SERVICIO DE LABORATORIO ÁREA CITOGENÉTICA Dra. Stella Loudet http://laboratorio.blogs.hospitalelcruce.org http://laboratorioaltacomplejidad.blogspot.com www.hospitalelcruce.org laboratorio@hospitalelcruce.org

ESTUDIOS DIAGNÓSTICOS Citogenética Clásica: Cariotipo en sangre periférica - Bandeo G y Bandeo C en recién nacidos, niños y adultos. Diagnóstico Citogenético- Molecular: Hibridación in situ Fluorescente (FISH): Síndrome de deleción 22q11.2 Síndrome de Saethre-Chotzen Síndrome de Williams-Beuren Síndrome de Prader-Willi / Angelman Anomalías cromosómicas subteloméricas (Ej: Síndrome de deleción 1p36) Estudio de aneuploidías con sondas centroméricas (cromosomas X,Y,13,18 y 21) Estudio del gen SRY con sondas locus específicas

CITOGENÉTICA CLÍNICA Es la rama de la genética médica que tiene por objeto el estudio de la estructura y el comportamiento cromosómico y su relación con la patología genética Dra. Verónica Cazayous Bioquímica especialista en Citogenética Dra. Soledad Massara Bioquímica especialista en Citogenética Clásica y Molecular

ESTUDIO CITOGENÉTICO INDICACIONES: 1. PERÍODO PRENATAL: - Triple screening alterado - Edad materna mayor de 35 años con screening prenatal alterado - Retraso de crecimiento intrauterino (RCIU) - Anomalía ecográfica - Antecedentes de cromosomopatía balanceada en un progenitor 2. PERÍODO NEONATAL: - Malformaciones/ Defectos congénitos - Rasgos dismórficos - Genitales ambiguos - Muerte neonatal de causa inexplicada - Sospecha de Sindrome Genético 3. PERÍODO LACTANCIA/ESCOLAR: - Dificultades para el aprendizaje - Retraso psicomotor 5. PERÍODO DE ADOLESCENCIA: - Ginecomastia - Falta de desarrollo puberal - Amenorrea primaria o secundaria 6. PERÍODO DEL ADULTO: - Padres de niños con anomalías cromosómicas estructurales - Abortos a repetición - Infertilidad inexplicable 7. EN TODAS LAS EDADES: - Procesos malignos (cariotipo constitucional y tumoral) - Control de trasplantes de medula ósea

Anomalías cromosómicas Numéricas Aneuploidías (Ej: Trisomía 21, 13, 18, Monosomía X) Poliploidías (Sólo se observan en diagnóstico prenatal y en citogenética en oncohematología) Estructurales Inversiones Inserciones Duplicaciones Deleciones (Ej: Sindrome de Cri Du Chat/ Sindrome de Wolf) Cromosomas marcadores Anillos Isocromosomas Translocaciones

ESTUDIO CITOGENÉTICO CARIOTIPO “IDENTIFICACION Y ORDENAMIENTO SISTEMÁTICO DE LOS CROMOSOMAS DE UNA CÉLULA DE ACUERDO A CONVENCIONES INTERNACIONALES”

CARIOTIPO MASCULINO 46,XY

CARIOTIPO FEMENINO 46,XX

Cariotipo 1- Venopunción (sangre periférica) Muestra de sangre Fitohemaglutinina Medio de cultivo RPMI Suero fetal Bovino 1- Venopunción (sangre periférica) 2- Entrada de la muestra para cultivo celular 3- Cultivo celular 72hs 6- Bandeo PONER ANIMACION A TODOOOOOOO Colchicina Shock Hipotónico Fijación (AcH:Metanol) 7- Análisis 5- Realización de extendidos 4- Cosecha

HIBRIDACIÓN FLUORESCENTE IN SITU Técnica que permite detectar secuencias de ADN en cromosomas metafásicos o núcleos interfásicos en muestras citogenéticas y fijadas. Se utiliza una sonda de ADN que hibrida cromosomas completos o secuencias única simples.

