FACULTAT MEDICINA – IDIBAPS - ONCOLOGIA MOLECULAR   Análisis de SNPs en los genes de reparación del DNA, XPA, XPD, ERCC1 y XPG/ERCC5 en pacientes con cáncer colorectal (CCR) tratados con oxaliplatino.   Moreno I 1, Monzó M2, Ibeas R1, Navarro A2, Artells R2, Gel B2, Martinez F3, Hernandez R3, Moreno J3, Pou E3. 1.Dep Oncologia, H. Municipal de Badalona-BSA. 2.Dep de Anatomía Humana-IDIBAPS. Universidad de Barcelona. 3 .Dep Cirugia, Hospital Municipal Badalona-BSA.

INTRODUCCION La actividad citotóxica del Oxaliplatino se debe a la Lesión del Oxaliplatino La actividad citotóxica del Oxaliplatino se debe a la unión con los nucleótidos guanina y citosina en el DNA 1º- Proteinas específicas detectan la lesión XPA XPD La lesiónes producidas en el DNA son inicialmente detectadas por enzimas específicos de reparación; XPA -XPD 2º Acción de ENDONUCLEASAS, ERCC1 corta en 5’ y XPG corta en 3’ XPA XPD E R C 1 X P G Seguidamente , las endonucleasas ERRC1 y XPG seccionan el DNA, y son eliminados de 25 a 30 nucleótidos localizados alrededor de la lesión. Finalmente , polimerasas y ligasas sintetizan una nueva cadena 4º Polimerasas (Pol d) PCNA y LIGASAS sintetizan una nueva cadena Pol d LIGS

OBJETIVO XPA XPD E R C 1 X P G Comprobar en pacientes de CCR metastásicos tratados en primera línea con Oxaliplatino/Fluoropirimidina => Si la presencia de polimorfismos de una sola base (SNPs) en los genes XPA, XPD,ERCC1 y XPG, que codifican para las proteínas que detectan y reparan las lesiones del DNA, se relacionan con la respuesta objetiva, tiempo a la progresión y supervivencia global.

DNA obtenido de sangre periférica de 42 PACIENTES Y MUESTRAS Abril-02 hasta mayo-05 DNA obtenido de sangre periférica de 42 pacientes con CCR metástasico y tratados en primera línea con Oxaliplatino/Fluoropirimidina DISCRIMINACION ALELICA SNP Probe Sequence FAM VIC Rs NCI XPA UTR 5’ ccatcttc[C/T]ggcccact C T 1800975 XPD Lys751Gln ctatcctct[G/T]cagcgtctcc G 13181 ERCC1 Lys259Thr caaaggga[A/C]agaaacct A 735482 XPG His146His Atcgcca[C/T]gggaact 1047768 Characteristics All Patients No of patients 42 Median age (range) 66 (44-79) Gender Male Female 21 (50%) Primary tumor site Colon Rectum 26 (62%) 16 (38%) Previous surgery 36 (86%) Previous Adjuvant Chemotherapy 12 (28%) ECOG PS 1 2 5 (12%) No. of metastases sites >2 Disease sites Liver Lung Primary (unresected) Lymph node Bone Others 27 (64%) 3 (7%) 24 (57%) 7 (17%) 2 (5%) 6 (14%) Serum CEA (ng/ml) >5 >100 13 (31%) Wt Hetero SNP

Time to progression (median) RESULTADOS SNPs frecuencias alélicas, tiempo a la progresión y supervivencia XPG Time to progresion (months) 50,00 40,00 30,00 20,00 10,00 0,00 1,0- 0,8- 0,6- 0,4- 0,2- 0,0- CC CT+TT p= 0.009 SNP Genotype N AA Time to progression (median) P-value Survival (median) XPA WT TT HET TC SNP CC 17 20 5 5’UTR 7.62 mo 9.66 mo 0.11 19.16 mo 18.11 mo 0.29 XPG WT CC HET CT SNP TT 19 4 His46His 9.86 mo 7.82 mo 0.009 32.18 mo 12.03 mo 0.0001 XPD WT AA HET AC 21 Lys751Lys Lys751Gln Gln751Gln 8.31 mo 8.41 mo 0.54 14.36 mo 19.20 mo 0.83 ERCC1 WT AA 33 Lys259Lys Lys259Thr Thr259Thr 8.51 mo 8.05 mo 0.76 30.04 mo 0.55 Survival (months) 60,00 50,00 40,00 30,00 20,00 10,00 0,00 1,0 0,8 0,6 0,4 0,2 0,0 XPG CC CT+TT p= 0.0001 Seguimiento medio de la serie, 39 meses. Mediana de Tiempo a la 1ª Progresión, 8.31 meses (95% IC, 7.8-8.8 meses) Mediana de Supervivencia global, 18.11 meses (95% IC, 12.86-23.37 meses)

