REACCIONES DE HEMAGLUTINACIÓN 2015

INMUNOHEMATOLOGÍA La inmunohematología es la parte de la hematología que se ocupa de las reacciones inmunológicas relacionadas con todos los componentes de la sangre. Una de las pruebas más importantes practicada en la inmunohematología es el estudio del Grupo Sanguíneo.

GRUPOS SANGUÍNEOS Se han descrito más de 400 antígenos eritrocitarios. Cada antígeno está definido por un anticuerpo específico que reacciona con él.

Sistema ABO Descubierto hace más de 100 años por Karl Landsteiner. Es uno de los sistemas más importantes en medicina transfusional. La expresión de los antígenos ABO presenta cambios durante el desarrollo fetal y del individuo, especialmente en los primeros años de vida y en los ancianos, y en la patogénesis de ciertas enfermedades.

Tres genes controlan la expresión de los antígenos ABO: gen H: ubicado en el cromosoma 19 gen ABO: ubicado en el cromosoma 9 gen Se: ubicado en el cromosoma 19

Dos antígenos mayores A y B, forman la base del sistema ABO. Las macromoléculas que determinan los grupos del sistema ABO son sustancias de naturaleza glicoproteica que están presentes en la membrana de los hematíes de una forma muy abundante y bastante superficial.

Dentro del sistema ABO existen 4 grupos de sangre, A, B, AB y O Hematíes del grupo A: antígeno A Hematíes del grupo B: antígeno B Hematíes del grupo AB: antígeno A y antígeno B Hematíes del grupo O: no tienen ninguno de los 2 antígenos.

Anticuerpos del sistema ABO Anti-A y anti-B Son predominantemente IgM. También pueden ser IgG, pero son menos frecuentes y generalmente son producidos por individuos del grupo O. Pueden reaccionar a la temperatura corporal (37°C) y activar el complemento causando una rápida destrucción intravascular de los hematíes.

El título de anti-A y anti-B con frecuencia se encuentra disminuido en el anciano y en pacientes con hipogammaglobulinemia. Los niños recién nacido NO producen anti-A ni anti-B hasta que alcanzan los 3-6 meses de edad.

Factor Rh En el año 1940, se detecta la existencia de un nuevo antígeno en la membrana de los hematíes de la mayoría de la población. Este antígeno es llamado Rh, ya que las primeras investigaciones se llevaron a cabo experimentando con un simio del tipo Rhesus. Se observó que al inyectar hematíes humanos a estos simios, producían un anticuerpo que era capaz de reaccionar aglutinando los hematíes en el 85% de la población.

El sistema Rhesus está constituido por unos 40 antígenos distintos, cinco de los cuales revisten una importancia especial. Los alelos más comunes que pueden ocupar dichos loci se designan con los símbolos D y d, C y c, E y e.

La presencia o ausencia de antígenos Rh (antígeno D) en los hematíes determina la clasificación del individuo como Rh positivo o Rh negativo.

El antígeno D es un potente inmunógeno El antígeno D es un potente inmunógeno. Aproximadamente el 70% de los individuos Rh negativos producen anti-D si reciben sangre Rh positiva. Debido a que los antígenos C y E no son tan inmunógenos como el D, dichos antígenos no se determinan en las pruebas de rutina.

Anticuerpos del sistema Rhesus Anti-D Los anticuerpos son casi siempre IgG. En algunos individuos hay además IgM e IgA. Pueden causar reacciones transfusionales y enfermedad hemolítica del recién nacido.

Otros sistemas Sistema Lewis (Le) Sistema Kell Sistema Duffy (Fy) Sistema Kidd (Jk) Sistema MNSs Sistema P

TipificaciÓn sanguinea La tipificación sanguínea permite detectar los antígenos ABO y Rh en la sangre de cada individuo.   La sangre humana se agrupa de acuerdo con la presencia o ausencia de esos antígenos.

FRECUENCIA EN LA POBLACIÓN

El grupo O: puede dar sangre a todos los demás solamente puede recibir de otra persona con tipo O. El grupo A: puede dar al grupo A recibir sangre de donadores del grupo A El grupo B: puede dar al grupo B recibir sangre de donadores del grupo B El grupo AB: sólo puede dar a personas de grupo AB recibir sangre de personas de todos los grupos.

De la misma manera que en el sistema ABO, en el sistema Rh no se puede transfundir el antígeno Rh a las personas que no lo tienen, ya que podría originar la producción de anticuerpos Rh en el receptor. Los sujetos Rh negativos sólo podrán recibir sangre de donantes Rh negativos.

