En la nutrición de especies de interészootécnico UNIVERSIDAD CENTRAL DE VENEZUELA Facultad de Agronomía Departamento de Producción Animal Campus Maracay MINERALES En la nutrición de especies de interészootécnico Dr. Álvaro Ojeda

Definición … Clasificación … Un mineral es una sustancia natural que se diferencia del resto por su origen inorgánico, homogeneidad, composición química preestablecida y que corrientemente ostenta una estructura de cristal. Clasificación … Macrominerales Son minerales cuya necesidad por parte de los animales se expresa en “grandes” cantidades. Se ubican en este grupo calcio, fósforo, sodio, cloro, potasio, magnesio y azufre. En general son importantes componentes estructurales de tejidos (ej. óseo), y fluidos corporales. Participan además en balance ácido-base, presión osmótica, potencial eléctrico de membrana y transmisión del impulso nervioso Microminerales o Trazas Son minerales cuya necesidad por parte de los animales se expresa en “pequeñas” cantidades (miligramos ó microgramos). Este grupo incluye cobalto, cobre, iodo, hierro, manganeso, molibdeno, selenio, zinc, cromo y flúor. En general se presentan en el cuerpo animal como componentes de metaloenzimas y cofactores enzimáticos, o componentes de hormonas.

Elementos Esenciales… Funciones… Vitamina 22 elementos (1981) Macrominerales Ca Calcio P Fósforo Na Sodio Cl Cloro K Potasio Mg Magnesio S Azufre Microminerales Fe Hierro I Iodo Zn Zinc Si Silicio Cu Cobre Mn Manganeso Co Cobalto Md Molibdeno Se Selenio Cr Cromo Sn Estaño V Vanadio F Flúor Ni Níquel As Arsénico Estructural Son componentes estructurales de órganos y tejidos. Se tiene Ca, P y Mg; Si en huesos y dientes; P y S en proteína muscular Fisiológica Presentes en fluido corporales y tejidos como electrolitos relacionados con mantenimiento de presión osmótica, balance ácido-base, permeabilidad de membrana y transmisión de impulso nervioso (ej. Na, K, Cl, Ca y Mg en sangre, fluido cerebroespinal y jugo gástrico) Catalítica Catalizadores en sistemas enzimáticos y endocrinos. Como componente estructural de metaloenzimas y hormonas, o activadores (coenzimas) de dichos sistemas. Las actividades pueden ser anabólicas, catabólicas, incremento de vida útil (oxidante) o protección celular (antioxidante). Regulatoria Regulación de la diferenciación y replicación celular. Ion calcio influye en las señales de transducción y selenocisteina en la transcripción de genes. El papel central de la Tiroxina en el metabolismo se atribuye a la Triodotiroxina en la transcripción de genes. Suttle(2010)

Metabolismo … Otros tejidos blandos Mineral secretado Hueso TASA DE RECAMBIO Alta ….. Mucosa intestinal tejido hepático Media .. Tejidos blandos Baja ….. Tejido óseo Otros tejidos blandos Mineral excretado (orina) R e s o r c i ó n Hueso Plasma sanguíneo Mineral secretado Leche Sudor Jugos digestivos Reabsorción Tracto digestivo Mineral ingerido Mineral excretado (heces) Algunos requieren proteínas transportadoras (ej. Transferrina para Fe y Mn) Modificado de Suttle (2010)

Macrominerales… Ca P Mg Mineral Fuente Metabolismo Función Deficiencia / Exceso Ca Leche y sus derivados, forrajes (absorbible 30-40%), Cereales (bajos) Absorbido en ID mediado por hormona paratiroides y vitamina D3 (abre canales de absorción) 90% presente en tejido óseo Ión Ca esencial para impulso nervioso Estabiliza y modula enzimas de coagulación sanguínea Formación de cáscara de huevos Se altera metabolismo óseo con resorción (osteoporosis y osteomalacia) Retardo en crecimiento Incremento de P plasmático Hipocalcemia (“fiebre de leche”) Excesos provocan deficiencias de minerales traza P Leche y sus subproductos, cereales (altos pero en forma de fitatos), bajo en gramíneas tropicales y leguminosas arbustivas En intestino delgado por transportadores Na dependientes 80% en tejido óseo, con funciones similares a Ca 20% en fluidos y tejidos blandos Componente de ácidos ribonucleicos Utilización de la energía (AMP, ADP y ATP) Requerido por microflora ruminal Inapetencia Pobre crecimiento Reducción en lactancia Insatisfactoria respuesta reproductiva Mg Leche y sus derivados (bajo), forrajes (muy variable), Cereales (bajos), aceites vegetales (alto) y pescado (medio) Absorbido de forma combinada por procesos activos (transportador) y pasivos en rumen e ID Abundante en tejido óseo (60-70% ) y en blandos (0,1-0,2 g Mg/kg) luego de K Catalizador enzimático Formación de ATP en fosforilación oxidativa Actúa en contracción muscular en unión al Ca Requeido por microflora ruminal Hipomagnesemia y tetania Hipeirritabilidad Tembores musculares Perdida de equilibrio Pérdida de apetito Suttle(2010)

