar Nitrógeno líquido Dimetilsulfóxido Enfriamiento a 1.5°C Glicerol

Cultivos y Almacenamiento Mantenidos por transferencia frecuente ( 2 a 7 días). Algunas especies 24 a 48 horas. Otros Intervalos semanales. Isolados monocéntricos – 2 a 3 días. Isolados policéntricos – semanalmente. Mantenimiento largo en tiempo – 39 oC en fibra Sisal embebida en agar. En nitrógeno líquido con dimetilsulfoxido como crioprotector para “fungi” anaeróbico sirve también para largo tiempo.

Preservación 1.5 oC por minuto hasta -70 oC con glicerol como crioprotector. Resucitados a 39 oC. Restos de esporas “fungi” ruminales, Esporas anaeróbicas de heces. Inducidas in vitro, no germinadas in vitro (Wubah et al., 1991b).

proceso de manipulación de formación y germinación de esporas – método de conservación. “Fungi” anaeróbicos no son listados en la ATCC (American Type Culture Collection) como “Fungi” filamentosos o Protistas.

6. Protozoarios Ruminales 6.1 Introducción Basados en el tamaño relativo Primeros microorganismos ser descubiertos Muy móviles y viables en el rúmen y retículo Inmóviles y aparentemente desintegrados en el omaso y abomaso. Los Protozoarios celulares no identificados en intestino delgado. Utilizados como alimento.

Explicación de Sobrevivencia Especificidad del hábitat, esencialidad para el huésped. Defaunación. Alta especialización al rúmen o hábitat. Actividades metabólicas (relación bacterias y “fungi”).

Protozoas Flagelados. Baja población Zoosporas Fúngicas (decrecimiento) Limitados Esquema de Clasificación ha cambiado algunas veces en 30 años. Terminología difícil Referencia a “Holotrichs” y “Entodiniomorphs”

Papeles en el rumen: Clasificación de efectos Medio ambiente del rumen Componentes de la sangre Metabolismo y digestión en el rumen Sobre el animal Fermentación de carbohidratos solubles Holoctrichs como principal degradador Entodinromorphs Procurar incrementar la población de Holotrichs

Digestión de almidón Entodiniomorphs como principales degradadores Isotricha Uso como fuente de energía o síntesis intracelular de polisacáridos Principales productos

Digestión de Carbohidratos Estructurales Actividad celulolítica (orden entodiniomorfos) Epidinium caudatum, Eudiplodium maggii, Ostrocadinium dilobum y varias Spp Entodinium Holotricha Enzimas que degradan hemicelulosa (10 géneros, entodiniomorfos, subfamilias Diplodiniinae y Ophryoscoliceneae. Baja actividad Orden holotricha

Monosacáridos, disacáridos y oligosacáridos Spp de protozoarios poseen la hidrolasa glicosidica Pectina es depolimerizada por los protozoarios (metanol, ac. Galacturónico o poligalactoranidos)

Digestión de la Proteína Los entodiniomorfos digieren la caseína insoluble Son importante en la degradación de proteínas insolubles Sp isotricha (caseína soluble e insoluble) Mayor actividad proteolítica en el citoplasma

Absorción y digestión de bacterias -Gutierrez 1955. Isotricha. No se desarrolla sin bacterias. -Probablemente bacterias proveen mayoría de N para crecimiento. -Inhabilidad para biosintetizar o interconvertir aminoácidos (E. caudatum. -Pérdida gradual de enzimas. -Compuestos preformados por crecimiento de bacterias -Protozoarios pueden “absorber” < 1% de total bacterial / minuto concentrados.

Productos de digestión de bacterias: Aminoácidos , 50% retenido VFA Amonia  Amoniácidos bacterianos en el animal, digestibilidad de proteina protozoaria. Limitado pasaje ruminal. Relacionado con  normal después de alimentación.

Cambios en población de protozoarios Establecimiento de poblaciones: Contacto directo en etapas jóvenes. Presencia en la boca de la madre Saliva en las plantas Aerosoles entre animales

Variación en el horario Diferencias entre entodiniomorfos y holotricos Alimentación 1 / día, entodiniomorfos  5-6 horas / gradual 20 a 22 hrs. Holotrichs, pico momentos antes o después de alimentación /  Entodiniomorfos Diluciones asociadas a alimentación. Y cambios en crecimiento celular. Migraciones celulares: Paredes rumen, retículo y porción ventral.

OTROS FACTORES QUE AFECTAN LA CONCENTRACION DE PROTOZOARIOS DIETA  forraje : concentrado 20 – 40 % de concentrado maximiza la Ι protozoariosΙ  60 %  entodinium El efecto del concentrado se puede disminuir controlando el consumo FRECUENCIA DE ALIMENTACION GEOGRAFICAS i.e. Polyplastron multivesiculatum VARIACION ANIMAL i.e. Ophryoscolecidae y Caloscolex

Clasificación de los Protozoarios Ruminales

Identificación de Protozoos ruminales Como nombrar las partes de un protozoo. Parte bucal hacia delante se le marca a las 12 hrs. · La parte mas cercana al observador se le denomina superficie superior y la contraria se le denomina superficie inferior.