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Métodos y técnicas de estudio de la función reproductiva Dr. Hector Godoy Morales Profesor Titular Dr. Alfredo Ulloa Aguirre Profesor Adjunto Presenta:

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Presentación del tema: "Métodos y técnicas de estudio de la función reproductiva Dr. Hector Godoy Morales Profesor Titular Dr. Alfredo Ulloa Aguirre Profesor Adjunto Presenta:"— Transcripción de la presentación:

1 Métodos y técnicas de estudio de la función reproductiva Dr. Hector Godoy Morales Profesor Titular Dr. Alfredo Ulloa Aguirre Profesor Adjunto Presenta: Dr. Horacio Alvarado Delgado R1BR

2 Principios de Evaluación Hormonal Métodos Inmunológicos –Anticuerpos Medición de cantidades muy pequeñas de hormonas –Reacción antígeno – anticuerpo INMUNOENSAYOS ENSAYOS INMUNOMETRICOS

3 INMUNOENSAYOS

4 Ensayos Inmunometricos

5 Ensayos inmunometricos Inmunolite

6 Evaluación Hormonal Sensibilidad –Capacidad de medir exactamente el valor menor posible Especificidad –Capacidad de medir exactamente unicamente la hormona en cuestión sin reacción con otras hormonas o substancias

7 Evaluación Hormonal Problemas con especificidad –Hormonas proteicas Isoformas –Hormonas esteroides Moléculas de tamaños muy pequeños –Cantidades de hormona pequeña Mujeres = testosterona

8 Validación y control de calidad de Inmunoensayos Validación del ensayo –Antes de usar debe ser validado Exactitud Precisión Sensibilidad Especificidad

9 Exactitud del ensayo Métodos para establecer la exactitud –Encontrar el paralelismo entre la curva estándar del ensayo y sus diluciones seriadas de muchas muestras que contienen altas concentraciones de lo que se va a analizar. –La recuperación de patrón añadido, en los diferentes niveles, a partir de muestras de pacientes Define el grado en que una medición dada está deacuerdo con el valor real

10 Precisión Se determina –Coeficiente de variación Precision intraensayo Precisión interensayo Es la variabilidad que existe cuando múltiples mediciones de un compuesto son realizadas en la misma muestra.

11 Precisión Coeficiente de variación (%) Precisión Intraensayo –Se evalúa midiendo el análisis en muestras repetidas del mismo ensayo. Precisión Interensayo –Análisis en muestras repetidas, cada una incluida en diferentes ensayos CV = SD media de determinaciones repetidas de una prueba X 100

12 Especificidad Medición –Reacción cruzada del anticuerpo se compara con la curva de dosis respuesta estándar obtenida de los compuestos que están presentes en la misma muestra de la substancia analizada y que pueda unirse a los anticuerpos Grado de interferencia de una reacción cruzada que se encuentra a partir de otras substancias del análisis

13 Especificidad Medición –Comparar los valores analizados de un grupo de muestras medidas por un método especifico de inmunoensayo, el cual es obtenido por un método clásico. Grado de interferencia de una reacción cruzada que se encuentra a partir de otras substancias del análisis

14 Sensibilidad Depende de la precisión de la curva estándar, la cual se mide analizando 10 replicas de cada concentración estándar y de la estándar zero. Esto permite el cálculo de la cantidad media de marcador de anticuerpo límite, lo que corresponde a cada concentración estándar Se define como la cantidad mas pequeña de substancia que se requiere para ser distinguida de cero

15 Control de calidad de un ensayo Parámetros de control de confiabilidad de un inmunoensayo –Control de calidad externo –Control de calidad interno Curva estándar –Cuenta total –Fijación no específica –Fijación cero estándar –Pendiente –Intecepción de y –the doses of the standard at which the percentage of label- bound substance is equal to 20, 50 y 80% Lo que se mide en las muestras

16 Sistemas de enzayos comerciales Inmunoensayo de fluoresencia de disosciación mayor de lanátidos Sistema inmunolite Sistema IMx

17 Inmunoensayo de fluorecencia de disociación mayor de lanátidos Fluorocromos –Emiten luz visible durante la exitación con radiación Isotiocinato Europium –Elemento de la serie de lanátidos, que es quelado a un compuesto substituible. –Para mejorar la florescencia, el europium quelado se disocia a un complejo que baja de pH y forma un nuevo quelato, que se fija a la solución para prevenir el enfriamiento

