Una experiencia compartida Taller Seco Una experiencia compartida Enrique Longo Tec. Hemoterapia kikelongo@gmail.com

ESTUDIOS INMUNOHEMATOLÓGICOS EN EL RECIÉN NACIDO Anti-A Anti-B Anti-AB Anti-D Anti-CDE Neg Neg Neg Neg Pos Anti-C Anti-c Anti-E Anti-e Pos Pos Pos Pos

¿Fenogenotipo Cde/cdE? Anti-C Anti-c Anti-E Anti-e Técnica de Du Negativa Informar Grupo O RH negativo Fenogenotipo Cde/cdE ¿Fenogenotipo Cde/cdE? Madre O cde/cde Padre Anti-A Anti-B Anti-AB Anti-D Anti-CDE Neg Neg Neg Neg Pos Anti-C Anti-c Anti-E Anti-e Pos Pos Pos Pos

Madre O cde/cde Bebé O cde/CdE Padre O cde/CdE

DISTINTOS ANTI-D, ¿CUÁL/ES USAR? Técnica en lámina o tubo, hasta lectura 37ºC para pacientes y embarazadas Anti-D Blend Técnica en fase de SAGH para donantes y recién nacidos Anti-D IgM que no detecta DVI Pacientes y embarazadas Anti-D IgM que detecta DVI Donantes y recién nacidos

Los Ac monoclonales IgM anti-RH reaccionan mejor a 37ºC La temperatura de la reactividad óptima Ag-Ac se vincula mas con el tipo de reacción y la naturaleza química de los Ag, que con la clase de Ac. Los Ag de tipo carbohidrato suelen relacionarse con Ac “reactivos en frío” y los proteicos con Ac “reactivos en caliente” Manual Técnico 15ª Edición, Pág. 286

GENTILEZA DE THEI CARLOS REY Importancia del Antígeno D Sujetos Rh Negativo productores de Anti-D: 80% de los receptores de grandes volúmenes de sangre D positivo 20% de los transfundidos con plaquetas provenientes de dadores D positivo 10% de las pacientes que han tenido hijos D positivo y ABO compatibles GENTILEZA DE THEI CARLOS REY

A VECES MENOS ES MAS Paciente femenina de 69 años que ingresa la institución para una cirugía de cadera. Grupo A Pvo(+) Genotipo R1r Antecedentes: varias cirugías de cadera desde niña con transfusiones. 2 embarazos. Hace 20 años por el mismo diagnóstico la estudian en otra Institución y detectan e identifican anticuerpos con especificidad Anti-E + Anti-Jka. Ingresa en plan de Autotransfusión y en la cirugía sólo recibe unidades autólogas. En esta oportunidad en nuestra institución solo se detecta el cuerpo anti-E. Panel 1 de 11 viales. Panel 1 Anti-E

A Pvo(+) R1r genotipo PCD

Se realizan paneles de 16 viales de otra marca (Panel 2) Panel 3 con bromelina Y también con bromelina, detectando solo el Anti-E

No pudiendo ingresar en plan de autotransfusión, se comienza la búsqueda de unidades compatibles: Se realizaron las pruebas de compatibilidad en gel a unidades E (-) negativas con 50ul de suspensión globular y 25 ul del suero de la paciente. También se estudió con muestra sangre del yerno de la paciente. El antígeno E se determinó en gel con 50ul de dil globular + 1gota del gotero del frasco de anti-E. 50ul de suspensión globular + 25ul del antisuero utilizando pipeta automática y no gotero. En la determinación del anti-E no hubo modificaciones en ninguna célula estudiada, pero sí con el anti-Jka, la del yerno resultó Jka positivo.

