ANÁLISIS CLÍNICOS II: ETAPA ANALÍTICA Clase 14: Proteínas INSTITUTO UNIVERSITARIO DE CIENCIAS DE LA SALUD FUNDACIÓN HÉCTOR A. BARCELÓ CARRERA DE TÉCNICOS EN ANÁLISIS CLINICOS ANÁLISIS CLÍNICOS II: ETAPA ANALÍTICA Clase 14: Proteínas Dra. Graciela Etcheverry

PROTEÍNAS TOTALES Compuestos orgánicos macromoleculares Elementos estructurales y de transporte Enzimas, hormonas, anticuerpos, factores de coagulación, etc. Contribuyen a mantener el volumen del fluido

Valor de referencia (suero): 60 – 80 g/l PROTEÍNAS TOTALES Valor de referencia (suero): 60 – 80 g/l Aumentado: mieloma múltiple, endocarditis bacteriana, enfermedad hepática crónica (hepatitis crónica activa, cirrosis) hemoconcentración(deshidratación, éstasis venoso prolongado, evaporación del suero), hemólisis Disminuido: pérdidas renales (síndrome nefrótico,glomerulonefritis), desnutrición, gastroenteropatías, quemaduras, deficiencia proteínica severa, alcoholismo, agamaglobulinemia, enfermedad celíaca, infecciones prolongadas hemodilución local, 3º trimestre del embarazo.

PROTEÍNAS – método de Biuret Ión cúprico + enlaces peptídicos medio alcalino complejo color violeta ( 540 nm)

ALBÚMINA proteína globular de síntesis casi exclusivamente hepática que constituye la principal proteína del suero humano normal ROLES: - en el mantenimiento de la presión coloidosmótica - en el transporte de diversos iones, aminoácidos, hormonas, drogas, ácidos grasos, bilirrubina, ácidos biliares, vitaminas, etc que en forma libre son insolubles en medio acuoso. - proteína de reserva

ALBÚMINA Utilidad clínica: proteína útil en el diagnóstico de insuficiencia hepática y pérdida de proteínas. Valor de referencia: 35 – 45 g/l (en suero) Aumenta: deshidratación, hiperinfusión Disminuye: malabsorción, obstrucción intestinal, enfermedad hepática, malnutrición, ascitis, síndrome nefrótico, quemaduras

Métodos de análisis de albúmina Fijación de colorante: Alb + colorante desplazamiento de Abs Inmunoquímicos IDR, nefelometría y turbidimetría Electroforesis [Alb] = [Prot] X % Alb DESACONSEJADO!!! BCG: 620 – 630 nm BCP: 603 nm

Electroforesis de proteínas La electroforesis es una técnica basada en los movimientos de moléculas cargadas en un campo eléctrico carga eléctrica tamaño intensidad del campo eléctrico temperatura del medio

Soportes para electroforesis 1) papel 2) acetato de celulosa 3) agarosa 4) almidón 5) poliacrilamida

Fases de la electroforesis 1) aplicación 2) migración 3) incubación 4) coloración 5) decoloración 6) secado

APLICADORES

APLICADORES

CUBAS DE ELECTROFORESIS

Albúmina: Marcada disminución Alfa1 globulinas: Normal Alfa 2 globulinas: Disminuida Beta globulinas: Disminuida Gammaglobulinas: Marcado aumento

Cuantificación de las bandas en electroforesis Evaluación visual Elución Densitometría ¡¡¡DIFERENTE AFINIDAD DE LAS PROTEÍNAS POR EL COLORANTE!!!!

Corrida electroforética Gamopatías policlonales activación inmunológica crónica Altos niveles de alfa-2- y alfa-1 globulinas aumentos de proteínas de fase aguda debido a procesos inflamatorios Bajos niveles de gamma globulinas  drogas inmunosupresoras, inmunodeficiencias primarias Bajos niveles de alfa-2-globulinas  disminución de haptoglobina (daño hepatocelular) Corrida electroforética

Corrida electroforética Bajos niveles de alfa-1-globulinas disminución de alfa-1-antitripsina Patrón normal con proteínas totales disminuidas  deficiencia dietaria o hemodilución Patrón normal con proteínas totales elevadas deshidratación Proteínas totales y albúmina significantemente bajos, alfa-2 incrementada y baja gammaglobulina  síndrome nefrótico Gamma y beta globulinas elevadas con puente beta-gamma cirrosis Corrida electroforética

Electroforesis de proteínas urinarias y de LCR Con concentración previa: polímeros Sin concentración previa: - coloraciones más sensibles (Coomasie blue, tinción de Ag) - soporte: poliacrilamida

CONCENTRADORES

COMPONENTE MONOCLONAL Componente monoclonal, paraproteína, disglobulinemia o gammapatía monoclonal: se refiere a una producción excesiva de un tipo de inmunoglobulina, cadenas livianas o pesadas. El aumento en la proliferación de un clon específico de linfocitos B hiperestimulados o malignos genera una población homogénea de inmunoglobulina monoclonal.

Componente monoclonal formas clínicamente ocultas (asintomáticas o presintomáticas) gammopatías monoclonales de significado incierto (MGUS) gammopatías monoclonales benignas (inflamaciones crónicas y procesos infecciosos) gammopatías monoclonales transitorias (tratamientos con fármacos, infecciones virales, prótesis cardíacas) formas clínicamente manifestadas debido a la proliferación del clon neoplásico (mieloma múltiple, leucemia plasmocelular, macroglobulinemia de Waldenstrom, enfermedad por cadenas pesadas) formas clínicamente manifestadas debido a efectos patológicos del componente monoclonal (enfermedad crónica por crioaglutininas, amiloidosis, enfermedad por depósito de inmunoglobulinas o de cadenas livianas, polineuropatías).

INMUNOELECTROFORESIS

IEF

INMUNOFIJACIÓN Técnica sensible para la detección de componentes monoclonales u oligoclonales en el diagnóstico y seguimiento de pacientes con sospecha de MGUS y en el seguimiento de pacientes en tratamiento con enfermedades como mieloma

Etapas de la IF 1) Electroforesis en gel de agarosa 2) Inmunoprecipitación: aplicación de un anticuerpo monoespecífico del antígeno de interés sobre el gel de agarosa 3)Eliminación de las proteínas solubles no precipitadas 4)Visualización de los precipitados y las proteínas fijadas mediante tinción

Pool de pacientes normales. CONTROL DE CALIDAD Se procesa simultáneamente el suero / orina / LCR de un adulto normal, según corresponda. Pool de pacientes normales.

AUTOMATIZACIÓN EN EL LABORATORIO DE PROTEÍNAS Autoanalizadores Nefelómetros Turbidímetros Equipos de electroforesis