18 Inmunoensayo de fluorecencia de disociación mayor de lanátidos Fase solida –Dos ensayos fluoroinmunométricos –Técnica de sandwich –Usa dos anticuerpos monoclonales

19 Inmunoensayo de fluorescencia de disociación mayor de lanátidos Flurecsencia depende de la cantidad de concentración en una muestra

20 Sistema Inmunolite Usa tecnología quimiolumiscente amplificada por enzimas. Hidrólisis de un substrato quimiolumiscente estable –Fosfato adamantil dioxetano Enzima –Alcalin fosfato

21 Sistema Inmunolite Fosfato de Adamantil dioxetano Anión adamantil dióxetano Alcalin fosfato Emisión de luz

22 Sistema IMx Analizador de inmunoensayo automatizado, que incorpora –Inmunoensayo de micropartículas (MEIA) Para moléculas de gran peso Hormonas proteicas Fluorometría –Inmunoensayo de polarización fluorescente (FPIA) Para moléculas de bajo peso Para hormonas esteroideas Polarización óptica fluorescente

23 Sistema IMx

24 RIA combinado con bioensayos El primer RIA – bioensayo –Dafu et.al. Midieron concentración de testosterona en células de Leyding dispersas bajo la influencia de LH o hCG. –Ventajas Actividad biológica de las hormonas cambia. –Método de elección Ausencia de hormona por actividad biológica

25 Médición de gonadotropinas FSH Y LH = IU Preparaciones –LER 907 –2nd IRPHMG RIA –Baja sensibilidad y especificidad PULSATIBILIDAD

26 Medición de gonadotropinas Si se esperan bajos niveles –IRMA –IFMA –ICMA LH –reacción cruzada con hCG –Pulsatibilidad (60 – 90 minutos) –Presición: toma muestra cada 15 – 20 minutos

27 Medición de gonadotropinas FSH Incrementada Levodopa Ketoconazol Disminuida Estrogenos Fenotiazidas LH Incrementada Ketoconazol Disminuida Esteroides Fenotiazinas Digoxina Propanolol β-hCG 5 – 20ug Embarazo Tumor productor de bhcg Secreción hipofisiaria normal Interferencia

28 Niveles Sanguíneos de FSH y LH en la mujer LH – FSH fase folicular –RIA 4 – 15 mIU/ml –ICMA: NO: falla hipotalámica o hipofisiaria o pubertad Se usan ensayos de tercera generación. Variaciones en laboratorios LH: 8.2 ± 2.1 mIU/ml (4 – 12.4 mIU/mL) FSH: 8 ± 1.8 mIU/ml (4.4 – 11.6 mIU/mL) Razón FSH/LH: 1:1

29 Niveles sanguíneos de LH y FSH en la mujer Medio ciclo –LH: incrementa cuatro a seis veces –FSH: dos a tres veces Fase lútea –LH y FSH: mismo valor que fase folicular

30 Pacientes pediátricos –Niveles menores –Tasa LH:FSH <1 (mas secreción FSH) –Uso de IRMA o ICMA de 3era generación Pediátricos Pubertad precoz (LH: > 0.6 mUI/ml) Hipogonadismo Hipogonadotripico Niveles sanguíneos de LH y FSH en la mujer

31 Perimenopausia –FSH LH Postmenopausia –FSH y LH Senectud –LH Niveles sanguíneos de LH y FSH en la mujer

32 Niveles sanguineos de LH y FSH en la mujer LH y relación FSH:LH LH y FSH

33 Pruebas dinámicas para la evaluación de gonadotropinas Prueba de hormona estimulante de gonadotropinas –GnRH sintética para estimular FSH y LH Diferenciar entre causas hipotalámicas o hipofisiarias de deficiencia de gonadotropinas

34 Prueba de GnRH 100 ug IM diario de GnRH por una semana 2 muestras basales separadas por 15 minutos 25 o 100 ug IV GnRH Muestras 20,30, 60, 90 y 120 min Baja respuesta = Problema Hipotalámico Usada para probar la maduración del eje H-H-O