Macrominerales … K Na Cl S Mineral Fuente Metabolismo Función Deficiencia / Exceso K Forrajes (muy variable), bajo en fuentes de CHO´s y elevado en fuentes proteicas, amonificación reduce su concentración, elevado en melaza Absorbido en ID mediado por bomba de ATPasa y co- transportadores. Excesos inducen deficiencias de Mg y Ca Mayor ión intracelular Respuesta a estímulos eléctricos y tono muscular Equilibrio ácido-base Anorexia Depilación Ataxia Alteraciones de ritmo cardiaco Deficiencia escasa Na Cl Leche y sus derivados (bajo), forrajes (muy variable), Cereales (bajos), aceites vegetales (alto) y pescado (medio) Absorción pasiva en intestino delgado y rumen Mantenimiento de presión osmótica Equilibrio ácido-base y metabolismo del agua Transporte de AA´s y glucosa son dependientes de Na Pica Excesivo consumo de agua (polidipsia) Reducción del apetito Reducción en tasa de concepción Canibalismo en aves S Forrajes (muy variable), Cereales (bajos) y pajas (alto), Absorbido por transporte activo en intestino delgado . Cuando en proteínas, debe ser primero liberados los AA´s Forma parte de hormonas (ej. Insulina y oxitocina) y de AA´s azufrados (ej. Metionina) Presente en tejido conectivo (condroitin sulfato) Constituyente de heparina Abundante en apendices con queratina (cascos, cuernos, uñas, cabello, lana, etc) Requerido por microflora Inapetencia Pobre crecimiento Reducción en lactancia Insatisfactoria reproducción Suttle (2010)

Microminerales … Co Cu I Fe Mineral Fuente Metabolismo Función Deficiencia / Exceso Co Forrajes (muy variables), Cereales (bajo), en leche y subproductos como B12. Importante fuente en microflora Absorbido como parte de la como vit B12. Absorción en mucosa mediada por transportadores Asociada a vit B12 Reducción de síntesis ruminal de succinato y por tanto de AGV´s Alteración en metabolismo de lípidos Baja síntesis de B12 Cu Mayores problemas asociados a su absorción que su presencia en alimentos Absorción mediada por transportadores metálicos. Antagonismo con Fe Activador de enzimas (ej. Citocromo oxidasa) Desarrollo óseo y reproducción animal Síntesis de hemoglobina Pobre movilización de Fe Desórdenes cardíacos Deficiente queratinización y síntesis de colágeno Anemia, ataxia, despigmentación I Forrajes (muy variable), Cereales y Grasas vegetales (bajo), pescado (alto) Absorbido muy eficientemente en el TGI y reciclado en el mismo vía sangre Constituyente de hormonas tiroideas, que regulan tasa metabólica Alteración del metabolismo, con retraso severo en crecimiento, bocio y hemorragias en tiroides Fe Elevado en alimentos tradicionales Absorbido en duodeno con intervención de un transportador Constituyente de la hemoglobina Pobre crecimiento Anemia Daños en pelos y plumas Suttle (2010)

