PANAGLUTININAS

QFB Elizabeth Guzmán Vázquez Banco de Sangre del Instituto Nacional de Cancerología

Principios fisicoquímicos de la hemaglutinación Hoy día la inmunohematología define la compatibilidad transfusional con base en los componentes estructurales de las células los anticuerpos y su interacción

Principios fisicoquímicos de la hemaglutinación Las técnicas serológicas permiten determinar un alto grado de resolución Realizar la mejor práctica en la toma de decisiones para atender los requerimientos transfusionales de los pacientes

Principios fisicoquímicos de la hemaglutinación En casos muy particulares se puede ahora utilizar herramientas de Biología Molecular Ayudan en la determinación de los genes productores de las proteínas portadoras de antígenos de grupos sanguíneos Además posibles mutaciones genéticas que llevaran a cambios estructurales de estos antígenos

Principios fisicoquímicos de la hemaglutinación Si producimos cambios físico-químicos en suspensiones de partículas de coloides, células como bacterias y los glóbulos rojos Pierden la estabilidad y se aglutinan Formando aglomerados lo que nosotros traducimos como una “aglutinación”

Principios fisicoquímicos de la hemaglutinación En Inmunohematología eritrocitaria, el fenómeno de aglutinación de los glóbulos rojos producido por la reacción entre anticuerpos y antígenos de grupos sanguíneos, constituye la base de casi todas las técnicas aplicadas en la “serología de los grupos sanguíneos”

Aglutinación eritrocitaria La aglutinación de glóbulos rojos en suspensiones fisiológicas puede ocurrir por dos mecanismos básicos Aglutinación específica Aglutinación inespecífica

Aglutinación específica Una suspensión de glóbulos rojos en solución salina fisiológica (NaCl 0,9%) constituye un sistema estable Las células se mantienen a una cierta distancia unas de las otras

Aglutinación específica La estabilidad pude romperse por Introducción de anticuerpos específicos que se fijarán en antígenos de la membrana eritrocitaria Generando aglutinación de estas células

Aglutinación específica De acuerdo con la “teoría de los puentes” Las moléculas de anticuerpos tienen la capacidad de fijarse sobre sitios antigénicos de células adyacentes formando puentes entre ellas Constituyendo una red la cual se hace evidente observándose la aglutinación

Aglutinación específica De acuerdo con la “teoría de los puentes” Es un modelo simple del fenómeno de aglutinación de glóbulos rojos en suspensión No permite comprender los ejemplos de aglutinaciones inespecíficas (ausencia de anticuerpos)

Aglutinación inespecífica Este fenómeno, llamado de “panaglutinación”, corresponde a la aglutinación de glóbulos rojos normales (no sensibilizados por anticuerpos) por substancias presentes en el medio de la suspensión, como: Detergentes Sílice coloidal Iones metálicos Macromoléculas (albúmina, polibreno, ficol, dextran)

Aglutinación inespecífica Algunas lectinas (fito-aglutininas) (anti-A1, anti-H) son capaces de reaccionar contra receptores presentes en los glóbulos rojos humanos, produciendo un fenómeno que se acerca mucho de la aglutinación por anticuerpos

Potencial Zeta Para la comprensión de los fenómenos de hemaglutinación específica y no específica, necesitamos de un modelo más complejo, con base en procesos físico-químicos, donde el factor más importante a ser considerado es la distancia media que separa los glóbulos rojos en suspensión

Potencial Zeta Esta distancia puede ser disminuida por la adición de anticuerpos u otras substancias al medio, hasta un punto crítico en que la aglutinación ocurre Los glóbulos rojos se comportan como partículas electronegativas en estudios de migración electroforética

Potencial Zeta Los grupos carboxílicos de las sialo-glicoproteínas de la membrana globular son los mayores responsables por esta electronegatividad En medio salino (NaCl al 0,9%), iones positivos de sodio (Na+) son atraídos cerca de los glóbulos rojos, creando una doble nube de cargas positivas, que genera una fuerte repulsión intercelular

Doble nube de iones Na+

Potencial Zeta La nube de iones positivos que involucra cada células, se vuelve menos densa mientras se aleja del glóbulo La diferencia de potencial eléctrico creada entre la doble nube de iones positivos (Na+) cerca del eritrocito y el medio con iones de sodio y cloruro tendiente al equilibrio (neutro), se llama “Potencial Zeta”

