HOSPITAL CIVIL DE GUADALAJARA ASOCIACION DE QUIMICOS FARMACOBIOLOGOS Y TECNICOS DEL LABORATORIO CLINICO DEL HOSPITAL CIVIL DE GUADALAJARA A. C.

TOMA, TRANSPORTE Y MANEJO DE COPROCULTIVO

EPIDEMIOLOGIA Las diarreas siguen constituyendo uno de los mayores problemas de salud en los tiempos actuales. Se estima que 1 billón de episodios de diarrea ocurre anualmente en todo el mundo en niños menores de 5 años ; resultando en 5 millones de casos fatales. Niños en países en vías de desarrollo presentan 3 a 5 veces más episodios de diarrea que los niños en países desarrollados.

EPIDEMIOLOGIA La detección de los patógenos entéricos está muy dificultada por la presencia de una microbiota normal intestinal compleja y abundante, que se desarrolla después del nacimiento.

BIOTA PRESENTE EN CONDICIONES NORMALES Lactantes (alimentación materna). Altos niveles de Bifidobacterium Bajos niveles de E.coli y Enterobacterias · Lactantes (alimentación artificial) Altos niveles de grampositivos Bajos niveles de Bifidobacterium

BIOTA PRESENTE EN CONDICIONES NORMALES Niños y adultos Predominancia de Anaerobios Anaerobios Facultativos y Aerobios: % E.coli " 80% % Enterococos " 14% % Staphylococcus y Streptococcus " 4% % Otros " 2% " Dieta rica en proteínas: predominancia de biota Grampositiva. " Dieta rica en hidratos de carbono: predominio de Gramnegativa.

ASPECTOS CLINICOS Y PATOGENIA Se pueden presentar tres tipos de anomalías intestinales: · Infección intestinal Debida a la producción de cambios ecológicos por la acción directa del microorganismo. · Intoxicación alimentaria Producida indirectamente por el microorganismo a través de la producción de toxinas, antes de la ingestión por la persona. · Toxiinfeción alimentaria Producida por el microorganismo a través de la producción de toxinas, después de su ingestión por la persona.

ASPECTOS CLINICOS Y PATOGENIA La gran mayoría de las infecciones gastrointestinales resultan de la ingestión de una dosis suficiente del agente etiológico que permita atravesar las barreras protectoras del organismo como son barrera ácida del estómago, mucosa intestinal, motilidad intestinal, microbiota normal, los sistemas inmunes celulares y humorales, y los tejidos linfáticos asociados.

ASPECTOS CLINICOS Y PATOGENIA Los aspectos clínicos de la enfermedad puede dar claros indicios de la etiología de la misma: Una historia de reciente utilización de antimicrobianos puede sugerir una enfermedad causada por Clostridium difficile. Una historia de viajes recientes puede sugerir enteropatógenos como Vibrio cholerae, V. parahaemolyticus.o E coli enterotoxigénica.

ASPECTOS CLINICOS Y PATOGENIA El espectro de las manifestaciones clínicas es amplio y variable, ciertos síntomas pueden manifestarse en ciertas etiologías en particular: Disentería (shigelosis, E.coli enteroinvasiva, campylobacteriosis, E. coli verocitotogénica. ECET) Deposiciones como “agua de arroz” (cólera) Colitis hemorrágica o síndrome urémico hemolítico SUH (E. coli verocitotoxigénica) Diarreas de corta incubación con vómitos como característica predominante (toxina estaficosica).

ASPECTOS CLINICOS Y PATOGENIA El tiempo de incubación de la enfermedad es típicamente de 24 a 48 hrs. para la mayoría de los patógenos bacterianos, pero mucho más largo para otros como Campylobacter ( 3 a 11 días) y ECVT (3 a 5 días).

ASPECTOS CLINICOS Y PATOGENIA Durante el período de incubación el agente se establece en el intestino, coloniza la mucosa,se multiplica en grandes números y utiliza estrategias de virulencia como: adherencia, producción de citotoxinas o enterotoxinas, e invasividad.

ASPECTOS CLINICOS Y PATOGENIA Ejemplo: Tenemos a agentes etiológicos enteroinvasivos como Shigella y ECEI tienen la habilidad de penetrar y multiplicarse dentro de las células epiteliales de la mucosa del colon produciendo su destrucción. Este proceso es asociado a una inflamación aguda, ulceración, que puede llevar a necrosis de la mucosa, características típicas de la disentería bacilar.