Microminerales … Mn Se Zn Mineral Fuente Metabolismo Función Deficiencia / Exceso Mn Granos y semillas (muy variable), proteínas vegetales (alto) y animales (bajo) Altamente controlada por presencia de Fe en la dieta Parte de metaloenzimas (ej Piruvato carboxilasa, superoxidodismutasa y glicosiltransferasa Pobre crecimiento Daños en articulaciones Ciclo estral irregular Crecimiento óseo anormal Se Ampliamente variable en alimentos En forma inorgánica (selenito Na) se absorbe de modo pasivo, en forma orgánica (selenometionina) en forma intacta con AA Parte de selenoproteínas Antioxidante (glutationperoxidasa) Mejora respuesta reproductiva Baja producción de lana Muerte perinatal y postnatal Retardo en crecimiento Zn Absorción pasiva Parte de metaloenzimas (ej ADN y ARN sintetasas) Componentes de unos 250 factores de transcripción Baja tasa de crecimiento Parequeratosis (hiperqueratinización de la piel) Daño testicular Anorexia Suttle(2010)

Fuentes de minerales… Una buena mezcla mineral... Criterios de selección Fuente Ca (%) P (%) Na (%) K (%) Cl (%) Mg (%) F (%) S Fe (ppm) Cu (ppm) Carbonato de Ca 38,3 0,02 0,07 1,40 620 12 Concha de ostras 37,0 0,01 0,20 0,03 0,25 0,08 300 8 Fosfato monocálcico 17,5 21,9 0,10 0,15 0,80 0,16 0,90 4000 Harina de huesos 24,8 12,4 0,46 ND 0,64 0,35 840 16 Óxido de magnesio 3 55 11 Roca fosfórica defluorin. 32,0 18,0 3,80 0,09 0,29 0,13 9200 22 Cloruro de magnesio 35 Sulfato de magnesio 10 13 Una buena mezcla mineral... Una relación Ca/P de 2:1, con un mínimo de 6 a 8% P. Proveer al menos 50% de los minerales trazas (Co, Cu, I, Mn y Zn). Alta biodisponiblidad y libre de elementos tóxicos (ej. Fosfatos altos en fluor, relación no mayor de 20:1). Elevada palatabilidad. Inicialmente garantizar un consumo de 50 g/animal/d Control de calidad en su elaboración. La pureza y costo por unidad del elemento necesitado La forma química, la cual determina la estabilidad y disponibilidad del elemento necesitado Tamaño de partícula, el cual puede afectar la facilidad y seguridad en la mezcla y disponibilidad al animal Libre de impurezas, tales como cadmio y flúor Compatibilidad con otros ingredientes, incluyendo vitaminas Riesgo de toxicidad, lo cual puede comprometer la disponibilidad y afectar al ser humano y al animal. FEDNA (2011)

Máximo límite legal (ppm) Concentraciones tóxicas Toxicidad de Microminerales en rumiantes… Mineral Máximo límite legal (ppm) Concentraciones tóxicas Fe 750 500-1000 ppm I 10 8-50 ppm Co 2 30 ppm Cu Ovinos: 15 Bovinos: 35 Prerumiantes: 15 Otras especies: 25 Bovinos: 40-100 ppm Terneros: 30 ppm Ovino: 8 ppm Corderos : 38-40 mg/d durante 16-20 semanas Mn 150 Bovinos: 500-1000 ppm Zn Bovinos: 300-1000 ppm Terneros: 250 ppm Mo 2,5 Bovinos: 3-10 ppm Se 0,4 Bovinos Crónica: 3-40 ppm Aguda: 20 mg/kg peso vivo Bach y Devant (2004)

En la nutrición de especies de interészootécnico UNIVERSIDAD CENTRAL DE VENEZUELA Facultad de Agronomía Departamento de Producción Animal Campus Maracay VITAMINAS En la nutrición de especies de interészootécnico Dr. Álvaro Ojeda