A pesar de no haber detectado el anticuerpo anti-Jka (si identificado en la otra institución) también se investigó el antígeno Jka a las unidades compatibles y en la sangre del yerno. Se realizó con 50 ul de dilución globular + 1 gota del gotero del frasco de anti-Jka. Se reservan 5 unidades compatibles hasta la fecha de la cirugía. Pasan varios días, (cambiaron varias veces fecha de cirugía) entonces se rechequean las unidades con compatibilidad negativa, pero en ese momento se realiza la determinación del anti-E y del anti-Jka de la siguiente forma:

La paciente se operó, recibió 5 unidades. Ya fue dada de alta. YERNO YERNO Segundas pruebas con pipeta Finalmente se compatibilizaron nuevas unidades y a las compatibles se les determinó el antígeno utilizando 25 ul de los antisueros específicos dispensándolos con pipeta automática y no con el gotero del frasco. La paciente se operó, recibió 5 unidades. Ya fue dada de alta.

PRESENTACION DE UN CASO PACIENTE: DOLORES FUERTES SE SOLICITAN 2 UNIDADES DE GRD. GRUPO Y RH: 0 POS UNIDADES COMPATIBILIZADAS: UNIDAD L. I. 37ºC SAGH 2028 4+ 2059

ANAMNESIS ANTECEDENTES TRANSFUSIONALES: NO REFIERE ANTECEDENTES GESTACIONALES: 2 EMBARAZOS 2 HIJOS MEDICACION:

IDENTIFICACIÓN DE ANTICUERPOS PANEL DE 11 TUBOS: 11 TUBOS POSITIVOS 4+ AUTOCONTROL: POSITIVO 4+ PAD MONOESPECIFICA: ANTI IgG 4+ ANTI C3b C3d NEGATIVO

¿ ?

BUSCAR LA SANGRE MAS ADECUADA COMO DIJO EL DR. TORRES: BUSCAR LA SANGRE MAS ADECUADA

ALGORRITMO DE TRABAJO SEGÚN EL GRADO DE URGENCIA DETERMINACION DE ABO, FENOTIPO RH Y K. TRANSFUNDIR RESPETANDO ABO, FENOTIPO RH Y KELL, PREVIENE EL 80 % DE LAS REACCIONES POSTRANSFUSIONALES. ESTE CRITERIO SOLO ES VÁLIDO PARA TRANSFUNDIR A UN PACIENTE EN ESTADO CRITICO. SI EL TIEMPO LO PERMITE, ES NECESARIO REALIZAR ESTUDIOS COMPLEMENTARIOS

TIPIFICAR PARA K, Fy, Jk, MNSs. PARA TIPIFICAR SERA NECESARIO SI ES POSIBLE: TIPIFICAR PARA K, Fy, Jk, MNSs. PARA TIPIFICAR SERA NECESARIO NEGATIVIZAR LA PAD. CLOROQUINA EDTA GLICINA

SOLUCIÓN DE DIFOSFATO DE CLOROQUINA Disociación de inmunoglobulinas unidas a hematíes Principio del ensayo Los hematíes que exhiben una PAD positiva se incuban en una solución isosmótica de difosfato de cloroquina durante un tiempo límite de dos horas a temperatura ambiente. Luego se lavan y se resuspenden en salina fisiológica. La reactividad de los antígenos eritrocitarios, después del tratamiento de cloroquina, no está relativamente afectada.

PROCEDIMIENTO Lavar los hematíes que se vayan a tratar al menos tres veces en volúmenes suficientes de salina fisiológica para quitar el suero o plasma humano contaminante. Colocar 1 volumen de los hematíes lavados y empaquetados en un tubo apropiadamente rotulado. Añadir 4 volúmenes de cloroquina y mezclar minuciosamente. Incubar durante un tiempo mínimo de 30 minutos y un máximo de dos horas a temperatura ambiente (23°C±3°C).

Lavar los hematíes por lo menos 3 veces con solución fisiológica. Realizar una PAD de control para ver si el anticuerpo está disociado.

Disociación de inmunoglobulinas unidas a hematíes REACTIVO EDTA GLICINA Disociación de inmunoglobulinas unidas a hematíes Consiste en tres soluciones. Solución 1: Una solución concentrada de sodio EDTA. Solución 2: Una solución de glicina de bajo pH. Solución 3: Una solución de aminometano TRIS (hidroximetil).