Potencial Zeta La fuerza de repulsión entre los glóbulos rojos, en medio salino, depende del valor del potencial zeta

Otros factores que influencian la reacción de aglutinación La temperatura de la reacción y el pH del medio de suspensión, influyen: En la fijación primaria de los anticuerpos sobre sus antígenos Sobre el fenómeno de aglutinación, no son disociables Hay dos temperaturas de reacción Reacciones óptimas en bajas temperaturas (4°C) conocidos como “anticuerpos fríos” Reacciones óptimas en temperaturas más elevadas (37°C) conocidos como “anticuerpos calientes”

Otros factores que influencian la reacción de aglutinación Anticuerpos frios Anticuerpos naturales regulares o irregulares Especificidad: anti-I, -H, -A, -B, -AB, -Le, -M, -N e –P1 Anticuerpos calientes Anticuerpos inmunes Especificidad: Sistemas Rh, Kell, Duffy, Kidd, MNS, Diego, etc.

Otros factores que influencian la reacción de aglutinación Los cambios de pH entre 6,0 y 8,0 tienen poca influencia sobre la reactividad de los anticuerpos Fuera de estos límites se puede observar hemólisis de los glóbulos rojos para valores extremos del pH O una inhibición de la aglutinación debida a una disminución importante de la constante de asociación de los anticuerpos

Definición Panaglutinina Anticuerpo que causa aglomeración (aglutinación) de los eritrocitos de todos los grupos sanguíneos de una especie

Definición Panaglutinación El suero de un paciente contiene un anticuerpo que aglutina todas las células normales

Definición Pananticuerpo Anticuerpo sérico activo contra una variedad de antígenos (por ejemplo: glóbulos rojos, leucocitos o plaquetas), procedente del propio paciente o de un individuo normal de la misma especie y del mismo grupo sanguíneo, si se trata de glóbulos rojos Según su modo de acción, se distinguen las panaglutininas y las panhemolisinas

Panaglutinina Un anticuerpo que reacciona contra todas las células de reactivos en un panel , en lugar de una o más células específicas Comúnmente son autoanticuerpos También pueden ser anticuerpos dirigidos contra antígenos de alta frecuencia de glóbulos rojos (los antígenos presentes en casi todos los demás de los glóbulos rojos)

Panaglutinina El autocontrol puede ayudar en esta distinción Panaglutininas pueden ser "calientes" o "frías" en función de la temperatura a la cual reaccionan mejor

Hallazgos serológicos en la AHAI PAD positivo AHAIC SAF AHAI de tipo mixto HFP AHAI inducida por drogas % Causas 48-70% 16-32% 7-8% Rara en adultos, en niños 94% 12-18% PAD 20-66% IgG 24-63% IgG+C3 7-14% C3 91-98% solo C3 71-100% IgG+C3 94-100% C3 94% IgG, 6% IgG+C3 Tipo de Ig IgG ( a veces IgA, IgM, rara vez solas) IgM IgG, IgM IgG Eluato Ac. IgG NR Ac. IgG Suero Panaglutininas (20-37°C) hemolisa Panaglutininas (IgM) >1000 a 4°C aglutina Panaglutininas (PAD IgG, IgM <64 a4°C) aglutina Hemolisinas bifasica IgG (Ac. Donath-Landstainer) Especificidad Esp. Tipo I 9%, tipo II 20% esp. Rh Anti-I / anti-i, rara vez Pr Esp. Confusa puede ser anti-i /aglutininas frias Anti-P (NR con Gr p y P) Esp.. Relacionada a Rh Modificado por Brecher ME. (ed.) 2005 Manual técnico AABB, 15th edición. Bethesda, MD: AABB Press

Clasificación de las Anemias Hemolíticas Autoinmunes Inducidas por drogas Aloinmunes

Clasificación de las Anemias Hemolíticas Autoinmunes (AHAI) AHAI por Ac. Calientes Primaria (idiopática) Secundaria (linfomas, LES, carcinoma o fármacos) Síndrome de aglutinina fría Primaria (idiopática) Secundaria (linfomas, micoplasma pneumonie, mononucleosis infecciosa)