Definición … Su clasificación … Con un nombre derivado del latín (vital y amine / 1912), este término agrupa a 14 compuestos orgánicos presentes en pequeñas cantidades en los alimentos, de carácter indispensable (micro a miligramos/d) para el normal funcionamiento metabólico de los organismos animales, y su deficiencia genera síntomas carenciales. Son compuestos no relacionados con proteínas, carbohidratos o lípidos, y su clasificación no es de orden químico sino funcional. Su naturaleza orgánica las diferencia de los elementos trazas presentes en la dieta. Russell (2000) Su clasificación … Liposolubles Asociadas a la fracción de lípidos dietarios y se absorben con éstos, en procesos regulados por adecuada producción de sales biliares y formación de micelas. Básicamente constituidas por carbono, hidrógeno y oxígeno; tenemos: A, D, E y K, de las cuales sólo las tres primeras son almacenadas en el cuerpo animal, excretando excesos vía bilis y heces. Hidrosolubles No se asocian a la fracción de lípidos, con absorción independiente a éstos. Además carbono, hidrógeno y oxígeno, pueden contener nitrógeno, azufre y cobalto. En este grupo se ubican: Complejo B y C (ácido ascórbico). Excepto B12, no se almacenan en el cuerpo animal, excretando excesos vía orina. Siempre deben estar presentes en la dieta ? … Algunas pueden ser sintetizadas en TGI (ej. Ácido ascórbico, excepto en juveniles y situación de stress) Niacina puede sintetizarse a partir de triptofano Vitamina D se sintetiza en la piel a partir de sus precursores, mediante la acción de rayos ultravioleta.

Sinonimia … Vitamina Sinónimo Liposolubles A1 Retinol, retinal y ácido retinoíco A2 Dehidroretinol D2 Ergocalciferol D3 Colecalciferol E Tocoferol y tocotrienoles K1 Filoquinona K2 Menaquinona K3 Menadiona Hidrosolubles Tiamina Viamina B1 Riboflavina Viamina B2 Niacina Vitamina B3, Vitamina pp Viamina B6 Piridoxol, piridoxal y piridoxamina Ácido Pantoténico Viamina B5 Biotina Vitamina H Folacina Ácido Fólico, Folato y Vitamina M Viamina B12 Cobalamina Colina Gosipina Vitamina C Ácido Ascórbico Russell (2000)

Metabolismo … Hidrosolubles Liposolubles Absorción fundamentalmente en yeyuno, y prácticamente inexistente en estómago e intestino grueso De síntesis cecal, sólo útil en ceco o coprofagia Tanto transporte activo (Na+) como pasivo Absorción vía porta, y en algunos casos unidas a proteínas transportadoras ó albúmina Excretadas vía orina, y en menor grado sudor. Liposolubles Intestino delgado medio Facilitan sales biliares y lipasa pancreática, movilizan con micelas Cuando esteres, hidrólisis en pared inst. Transporte vía sistema linfático, vehiculizadas con Lipoproteínas Principales depósitos: tejido adiposo, hígado y músculo Excedentes excretados en sales biliares y heces. Modificado de Russell (2000)

Metabolismo ruminal … Síntesis de vitaminas, fundamentalmente grupo B y K (excepto en juveniles) Vitaminas A, D y E no son sintetizadas por microorganismos ruminales Variable degradabilidad de vitaminas dietarias Suplementación con S tiende a reducir síntesis de Tiamina (B1) y Ácido Pantoténico, aunque estimula síntesis de Riboflavina (B2) Absorción ruminal es factible, aunque de poca importancia en vitaminas de síntesis microbial.

Vitaminas Liposolubles… Forma Fuente Función Deficiencia A Retinol (animal) Hígado, aceite y harina de pescado. Formación, protección y regeneración de piel Mejora de ovulación e implantación Incremento respuesta inmune. Daño en mucosas y membranas Retardo en maduración de óvulo Inmunosupresión parcial. β-Caroteno (vegetal) Pastos frescos, silaje y alfalfa) y zanahorias. Muy bajo en cereales Provitamina A Estimula síntesis de Progesterona Efecto antioxidante y mejora de inmunidad (aumento de leucocitos). Problemas de fertilidad Perdida embrionaria Aumento de células somáticas en mastitis Susceptibilidad a infecciones. D3 Colecalciferol Leche y aceite de hígado En metabolismo de Ca y P: regula absorción, excreción, almacenamiento, y movilización. Incrementa respuesta inmune Controla transcripción de mas de 50 genes. Alteración de metabolismo de Ca y P Inhibe mineralización del tejido óseo Se promueve movilización de Ca y P Deformaciones óseas Pobre calidad de cáscara de huevos. D2 Ergocalciferol Vegetales verdes secados al sol E Tocoferol Tocotrienol Pastos, alfalfa, trébol y aceites no procesados. De baja actividad en cereales Reduce peroxidación de AGI Reduce necrosis hepática Efecto antioxidante Controla metababolismo de hormonas hipofisarias Estimula síntesis de anticuerpos. Daños músculo cardíaco y esquelético Alteración en fertilidad Daño vascular y nervioso Lesiones hepáticas y desórdenes locomotores. K Filoquinona (K1) Menaquinona (K2) Menadiona (K3) Plantas verdes (K1) Cereales, carnes y Hna. de pescado (K2) Agroindustria (K3) Síntesis de factores de coagulación Producción de osteocalcina Participa en carboxilación de proteínas. Hemorragia en varios tejidos Alteración en coagulación sanguínea Desórdenes de crecimiento.