Grupo AB+ Receptor universal “Puede recibir de cualquier otro grupo y de sí mismo” Grupo O- Donante universal “Puede donar a cualquier grupo”

Importante En todas las embarazadas se debe determinar el tipo de sangre y el factor Rh. Si la sangre de la paciente es Rh negativa, se debe determinar la sangre del marido. Si su sangre es Rh positiva, hay que establecer la presencia de anticuerpos anti Rh en la sangre de la mujer(mediante la prueba de coombs indirecta). Si sale negativa(ausencia de anticuerpos frente al antígeno Rh), se repite la prueba en las semanas 30 y 36 del embarazo. Si el resultado sigue siendo negativo, no existe riesgo para el feto.

Cuando la prueba es positiva, la sangre del feto habrá experimentado hemólisis a causa de los anticuerpos maternos. La severidad de la anemia hemolítica se evalúa después por la cantidad de bilirrubina presente en el líquido amniótico.

Pruebas cruzadas Otras tareas realizadas habitualmente en inmunohematología son las pruebas cruzadas. Estas se efectúan antes de transfundir sangre y consisten en enfrentar la sangre del donante a la del receptor para asegurarse de su compatibilidad.

Los anticuerpos anti-A o anti-B en el receptor casi siempre son capaces de causar una rápida destrucción (hemólisis) de los glóbulos rojos incompatibles transfundidos tan pronto como estos entran en circulación. Una transfusión de glóbulos rojos que no ha sido sometida a pruebas de compatibilidad acarrea un alto riesgo de causar una reacción hemolítica aguda.

Las pruebas de compatibilidad comprenden la determinación de los grupos ABO y Rh del receptor así como el estudio de la presencia de anticuerpos irregulares en el suero del mismo.

Parte experimental

TIPIFICACIÓN SANGUÍNEA La detección celular del grupo ABO puede realizarse mediante una técnica en porta objeto o mediante una técnica en tubo. En ambos casos los hematíes problema, que contienen sustancias antigénicas del sistema ABO, se enfrentan con antisueros dirigidos contra esos Ag. El resultado final de esta determinación consiste en la aglutinación directa de los eritrocitos, cuando reaccionan contra el antisuero que les corresponde.

MATERIAL NECESARIO   Porta objetos dividido en 2 secciones mediante un marcador indeleble Lancetas estériles Palillos mezcladores Pipeta automática de 50 uL Cronómetro REACTIVOS Antisueros: Suero anti-A(color azul) Suero anti- B(color amarillo) Suero anti-D(incoloro)

B A Porta objetos marcados con A y B B A Se coloca una gota de sangre en cada espacio preparado, una gota en A y otra gota en B y los respectivos reactivos (anti-A y anti-B) B A Se mezclan sangre – reactivo y se esperan 2 minutos Agitando con un movimiento circular y de manera suave la placa.

Rh Se coloca una gota de sangre en el espacio preparado, una gota de anti Rh. Rh Se mezclan sangre – reactivo y se esperan 2 minutos Agitando con un movimiento circular y de manera suave la placa. Rh

LAVADO DE GLÓBULOS ROJOS Lavar las células 3-4 veces con solución fisiológica, descartando el sobrenadante y resuspendiendo en cada lavado.

Antígeno Du Es una variante débil del antígeno D. Los hematíes Du generalmente dan reacciones débiles o negativas con el anti-D.

Lavar 3 veces con sol. fisiológica - Anti-D Eritrocitos al 5% Eritrocitos al 5% Control negativo PACIENTE CONTROL Incubar a 37°C por 15 a 30 min. Lavar 3 veces con sol. fisiológica PACIENTE CONTROL Suero de Coombs Suero de Coombs

Dos tubos de ensayo etiquetados como “paciente” y “control” Al tubo “paciente” agregarle 1 gota de suero Anti- Rho (Anti-D) y 1 gota de eritrocitos a investigar en una suspensión al 5%. Y al tubo “control” agregarle 1 gota de reactivo control negativo y 1 gota de eritrocitos a investigar, en una suspensión al 5%. Mezclar suavemente el contenido de ambos tubos y centrifugar. Incubar un mínimo de 15 a 30 min a 37°C. Después lavar 3 veces con solución salina isotónica. Decantar completamente después del ultimo lavado. Procurar que los bordes de los tubos estén bien secos. Agregar a cada tubo, 2 gotas del suero Anti-globulina humana (suero de Coombs), mezclar suavemente y centrifugar. Leer los resultados, después de desprender con suavidad el botón de glóbulos del fondo de cada tubo.

Pruebas cruzadas Pruebas Cruzadas para la determinación del grupo sanguíneo Prueba mayor: se utilizan dos gotas de suero del receptor más una gota de eritrocitos lavados del donador. Prueba menor: dos gotas de suero o plasma del donador más una gota de eritrocitos del receptor. La prueba cruzada mayor es la que se acostumbra a efectuar actualmente.

Fundamento En la prueba cruzada mayor, se pretende detectar la presencia, en el suero del receptor de la transfusión sanguínea, de Ac dirigidos contra los eritrocitos del posible donante, lo cual produciría una destrucción prematura de éstos.

GRACIAS!