Clasificación de las Anemias Hemolíticas Autoinmunes (AHAI) AHAI de tipo mixto Primaria (idiopática) Secundaria (LES, linfoma) Hemoglobinuria paroxística fría Primaria (idiopática) Secundaria (Sífilis, infecciones virales) AHAI PAD negativo Primaria (idiopática) Secundaria (LES, linfoma)

Clasificación de las Anemias Hemolíticas Autoinmunes (AHAI) Anemia hemolítica inducida por drogas Anemia Hemolítica Aloinmune Enfermedad hemolítica del recién nacido Reacción Transfusional hemolítica

Ideopática Idiopático es un adjetivo usado primariamente en medicina, que significa de irrupción espontánea o de causa desconocida La combinación de raíces del griego significa "una enfermedad de etiología desconocida“.

Resultados de PAD en la AHAI con Reactivos anti-IgG y anti-C3 SAF AHAI de tipo mixto HFP AHAI inducida por drogas No de pacientes 355 275 61 17 157 IgG sola (%) 67 1 16 94 IgG+C3 (%) 24 71 6 Poliesp (+) Monoesp. (-) %) 0.7 PAD negativo (%) 6.3 1.2 Manual técnico AABB, 15th edición. 2005 Bethesda, MD: AABB Press.

Drogas que pueden inducir Anticuerpos Droga-independientes (Auto-Ac.) A-metildopa Cianidanol Levodopa Azapropazona Clorpromazina Acido mefenámico Carbimazol Ciclofenil Nomifensina Catergeno Diclonenaco Fenacetina Cefotetan Fenfluramina Procainamida Cefoxitina Glafenina Estreptomicina Chaparral Ibuprofeno Teniposida Hidrocarburos clorados Latamoxel Tolmetina Manual técnico AABB, 15th edición. 2005 Bethesda, MD: AABB Press.

Clasificación de ISBT Colecciones o series de: a) Alta 32 Sistemas sanguíneo Constituidos por 300 antígenos genéticamente bien definidos Colecciones o series de: a) Alta b) baja incidencia

Grupos sanguíneos eritrocitarios Todos los Ac. son capaces de inducir respuesta inmunológica Reacción transfusional Transfusión sanguínea Enfermedad Perinatal Incompatibilidad Materno- Fetal Recordar que no todos los Ac. Son clínicamente significativos

¿Que es importante saber? Que grupos sanguíneos son considerados raros Como y cuando se diagnostican Como encontramos sangre compatible para pacientes con estos anticuerpos raros

Grupos sanguíneos raros El concepto de fenotipo raro La población La etnia 1:1000 fenotipo poco común 1:5000 fenotipo raro

Fenotipos de grupos sanguíneos raros Los fenotipos que carecen de un Antígeno alta incidencia: 1:1000 Los fenotipos que carecen de una combinación de Antígenos comunes 1:200 - 1:1000

Antígenos de alta incidencia ISBT

Fenotipos carentes de una combinación de Ag Categoría 1 R1,R2,rr Fya- o Fyb- Jka- o Jkb- K-1 S- o s- Categoría 2 R1,R2,rr Fy(a-b-) K-1 Laboratorio de inmunohematología Banc de Sang i Teixits, Barcelona

Ejemplo de encontrar un donador para transfundir Laboratorio de inmunohematología Banc de Sang i Teixits, Barcelona.

Probabilidad de encontrar un familiar con el fenotipo Kpa(a-b+) Laboratorio de inmunohematología Banc de Sang i Teixits, Barcelona

¿Cuándo y cómo los diagnosticamos? Panaglutinación con autocontrol negativo Ac contra Ag de alta incidencia o Mezcla de Acs

Ejemplo Fenotipo BOMBAY (Oh) 0.0004% 1 cada 250.000 individuos

Panaglutinación con autocontrol negativo Identificación ¿De qué Anticuerpo se trata? ¿Qué Anticuerpos componen la mezcla? Transfusión ¿Qué eritrocitos vamos a transfundir?

Panaglutinación con autocontrol negativo En estas situaciones es de gran ayuda el disponer de un Centro de Referencia, regional o nacional En ocasiones, se precisa incluso colaboración a nivel internacional (disponibilidad de antisueros, células ….) para la identificación del Ac o Acs Laboratorio de inmunohematología Banc de Sang i Teixits, Barcelona

¿Que debemos saber? Historia clínica Diagnóstico actual Antecedentes transfusionales Antecedentes gineco-obstetras Nacionalidad; raza, etnia Tratamiento médico Tratamiento farmacológico.