Vitaminas Hidrosolubles… Coenzima Fuente Función Deficiencia Tiamina (B1) Tiamina pirofosfatasa Cereales, harinas de oleaginosas, productos láctos y levadura Metabolismo de CHO´s Tejido neural y cardiáco Movimientos peristálticos Alteraciones nerviosas (ej. Polineuritis, necrosis cerebrocortical) Altera funcionamiento cardiaco Reducción de consumo Riboflavina (B2) FAD FMN Productos lácteos y levadura de cervecería. Poca en cereales . Siempre baja disponib. (60%) Flavoproteína Componente de coenzimas en transferencia de hidrógeno y oxidacción y reducción de AG´s Alteración inflamatoria en piel (artrosis, hiperqueratosis e hiperplasis) Alteración neurológica Caída del tren posterior (pollos) Vitamina B6 Fosfato de Piridoxal Cereales y subproductos de molienda, harinas de oleaginosas y levadura. Pobre en hnas de animales Transaminación, decarboxilación y ramificación de AA´s Fosforilación en metb. de CHO´s Retardo en crecimiento Inflamación en piel, deterioro en hígado y corazón Alteraciones nerviosas Reducción en postura Vitamina B12 Cianocobalamina Sólo en productos de animales (hna pescado y suero de leche). Amplia síntesis microbial Síntesis de células sanguíneas Metabolismo de ac propiónico Metabolismo de metionina Reducción de síntesis de ADN Pobre emplume, reducción de postura y mortalidad embrionaria Perdida de peso en rumiantes Biotina (H) Piruvato acetil CoA carboxilasa En plantas y animales Abundante en levadura y hnas de oleaginosas Síntesis de AG´s Glucogénesis Síntesis de ADN y ARN Alteración en crecimiento y fertilidad Daños en la piel Pobre emplume, lesiones inflamatorias e hígado graso Depilación, y daños en cuernos y pezuñas

Vitaminas Hidrosolubles… Coenzima Fuente Función Deficiencia Ácido Fólico Ácido tetrahidrofólico En vegetales y animales Abundante en alfalfa y levadura Poco en cereales y poco disponible (60-20%) Transferencia de grupos metilos en crecimiento y división celular Conversión de homocisteína en metionina Anemia macrocítica Daño en mucosas y piel En aves, desorden en crecimiento, despigmentación de plumaje, mortalidad embrionaria y baja postura Alopecia y baja fertilidad en rumiantes Niacina (B3) NAD NADP En alimentos vegetales Poco en maíz, arroz y productos lácteos Transferencia de hidrógenos Metabolismo energético Alteración del sist nerviosos y desódenes en piel (pelagra) Retardo en crecimiento Inflamación y úlceras en mucosas Ácido Pantoténico (B5) Coenzima A Poco en granos leguminosas y harina de carne Metabolismo de proteínas, CHO´s y grasas Síntesis de acetil CoA Pigmentación de pelos Alteración en piel y mucosas Despigmentación Alopecia y caída de plumas En aves : pobre apetito, baja incubabilidad y diarrea En cerdos: secreciones alrededor de ojos y alteraciones nerviosas Ácido Ascórbico (C) En pocos alimentos y muy inestable. Remoción de radicales libres Síntesis de colágeno Regulación de metabolismo de Ca Modulación de sistema inmune Síntesis de cortisol y reducción de stress Resorción de hierro Susceptibilidad a infecciones parasitarias Daño en tejido óseo Mayos susceptibilidad a stress Reducción de fertilidad Colina Biodisponibilidad elevada en hna de soya (60-70%) y baja en cereales (25%) Síntesis de fosfolípidos y lipoproteínas Transporte y metabolismo de lípidos Alteración en metabolismo de lípidos e hígado graso Daño en articulaciones Retardo en crecimiento y elevada mortalidad (aves) Vitaminas Hidrosolubles…