Respuesta con genotipo XPG Complete response Partial response Stable disease Progressive disease p- value Wild –type CC 3 (15.8%) 11 (57.9%) 4 (21.1%) 1(5.3%) 0.04 Heterozygous + SNP, CT + TT 0 (0%) 8 (34.8%) 11 (47.8%) 4 (17.4%) TOTAL 3 (7.1%) 19 (45.2%) 15 (35.7%) 5 (11.9%) Seguimiento de la serie Seis pacientes (14%) tras haber recibido una media de 5 ciclos de XELOX (rango, 3-6 ciclos) y obtener Respuesta objetiva parcial, recibieron tratamiento quirúrgicos de las metástasis hepáticas. Dos pacientes rechazaron metastasectomía. 32 pacientes (76%), tras 1ª progresión, recibieron 1 ó más lineas de quimioterapia (XELIRI ; Cetuximab + oxaliplatino ó CPT11; Bevacizumab + Oxaliplatino ó CPT11 ó capecitabina). =>2ªlinea, 14 pacientes (44%); 3ª linea, 9 pacientes (28%); 4ª linea, 6 pacientes (19%) y >4 lineas, 3 pacientes (9%).

Combinaciones SNPs: XPG y XPA GENOTYPES Time to Progression (months) p-value Survival (months) Favorable genotype in combination XPG (CC) + XPA (TC/CC) 13.7 49.64 Unfavorable genotypes in combination XPG (CC)+ XPA (TT) XPG (TC/CC)+ XPA (TT/TC) XP (TT/TC) + (XPA) TT 7.8 0.0001 14.00 Time to progresion (months) 50,00 40,00 30,00 20,00 10,00 0,00 1,0 0,8 0,6 0,4 0,2 0,0 XPG (CC) + XPA (TC/CC) p= 0.0001 XPG and XPA Survival (months) 60,00 XPG and XPA Unfavorable genotypes

Análisis de Regresión Multiple de Cox A) Tiempo a la progresión, B) Supervivencia Covariables: Gender ; Age; No. metastases sites; Oxaliplatin dose (85 mg/m2 vs 130 mg/m2); Liver metastases vs others; Resection of metastases (yes or not); ECOG; and Genotype. Variable RR(95%CI) p-value A Gender, Males vs Female 2.66 (1.3-5.2) 0.005 ECOG (<1 vs 2) 3.48 (1.2-9.6) 0.016 XPG (CC) + XPA (TC/CC) vs others 6.38 (2.3-15.9) 0.0001 B 3.45 (1.4-8.4) 0.007 9.24 (2.6-31,8) 0.0005 Age (<66 vs >66) 2.53 (1.0-6.4) 0.049 No. Metastases sites (1 vs >1) 0.14 (0.05-0.3) 34 (6.3-183)

CONCLUSIONES El perfil genético de los pacientes, puede condicionar diferencias en la respuesta a un mismo tratamiento, así como en la supervivencia global. El genotipo XPG C/C constituye un marcador predictivo de respuesta objetiva favorable, mayor tiempo a la 1ª progresión y mejor supervivencia, para los pacientes con cáncer colorectal metastásico tratados con oxaliplatino en combinación con fluoropirimidina. El perfil genético XPG C/C y XPA T/C ó C/C constituye un marcador predictivo favorable para los pacientes, que presentan un mayor tiempo a la 1ª progresión y mejor supervivencia global. Estudios con mayor número de casos serían necesarios para confirmar estos resultados.