35 Prueba de GnRH 100 ug GnRH, pico de LH -Niñas: > 15 mIU/ml -Niños: > 25 mIU/ml 100 ug GnRH, pico de LH > 8 mIU/ml 100 ug GnRH, pico de LH -Niñas: > 6.9 mIU/ml -Niños: > 9.6 mIU/ml

36 Prueba de GnRH Único método valido Pulsatibilidad espontanea de GnRH –Fines de investigación

37 Prueba con citrato de clomifeno 100 mg clomifeno días FSH día 10 FSH y estradiol día 3 Para medir reserva ovárica

38 Medición de Prolactina Medida por RIA o IRMA –Hombre: 15 – 20 ng/mL –Mujer: 20 – 25 ng/mL –Influenciada por Estrógenos Medicamentos –Fenotiazinas –Metoclopramida Estrés Comida Estimulación mamaria Punción de vena

39 Medición de Prolactina Cambios diurnos Incremento después de las comidas –Muestra: al media mañana Hiperprolactinemia –10% sin diagnóstico –Enfermedades autoinmunes –Precipitación con polietilen-glicol (elevación por PRL monomérica + PRL autoanticuerpo)

40 Medición de Prolactina Situación ClinicaValor Prolactina Embarazo 6 semanasInicia Incremento A termino200 ng/mL MenopausiaDisminuye Adenoma Hipofisiario > 200 ng/mL Adenomas no secretores de PRL50 – 200 ng/mL Hipotiroidismo50 – 200 ng/mL

41 Pruebas dinámicas de evaluación de PRL Usadas antes de TAC o RM TRH –Estimula la secreción de TSH –Usada para medir secreción hipofisiaria de PRL Pacientes con prolactinoma, no presentan incremento en PRL después de la estimulación con TRH

42 Pruebas dinámicas de elevación de PRL Prueba con TSH: para definir entre –Formas funcionales de hiperprolactinemia –Adenoma Hiofisiario secretor de PRL TSH 200ug IV –Muestras: 30, 60 y 90 minutos –PRL = incremento 100% Metoclopramida 10 mg IV –Muestras: 30, 60, 90 y 120 minutos –PRL = 100 ng/mL, 60 y 120

43 Medición de estradiol y otros estrógenos RIA Bajos Niveles –Se extraen con solventes orgánicos y se separan por cromatografía. Estriol –RIA en suero –Métodos espectofotometricos –RIA en orina

44 Medición de estradiol y otros estrógenos Situación ClínicaValor Fase mediafolicular20 – 80 pg/mL Pico Ovulatorio200 – 500 pg/mL Fase lútea60 – 200 pg/mL Antes de pubertad < 20 pg/mL Después menopausia pg/mL Oferectomía < 10 pg/mL Hombres < 40 pg/mL Hombres estrona < 60 pg/mL En hombres: Evaluación estradiol: Hipogonadismo y ginecomastia Obesidad: Aumento de estrógenos

45 Medición de Progesterona Progesterona medida por una variedad de inmunoensayos Especificidad alta y depende de la reacción cruzada con la 17 α OHP

46 Niveles sanguíneos de progesterona y evaluación de la ovulación Fase folicular: < 1.5 ng/mL Incremento posterior a pico LH y tiene pico maximo 6 – 8 días después de ovulación. Postmenopausia: < 0.5 ng/mL Para evaluación ovulación –Fase media – lutea (21 – 22 ciclo) –> 7 ng/mL. En embarazo: 40 ng/mL A término: 150 ng/mL 6 – 8 semanas: < 10 ng/mL = Ectópico

47 Medición de andrógenos Andrógenos en la mujer –Ovarios –Glandula suprarrenal –Compartimiento periferico –Se miden varios andrógenos Testosterona sérica –Ovario,2/3 de conversión periférica androstenediona Sulfato de DHEA –Suprarrenal

48 Medición de Andrógenos Testosterona sérica –RIA o ICMA –Costoso –Baja especificiad –Sobreestimación de los valores Testosterona no fija = testosterona libre – Se calcula el pocentaje libre de SHBG 75% testosterona fiaja a SHBG –Fija a albúmina –LIbre

49 Medición de Andrógenos Testosterona libre –Se mide relación entre testosterona y SHBG (T (ng/ml) x 3.467) SHBG X 100

50 Medición de andrógenos Otros andrógenos útiles –11 hidroxyandrostenediona Porducción suprarrenal de androstenediona –Productos de 5 -reductasa –3 glucoronil - androstenediol Refleja el metabolismo periferico de T en hirsurtismo