RECOLECCION Y TRANSPORTE DE MUESTRAS La muestra de heces debe ser recolectada durante el período agudo de la enfermedad porque es más fácil comprobar presencia de pus, moco o sangre, y antes de la administración de antimicrobianos. Para asegurar el aislamiento de agentes bacterianos en la diarrea debe ser enviada inmediatamente al laboratorio después de obtenida.. Si la demora entre la toma de muestra y el procesamiento de ésta es mayor a dos horas, se debe enviar la muestra en Medio de transporte.

RECOLECCION Y TRANSPORTE DE MUESTRAS La formulación del Medio Cary Blair es adecuada para la recuperación de la generalidad de las bacterias patógenas. Hasta tres muestras es el número óptimo de coprocultivos para obtener un buen resultado en el aislamiento del agente infeccioso, especialmente cuando los síntomas no son claros y definitivos.

OBSERVACIÓN DE MUESTRAS Macroscópicamente: -Se comprueba su olor, consistencia, presencia de mucus, sangre, restos de alimentos sin digerir.

OBSERVACIÓN DE MUESTRAS Microscópicamente: -Sometemos la muestra a una tinción simple con azul de metileno. Esto nos permite comprobar la presencia o ausencia de leucocitos. Así: -"presencia de leucocitos” la infección ha cursado con inflamación intestinal. Se trata por tanto de microorganismos invasivos como Shigella o ETEC. -"ausencia de leucocitos” significa que no ha habido inflamación por lo que la infección puede ser debida a virus (Rotavirus) o a bacterias productoras de toxinas (Vibrio cholerae).

patógenoorigenprocedimiento enriquecimientocultivoincubación Aeromonas sppagua Agar Sangre Agar CIN 48 hrs.a 35°C aerobiosis Bacillus cereus Carnes, Salsas Vegetales Medio de Carne picada 48Hrs. Agar Sangre 72 hrs.a 35°C Anaerobiosis y serología Campylobacter C. jejuni C. coli Agua,animales,carne,aves, leche Medio líquido Enriquecido x 24hrs. Medio Skirrow 48 hrs. Microaerofilia A 42°C Clostridium difficile Terapia Antimicrobiana Agar cicloserina- Cefotaxina- Fructosa 72 hrs.a 35°C Anaerobiosis Clostridium perfringens Carnes Productos carneos Agar sangre Agar EYA 72 hrs. A 35°C Anaerobiosis y Detección enterotoxinas E.coli enteropatógena Agua alimentos Mac Conkey 24 hrs a 35°C Aerobiosis y serología E.coli enteroinvasiva alimentosMacConkey 24 hrs a 35°C Aerobiosis y serología

E. coli Verotoxigenica Carnes leche MacConkey+ sorbitol 24 hrs a 35°C Aerobiosis y serología Plesiomonas shigelloides Agua mariscos Agar sangre 48 hrs. A 35°C Atm 5% CO2 Salmonella spp. No tiphy Huevos, carnes Leche,pescados Caldo Selenito F 16 a 20 hrs. Agar XLD A. sulfito-bismuto 24 hrs a 35°C Aerobiosis y serología Shigella spp S. dysenteriae Otras Shigella Agua Mariscos alimentos Caldo GN 16 hrs. A 35°C Medio S.S. Medio EMB Mac Conkey 24 hrs. A 35°C Aerobiosis y serología Staphylococcus aureus Lacteos, carnes,salsas,cramas Agar Manitol salado 24 hrs.a 35°C aerobiosis Vibrio cholerae Agua Mariscos vegetales Agua peptonada alcalina 16 a 20 hrs. Agar TCBS 24 a 48hrs. Aerobiosis y serología Vibrio parahaemolyticus Mariscos pescados Agua peptonada Alcalina 16 a 20 hrs Agar TCBS hrs.a 35°C Aerobiosis y serología Yersinia enterocolíticaAgua Carnes,alimentos PBS 4-5°C por 72 hrs. Agar CIN24-48hrs a 35°C aerobiosis

Las pruebas bioquímicas primarias son usadas para determinar el género de la mayoría de las bacterias. Tinción de Gram. Prueba de catalasa. Prueba de oxidasa. Motilidad. Nota: Para identificar el género de las Enterobacterias se usan otras pruebas bioquímicas llamadas IMVIC que se compone de cuatro pruebas: Indol, Rojo de Metilo, Voges-Proskauer y Citrato.

Escherichia coli

Enterobacter cloacae

Proteus vulgaris

Salmonella typhimurium

Aeromonas hydrophila

Bacillus spp

Enterococcus faecalis

Staphylococcus aureus

Sacharomyces cerevisiae

D en C Fernando Antonio Velarde Rivera GRACIAS POR SU ATENCION