Principio activo y forma química… Vitamina Factor de conversión Unidades A (retinol) 0,3 μg alcohol (retinol) 1 UI 0,34 μg acetato D3 0,03 μg vit D3 E 1 mg d-α-acetato de tocoferil 1 mg d-α-tocoferol 1,49 UI 1 mg dl-β-tocoferol 0,33 UI K3 (Menadiona) 1 mg menadiona bisulfito de sodio 0,51 mg K3 B1 (Tiamina) 1 mg mononitrato de tiamina 0,92 mg tiamina Niacina 1 mg ácido nicotínico 1 mg niacina 1 mg nicotinamida Colina 1 mg cloruro de colina 0,75 mg colina Para el caso de la vitamina A, una UNIDAD INTERNACIONAL (UI) definida como la actividad biológica de 0,3 μg de RETINOL (alcohol) ó 0,55 μg de PALMITATO DE RETINIL. Una UI de Provitamina A es igual en actividad a 0,6 UI de β−CAROTENO del compuesto de referencia. Albers et al. (2002)

Otros compuestos asociados… Ácido p-Amino benzoico Constituyente de la molécula de ácido Fólico, generado en plantas verdes y microorganismos, para quien es promotor de crecimiento. En pollos con bajo ác. Fólico, el PABA da respuesta favorable. Betaina Actúa como donador de grupos metilo en metabolismo, y junto a colina y metionina es un factor lipolítico. Bajo específicas condiciones participa en control osmótico Inositol Previene hígado graso por su efecto lipolítico. Es empleado en la síntesis de fosfolípidos y lipoproteínas. Se emplea para reducir síndrome de hígado graso. AG´s esenciales Incluidos los omega 3 y 6, además de y-linoleico y araquidónico donde mamíferos son incapaces de síntesis. Ampliamente relacionados con Vit E. Carnitina El tejido muscular almacena el 85% de la L-Carnitina, y se relaciona con transporte activo de AG´s y metabolismo energético en mitocondria. Taurina De origen animal, y en contraste con animales de granja, los gatos presentan síntesis restringida a partir de cisteína. Se asocia a ácido cólico, y en gatos, su deficiencia restringe severamente la visión. Compuestos orgánicos que, aunque relacionados a las vitaminas en su actividad biológica, no se definen como tales porque pueden ser sintetizados en cantidades suficientes, y por tanto no se requieren en la dieta

Factores que afectan suplencia de minerales y vitaminas … Animal Especie, edad, estado fisiológico, nivel de producción, estado sanitario y stress, entre otros. Ambiente Alojamiento, higiene, temperatura y humedad, entre otros. Calidad de productos Necesidad de evitar la oxidación (carne, leche, huevos) y mejor procesamiento (lana, cuero). Alimento Variaciones naturales en materias primas (fenología, cosecha, deshidratado y almacenamiento), biodisponibilidad, antagonistas, condiciones de almacenamiento, composición del alimento y relación costo/beneficio, entre otros.

Lectura recomendada … Bondi, A. 1988. Nutrición Animal. 1ra Edic. Editorial Acribia S.A. Zaragoza, España. 546 p. Church, D. et al. 2002. Nutrición y Alimentación de Animales. 2da Edición. Editorial Limusa, S.A. México. 635 p. McDowell, LR. 2000. Vitamins in Animal and Human Nutrition. 2da Edic. Iowa State University Press. EUA. 793 p. Ruíz, R. et al. 1988. Bioquímica Nutricional (Tomos I y II). Instituto de Ciencia Animal. La Habana. Cuba. Suttle, N. 2010. Mineral Nutrition of Livestock. CAB International. Londres, UK. 579 p.

Vitamina D y metabolismo de Ca… Apertura de canales en mucosa intestinal para incrementar absorción de Ca2+ unido a calbidina González y Pinilla (2010)

Activación de prohormona D… 7 -Deshidroxicolesterol Piel + UV (fotoisomerización cutánea) Colesterol Provitamina D3 Dieta Absorción intestinal Temperatura cutánea Hígado 25 - Hidroxivitamina D3 Circulación Colecalciferol (Vitamina D3) Proteína Transportadora de Vit D Riñones 24R,25 - Dihidroxivitamina D3 1,25 - Dihidroxivitamina D3 Modificado de Russell (2000)