51 Niveles sanguíneos de androgenos Situación clinicaValor de Testosterona Mujer edad reproductiva20 – 50 ng/mL Neoplasia ovarica > 200 ng/mL SOP < 100 ng/mL Situación clínicaValor de DHEAS Mujer edad reproductiva0.8 – 2.8 ug/mL Neoplasia suprarrenal > 8 ug/mL N suprarrenal productora de T3 – 4 ug/ml

52 Niveles sanguíneos de andrógenos Androstenediona sérica –1 – 2.5 ng/mL Testosterona libre –1 – 8.5 pg/mL SHBG –30 – 90 nmol/L

53 Medición de percursores de andrógenos circulantes en la mujer Medición de intermediarios del metablismo de los esteroides es útil para el diganóstico de deficiencias suprarrenales enzimáticas.

54 Medición de percursores de andrógenos circulantes en la mujer 17 -OHP –Deficiencia de 21 hidroxilasa forma neonatal: 50 – 200 ng/mL. –No clasica: 10 – 20 ng/mL. –Mujer Sana: < 1ng/mL –Hiperandrogenismo: Niveles elevados

55 Medición de percusores de andrógenos circulantes en la mujer Deficiencia de 11 Hidroxilasa –11 deoxycortisol Deficiencia de 3 – Hydroxyesteroide –Razón 17 OHP y 17 hydroxipregnenolona

56 Pruebas para establecer el tipo de androgenismo Evaluan secreción suprarrenal de andrógenos –Prueba con supresión con dexamentasona –Prueba con estmulación con ACTH Evalúan secreción ovárica de andrógenos –Prueba con agonista de la GnRH

57 Prueba de supresión con dexametasona Dexametasona 0.5 mg VO cada 6 hrs –Evaluación de T y T libre 3 días –Evaluación de DHEAS 7 días Solo en tumor suprarrenal o DHEAS > 8ug/mL Disminución en 60% de los valores basales de T y T libre HIPERANDROGENISMO SUPRARRENAL

58 Prueba de estimulación con ACTH Deficiencia de cortisol Deficiencias enzimaticas suprarrenales Distinguir entre hiperandrogenismo ovarico y suprarrenal –Baja especificidad

59 Prueba con agonistas de GnRH Causa regulación a la baja de la secreción de gonadotropinas hipofisiarias e inhiben la secreción de esterodies ováricos Uso para SOP Mejor Clínica y resultado de laboratorio basales.

60 Prueba con agonista de GnRH Nafarelin, Buserelin y leuprolide Leuprolide 500 o 1000 ug SC eb mañana 5 – 8 ciclo. Muestras 0, 8 y 24 hrs hidroxyprogesterona mayor de 2.6 ng/mL PCOS

61 Evaluación Hormonal del Hirsurtismo Exceso de crecimiento de cabello en la mujer, con distribución central –T, DHEAS y SHBG

62 Niveles de andrógenos en el varón Solo se miden testosterona total y testosterona libre Testosterona –300 – 1000 ng/dL –Biodisponible: 66 – 417 ng/dL Testosterona libre –50 – 210 pg/mL DHT –30 – 85 ng/dL –Útil para evaluar deficiencia de 5 a-reductasa

63 Medición de Inhibinas Inhibina A y B –RIA, ELISA –Secreción de varias poblaciones de células de la granulosa. –Valores sericos varian en el ciclo mesntrual –Inhibina A: baja en fase folicular y tiene pico en fase mediolutea –Inhibina B: contrario

64 Medición de Inhibinas En el embarazo –Inhibina A disminuye en segundo trimestre –Inhibina B pico en tercer trimestre. Menopausia –Ambas disminuyen marcadamente

65 Medición de Inhibinas Utilidades –Tumores de células de la granulosa –Monitoreo postoperatorio de tumores de células de la granulosa –Complicaciones del embarazo –Evaluación de folículos presentes en el ovario en fase folicular temprana. –Envejecimiento reproductivo

66 Medición de Inhibinas En hombres –Producida por células de Sertoli –Marcador de espermatogenesis –Diagnostico diferencial Criptorquídea Anorquía

