Química Biológica I FCNyCs UNPSJB 2018 EVALUACIÓN DE COLESTEROL TOTAL Y FRACCIONADO POR UNA TÉCNICA DE CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA (TLC Química Biológica I FCNyCs UNPSJB 2018
Objetivo -Determinar colesterol libre y esterificado en sangre mediante una técnica de cromatografía de adsorción en placa delgada.
Éster de colesterol
Función Constituyente de la estructura de membranas biológicas. Precursor metabólico de Hormonas, vitamina y ácidos biliares.
Cromatografía en placa delgada ¿Qué características podría atribuirle a éste tipo de cromatografía?
Muestra: Suero ¿ Se podría pensar en otro tipo de muestra Muestra: Suero ¿ Se podría pensar en otro tipo de muestra? ¿ De qué dependería? Testigo de Colesterol: 2g/L Fase estacionaria: Silicagel Fase Móvil:n-hexano:cloroformo:acido acético glacial 1,25.3,45:0,30 (v/v) Revelador:solución de ácido fosfotùngstico 20 % en etanol (p/v). Formación de complejo: Reactivo férrico y ácido sulfúrico. Cuantificación por espectrofotometría: 530 nm.
Reacción de Zlatkis
¿Qué cuidados se deben tener presente en la técnica? Activar las placas a 100 °C, 30 min. Marcar frente de solvente Saturación de la cuba con la fase móvil. Tiempos de obtención de colesterol: extracción con solvente, baño de agua, evaporación.
Cálculos El porcentaje de cada fracción se calcula así: Lectura D.O. de CL + lectura D.O. de CE = 100 % %CL= (D.O. de CL / lectura D.O. de CL + CE). 100 %. %CE= (D.O. de CE / lectura D.O. de CL + CE). 100 %. Para efectuar el cálculo en mg% se evalúa el colesterol sérico total en igual forma que el testigo, pero agregando, por supuesto, 50 ul del suero en lugar de la solución testigo de colesterol. Mg% CT= (D.O. del suero / lectura D.O. del testigo). 200.
Gracias y excelente día