Diagnósticos disponibles en nuestro laboratorio (FISH) Síndrome de deleción 22q11.2 Síndrome de Saethre-Chotzen Síndrome de Williams-Beuren Síndrome de Prader-Willi / Angelman Anomalías cromosómicas subteloméricas (Ej: Síndrome de deleción 1p36) Estudio de aneuploidías con sondas centroméricas (cromosomas X,Y,13,18 y 21) Estudio del gen SRY con sondas locus específicas

TOMA DE MUESTRA DE SANGRE PERIFERICA PARA ESTUDIO CITOGENETICO DÍAS DE RECEPCIÓN DE MUESTRAS: • LUNES • MARTES • VIERNES IMPORTANTE: MANTENER LA ESTERILIDAD DE LA MUESTRA 1) Datos del paciente • Nombre y Apellido……………………………………………………………… • Sexo……………………………………………………………………………… • D.N.I………………………………………………………………………………. • Fecha de Nacimiento…………………………………………………………… • Domicilio…………………………………………………………………………. • Teléfono………………………………………………………………………….. • Médico…………………………………………………………………………… • Diagnóstico (muy importante)…………………………………………………………………………

TOMA DE MUESTRA DE SANGRE PERIFERICA PARA ESTUDIO CITOGENETICO 2) • Transfusiones: si es de paquete globular o plaquetas se puede realizar la toma de muestra. • Medicamentos: preferentemente si están tomado antibióticos no realizar el estudio (hay más posibilidades que el cultivo no tenga éxito). Si el medicamento no se puede suspender se realiza igual el estudio con la aclaración correspondiente. Es fundamental mantener las condiciones de estricta esterilidad de la muestra como también la viabilidad celular. Las condiciones en que llegue la muestra son importantísimas para la obtención de buenas preparaciones cromosómicas.

TOMA DE MUESTRA DE SANGRE PERIFERICA PARA ESTUDIO CITOGENETICO 3) Extracción: • Limpiar bien la mesada de extracción con alcohol 70 (antes de apoyar agujas – jeringas) • Humedecer el interior de una jeringa de 5ml. (BD o Terumo) con heparina sódica ESTÉRIL (Duncan, Rivero o Richmon), dejando unos 0,05 ml dentro de la jeringa (hasta el émbolo). Mantener en estricta esterilidad. (Cuidar de que no entre aire a la jeringa) • Extraer entre 2 y 5 ml se sangre venosa o arterial, previa desinfección de la zona de extracción con alcohol (no utilizar iodo povidona ni ningún otro desinfectante) • La mínima cantidad de sangre para un cultivo exitoso es de 1 ml. • Tapar la jeringa con tapón de PLÁSTICO DURO ESTÉRIL impidiendo el contacto de la muestra con el aire. NO DOBLAR LA AGUJA ni utilizar tapones de goma. • Rotular la jeringa con el nombre del paciente y fecha de extracción.

TOMA DE MUESTRA DE SANGRE PERIFERICA PARA ESTUDIO CITOGENETICO 4) Conservación • La muestra se conserva en la jeringa (sin transvasar) y a temperatura ambiente hasta el momento del cultivo. Si por algún motivo el cultivo se demora más de 24 horas, la muestra puede conservarse en heladera a 4º C SIN CONGELAR. 5) Envío • Debe elegirse una vía que permita la llegada de la muestra en el día. De no ser posible recuerde que la misma debe llegar antes de las 48 horas. • La muestra debe enviarse en la misma jeringa en la que se hizo la extracción, sin trasvasar y a temperatura ambiente (sin refrigerantes) en condiciones de Bioseguridad. CONSULTAS AL: 4210 9000 int. 1812 Ver en página web: www.hospitalelcruce.org Ir a Servicios Laboratorio Área de Citogenética.

POR QUE NECESITAMOS ESTERILIDAD?? POR QUE PARA EL ESTUDIO DE CARIOTIPO SE REALIZA UN CULTIVO DE LINFOCITOS DE 72 HS. POR QUE PEDIMOS MARCAS ESPECIFICAS DEL MATERIAL DESCARTABLE Y DE LA HEPARINA?? POR QUE LAS CÉLULAS HUMANAS SON MUY SENSIBLES PARA DESARROLARSE IN VITRO Y HEMOS COMPROBADO EMPIRICAMENTE QUE HAY CIERTAS MARCAS QUE INHIBEN SU CRECIMIENTO

MATERIAL DESCARTABLE HEPARINA BD, TERUMO HEPARINA DUNCAN, RIVERO, RICHMON

MUCHAS GRACIAS POR SU ATENCIÓN