67 Medición de AMH y valoración de la reserva ovárica Valoración de reserva ovárica –Envejecimiento ovárico Acelerado después de 35 años Mujeres jóvenes –Tratamiento de cáncer –Metodos de evaluación FSH y E2 día 3 Prueba citrato de clomifeno AFC Inhibina B AMH

68 Medición de AMH y valoración de la reserva ovárica AMH es dependiente del ciclo y no fluctua como FSH Valor debajo de 0.35 ng/ml pobre pronostico

69 Medición de hCG Placenta en grandes cantidades Hipófisis

70 Medición de hCG Util –Confirmar embarazo –Monitor de función trofoblástica –Complicaciones del embarazo Embarazo ectópico Aborto espontáneo –Screening de trisomias –Enfermedad trofoblástica –Monitorización de recurrencia de tumoración

71 Medición de resistencia a la Insulina Resistencia a la insulina –Probema importancia en salúd publica –Fisioptatología de SOP Métodos de medición –Glycemic clamps = Investigación –Modelo de Bergman FSIGT (tolerancia a la glucosa intravenosa son muestras frecuentes) es el test gold estándar –Prueba de tolerancia a la insulina –Tolerancia oral a la glucosa

72 Prueba de glucosa IV con muestras frecuentes Se colocan dos cateteres en vena antecubital –Glucosa e Insulina Glucosa 0.3 g/kg por un minuto IV 20 minutos despues Insulina 0.03 U/Kg) –Muestra de sangre 5, 10 y 15 minutos 1 minuto después de la toma de glucosa y después cada minuto por 10 minutos y después 12, 14, 16, 20, 22, 23, 24, 25, 27, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 120 y 180 (33)

73 Prueba de glucosa IV con muestras frecuentes Se modifico a solo 12 muestras –5 minutos antes de la toma de glucosa –Y luego 2,4,8,20,22,30, 40,50, 70, 100 y 180 minutos. –Insulina –Glucosa –Sesibilidad a la insulina Inversamente proporcional a resistencia a la insulina Se calcula usando el metodo modelo mínimo usando un algoritmo computarizado

74 Prueba de tolerancia a la Insulina Se usa para tener acceso a la resistencia a la insulina y tiene buena correlación con la FSIGT y clamp studies. –Noche anterior infusión IV de insulina regular (0.1 U/kg) por un minuto Glucosa 0,2,5,8,10 y 15 minutos después de infusión de insulina,

75 Prueba de tolerancia a la insulina Noche anterior infusión IV de insulina regular (0.1 U/kg) por un minuto –Glucosa 0,2,5,8,10 y 15 minutos después de infusión de insulina Hipoglicemia 15 minutos Dextrosa 50% en agua se inyecta para bolquear hipoglicemia. Afectada por –GH –Cortisol –Catecolaminas

76 Prueba de Tolerancia a la Insulina

77 Prueba de tolerancia oral a la glucosa Usada para evaluar la tolerancia a la glucosa –Área bajo la curva de glucosa / área bajo la curva de insulina –Área bajo la curva de glucosa x área bajo la curva de insulina –SI horas despues de OGTT (calcular 108/glucosa a las 2 horas x insulina a las 2 horas x 150 x kg) –Ecuación de Cederholm (calculacon que considera el total y la media de los niveles de glucosa e insulina

78 Cálculos de insulina y glucosa en ayuno Evaluación de resistencia a la insulina usando cálculos matemáticos –Tasa glucosa – insulina –Índice de resistencia a la insulina en ayuno = (glucosa x insulina)/25 –Evaluación del modelo de homeostasis de resistencia a la insulina (HOMA-IR) = (glucosa x insulina)/22.5 –Logartimo de HOMA –IR –Indíce de sensibilidad cuantitativo de insulina (QUIKI) = 1/(log glucosa + log insulina)

79 Medición de Hormonas adiposas Leptina –Proteína aminoácido –Factor de señalización de tejido adiposo a SNC –Indicador de energía –10 – 30 pg/mL –Aumento Obesidad PCOS –Bajo Niños

80 Medición de Hormonas adiposas Adiponectina –Proteína compuesta de 244 aminoacidos –Prevenir el desarrollo de resistencia a la insulina provocado por la dieta –Previene daño celular endotelial –RIA o ELISA –8 – 18 ug/mL –Disminuye en Obesidad –Uso Puede ser predictor de riesgo de aterosclerosis