PROCEDIMIENTO Lavar minuciosamente los hematíes recubiertos con IgG. Suspenderlos brevemente en una solución ácidoglicina EDTA para desasociar el anticuerpo. Llevar inmediatamente a un pH neutro con el TRIS Buffer. Centrifugar y volver a lavar tres veces con solución salina. Si la PAD es negativa, los hematíes lavados ya están preparados para examinar sus antígenos de superficie mediante el test de antiglobulina.

Se ha demostrado que el método ácido-EDTA es el procedimiento de elección más adecuado para determinar los hematíes recubiertos con aloanticuerpos reactivos en caliente: IgG o autoanticuerpos.

LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO El tratamiento inactiva los antígenos del sistema de grupo sanguíneo Kell, así como el Era, Bg, y posiblemente otros. Este reactivo no desnaturaliza los antígenos sensibles a las enzimas, como por ejemplo, los que pertenecen a los sistemas Duffy y MNSs.

AUTOABSORCION SÓLO SE PUEDE REALIZAR CUANDO EL PACIENTE NO HA SIDO TRANSFUNDIDO EN LOS ULTIMOS TRES MESES.

UTILIZACIÓN CON POLIETILENGLICOL AUTOABSORCIÓN UTILIZACIÓN CON POLIETILENGLICOL

OBJETIVO Se trata de potenciar la adsorción de autoanticuerpos séricos a eritrocitos autólogos con el fin de detectar e identificar aloanticuerpos enmascarados por la panaglutinina, mediante la adición de PEG.

MATERIALES SUERO O PLASMA PROBLEMA. GLÓBULOS ROJOS AUTOLOGOS. PEG.

METODO Separar tantas alícuotas de hematíes como ciclos de autoadsorción se prevean hacer. (NO MAS DE 4) Rotular los tubos con apellido del paciente y el número de alícuota. Centrifugar los tubos por 10 minutos a 3000 rpm. Descartar el sobrenadante por aspiración.

Dispensar un volumen de suero igual al volumen de eritrocitos del tubo 1. Agregar un volumen de PEG, igual al de suero. Mezclar bien. Incubar durante 15 minutos a 37ºC. Centrifugar durante 10 minutos a 3000 rpm.. Trasvasar el sobrenadante al tubo Nº 2. Realizar una DAI con autocontrol al sobrenadante.

TÉCNICA DE DAI CON AUTOCONTROL Enfrentar 6 gotas del sobrenadante + 1 gota de GR al 3%. Para el autocontrol enfrentar el sobrenadante a los GR autólogos (PAD negativa) en la misma proporción. Incubar 15 minutos a 37ºC. Lavar 4 veces Agregar 2 gotas de SAGH anti IgG.

INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS AUTOCONTROL NEGATIVO + DAI NEGATIVA: AUTOANTICUERPOS ADSORBIDOS NO SE EVIDENCIAN ALOANTICUERPOS CONDUCTA: NO SEGUIR AUTOABSORBIENDO

INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS AUTOCONTROL POSITIVO + DAI POSITIVA AUTOANTICUERPO LIBRE EN SUERO. CONDUCTA: SEGUIR AUTOABSORBIENDO

INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS AUTOCONTROL NEGATIVO + DAI POSITIVA AUTOANTICUERPOS ADSORBIDOS ALOANTICUERPOS LIBRES CONDUCTA: NO SEGUIR AUTOABSORBIENDO IDENTIFICAR EL ALOANTICUERPO

ANEMIA HEMOLITICA AUTOINMUNE ESPECIFICIDAD RELATIVA Fenotipo de GR 2 4 8 16 32 64 128 256 rr 4+ 3+ 2+ 1+ R1 R1 R2 R2 GENTILEZA DEL DR. TORRES

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MUCHAS GRACIAS!!! MUCHAS GRACIAS