81 Evaluación de la cantidad y distribución de grasa Indice de masa corporal –Peso/altura2 > 30 = obesidad > 40 = Obesidad severa 25 – 30 = sobrepeso 19 – 25 = Normal DEXA (cuantificación de grasa directamente por absometria por rayos x de cuerpo completo Medición de cintura –Mujer > 88 cm= Incremento riesgo CV

82 Evaluación de la cantidad y distribución de la grasa corporal

83 Síndrome Metabolico

84 Medición de GH y factores de crecimiento GH –RIA o IRMA –Nivel basal muy bajo y secreción pulsatil la medición puede ser subestimada. Medición de la GH en orina –Baja y a veces no detectable

85 Medición de GH y factores de crecimiento IGF-1 –Inmunoensayos específicos –Reflejan las concentraciones integradas de GH en 24 horas –Screening de deficiencia de GH –Niveles bajos Prepuberes Desnutrición Hipotiroidismo Falla renal DM –Útil en hipersecreción de GH ´Tratamiento de acromegalia

86 Medición de GH y factores de crecimeinto IGF-2 –IRMA Hipoglicemia por tumor de células de islotes pancreáticos.

87 Medición de GH y factores de crecimiento Hay 6 proteinas fijadoras de IGF –IGFBP 1, 2 y 3 con los que se evaluan para propositos clínicos –IGFBP – 3 para alteraciones en GH –IFGBP – 1 Influenciados por hiperinsulinemia –IGFBP – 2 se relaciona inversamente con la GH Junto con la relacion IGFBP 3/1 es un marcador de la acción de la GH Incrementa en tumores como gliomas y cacer de prostata

88 Pruebas dinámicas para la evaluación de la secreción de GH Se usan pruebas provocativas o de inhibición –Disminución en respuestas en al menos dos pruebas provocativas es diagnostico. –Punto de cohorte de un pico normal de GH en pruebas provocativas es : 10 ng/ml = ensayo policlonal 2.5 – 3.5 ng/ml = ensayo monoclonal

89 Prueba de tolerancia a la insulina Primera opción en diagnostico –Muestras de sangre a los 0,15,30, 60 y 90 minutos. –Medición de GH Mas de 10 ng/mL excluye diagnostico Menos de 3 ng/mL Deficiencia severa de GH –Glucosa Hipoglicemia ( < 40 mg/dL)

90 Prueba de GHRH y arginina Prueba alternativa Realizada en caso de contraindicación de hipoglucemia –GHRH 1ug/kg –Arginina 0.5 g/kg

91 Prueba de tolerancia oral a la glucosa Prueba primaria para hipersecreción de GH –Administración durante la noche de 75 a 100 gr de glucosa para causar supresión de GH sérica Muestras cada 30 minutos por 2 horas RIA policlonal Disminución de GH a 2ng/mL

92 Medición de hormonas que regulan el calcio y de marcadores de hueso Hormonas reguladoras de calcio –PTH –1,25 dihidroxivitamina D PTH –Metabolismo complejo –Multiples formas moleculares en circulación –Forma bioactiva circula en pequeñas cantidades.

93 Medición de hormonas que regulan el calcio y marcadores de hueso PTH –Inmunoensayos que detectan anticuerpos Reconocen la región media o carboxiterminal Hiperparatiroidismo primario –Los ensayos que detectan anticuerpos contra las moleculas intactas o el fragmento aminoterminal Falla renal Cambios fisiológicos asociados con la función de PTH

94 Medición de hormonas que regulan el calcio y marcadores de hueso PTH –Valor Normal: 10 – 65 pg/mL. –Se debe correlacionar con calcio

95 Medición de hormonas que regulan el calcio y marcadores de hueso Vitamina D –Menos 10 ug/L Deficiencia severa de vitamina D –10 – 20 ug/L Deficiencia parcial de vitamina D

96 Métodos para medición de densidad mineral ósea Esencial para diagnostico de osteopenia y osteoporosis –Evaluación por US de calcáneo –DEXA Columna lumbar, cadera, femúr y cuello T score –Numero de SD –Osteopenia: SD : -1, -2.5 –Osteoporosis SD: menor de -2.5

97 Medición y Niveles sanguíneos de hormonas tiroideas TSH –Ensayos inmunometricos Enzimas Componentes luminisentes I 125 Situación ClínicaValor Normal0.5 – 4 ug/mL Hipotirodismo subclinico < 2.5 ug/mL Hipertiroidismo subclinico > 4 ug/mL

98 Prueba de estimulación con TRH Evaluación de hipotiroidismo central Hipertiroidismo dependiente de TSH Tumores hipofisiarios –200 ug de TRH IV. TSH y 60 minutos

99 Evaluación de glucocorticoides y función adrenal Cortisol –Mineralocorticoide –Suprarrenal –Inmunoensayo Reacción cruzada con prednisona, prednisolona y cortisona –Variación circadiana Nivel más alto: mañana Nivel más bajo: tarde –50nm/L (1.8 ug/mL) excluye Cushing

100 Evaluación de glucocorticoides y función adrenal Cortisol urinario libre en 24 horas –50 – 60 ug/día (100 – 130 ug/día) –Cromatografía y RIA –Ensayo doble ciego competitivo –3 o 4 colecciones normales excluyen diagnóstico

101 Evaluación de glucocorticoides y función adrenal ACTH –Ayuda a interpretar los resultados del cortisol –IRMA – 100 pg/mL cortisol = Adisson –ACTH 20 pg/ml 9 AM = Cushing dependiente de ACTH –ACTH 10pg/mL Causa suprarrenal de Cushing

102 Prueba de supresión con dexametasona 1mg dexametasona a las 11PM Medición de cortisol en la mañana –Cortisol > < 5ug/dl =respuesta normal 0.5 mg dexametasona cada 6 horas por 2 días –Cortisol > 1.8 ug/dl = indicador de CUshing

103 Prueba de estimulación con CRH CRH –Estimula la secreción de ACTH –1ug/kg CRH IV ACT y cortisol 0,15,30 y 60 min ACTH: incrementa 100% Cortisol: 50% –Para diferenciar Cushing hipofisiario o ectopico.

104 Prueba de Dexametasona -CRH Para una mayor exactitud en el diagnóstico de hipercortisolismo. –Supresión con dexametasona (inicia en la tarde de día 1, con la ultima dosis a las 6 am del 3 er día) –CRH (1ug/kg IV) a las 8 am. Cortisol: mas de 1.4 ug/dl 15 min despues de administración de CRH sugiere síndrome de Cushing.

105 Estudios de Imagen en Sindrome de Cushing 40% microadenomas no se observan Realizar RMN con gadolineo Para tumor suprarrenal TAC –Tumor mayor de 6 cm es maligno Realizar TAC de tórax para identificar causa ectópica de secreción de ACTH

106 Procedimiento diagnóstico en sospecha de síndrome de Cushing

107 Pruebas para Insuficiencia Suprarrenal Pruebas de ACTH –Estimulación con 250 ug ACTH IV Medición cortisol 0, 30, 60 min Cortisol Menor de 13 ug/dL: Insuficiencia suprarrenal Cortisol ug/dL: Requiere evaluación adicional Cortisol arriba de 18ug/dL: excluye el diagnóstico

108 Pruebas para Insuficiencia suprarrenal Prueba de Tolerancia a la insulina –Ayuno nocturno –Insulina 0.1U/kg IV 1min –Glucosa y Cortisol 0,15,30,45,60,75 y 90 minutos –Excluye el diagnóstico Hipoglucemia (gluc menor de 40 y cortisol mas de 18 g/dL)

109 Pruebas para Insuficiencia Suprarrenal Prueba Metyrapona –Bloquea 11 -hidroxilación –Usada para probar la respuesta suprarrenal a ACTH endógena Reduce cortisol y induce a insuficiencia suprarrenal Usada en CI de IIT

110 Procedimiento diagnóstico en sospecha de tumores hipofisiarios Dolor de cabeza Diabetes insipida Alteraciones visuales Acromegalia Síndrome de Cushing Amenorrea Galactorrea

111 Procedimientos diagnostico en sospecha de tumores hipofisiarios

112 Procedimientos diagnosticos en sospecha de tumores hipofisiarios

113 Evaluación pélvica Importante para la evaluación reproductiva –Función ovárica –Desarrollo endometrial

114 Evaluación pélvica SOP –Ovarios poliquisticos Criterio diagnóstico de Rotterdam Anomalías Müllerianas –Ultrasonido 3D Miomatosis Uterina


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