¿Que debemos saber? Comportamiento de los anticuerpos Fases de reacción ( antiglobulina, enzimática, proteica) Intensidad y grado de homogeneidad de la reacción en las diferentes fases Aglutinación o hemólisis a diferentes temperaturas (4°C, temperatura ambiente, 37°C) Reactividad del suero a diferentes tratamientos ( 2 ME)

Especificidades relacionadas con la Etnia ISBT

Datos serológicos orientativos en la identificación de Acs de alta incidencia ISBT

Comprobar la identificación del anticuerpo El fenotipo del paciente debe ser negativo al antígeno identificado Realizar la prueba de compatibilidad con hemocomponente sanguíneos sin los antígenos de alta incidencia encontrados Es muy importante considerar si hay una transfusión reciente se debe hacer el genotipo del paciente

¿Qué transfundir? No siempre el anticuerpo encontrado tiene importancia clínica lo cual permite Que el hemocomponente a transfundir no se cruce a fenotipo, pero si sea compatible a (37°C y ATG) Si el anticuerpo es hemolítico si es muy importante transfundir a fenotipo

¿Que necesitamos lograr? Tener centros de referencia que cuenten Diferentes paneles eritrocitarios Donadores cautivos con fenotipos conocidos Intercambios nacionales dirigidos a estos casos Trabajo en equipo

¿A que nos enfrentamos en nuestro centro de trabajo? Considerando las panaglutininas

Prueba inversa o sérica Reactividad del suero débil o nula Reactividad del suero excesiva Con comportamiento atípico E. Guzmán Vázquez Banco de Sangre INCan

Reactividad del suero débil o nula Anti -A Anti-B Anti-AB Auto-test Cel. A1 Cel. A2 Cel. B Cel. 0 4+ Neg Relación con la edad del paciente (<4-6 meses/anciano) Hipogamaglobulinemia Trasplante Neoplasias Tratamiento con inmunosupresores Síndrome de inmunodeficiencia E. Guzmán Vázquez Banco de Sangre INCan

Reactividad del suero excesiva Anti -A Anti-B Anti-AB Auto-test Cel. A1 Cel. A2 Cel. B Cel. 0 Neg 4+ Auto-aglutininas /exceso de proteínas Aloanticuerpos fríos Anticuerpo a un componente del reactivo Transfusión de algún componente del plasma Infusión de Inmunoglobulina Intravenosa Trasplante E. Guzmán Vázquez Banco de Sangre INCan

Comportamiento atípico Anti -A Anti-B Anti-AB Auto-test Cel. A1 Cel. A2 Cel. B Cel. 0 Neg 4+ Autoanticuerpos fríos y/o calientes Aloanticuerpos adquiridos en forma pasiva o activa Mieloma múltiple (Rouleaux) Uso de expansores como dextrán y polivinilpirrolidona Anticuerpos fríos (Lewis, M, N, P1, A, H, I) Pacientes con procesos autoinmunes (Ej. LES) E. Guzmán Vázquez Banco de Sangre INCan

Grupo directo normal con inverso incongruente Grupo inverso incongruente Lectura Negativa Lectura Positiva Tipificar grupo con : ↑ VOL Suero(2)/Eritrocitos(1) ABO conocido Incubar 30’ a 22°C (Leer microscopio si es necesario) AGLUTINA/HEMOLISIS INESPERADA Pb. Anticuerpo Irregular en suero Define Fin Si No Identificación de Anticuerpo (PANEL) Incubar 37°C Si Define Fin Absorber con cel. A y B /Realizar Elución Fin No Revisar historia clínica: Trasplantes Inmunosuprimidos Edad Inmunodeficiencias Fin Si Define Recomendaciones de expertos en Inmunohematología AMMTAC Realizar Grupo en saliva Métodos moleculares No

Autotestigo Positivo con Grupo Directo e Inverso Incongruente Grupo directo incongruente Grupo inverso incongruente Grupo Directo Grupo Inverso Ver algoritmo B Ver Algoritmo C Descartar Anemia Hemolítica Autoinmune Recomendaciones de expertos en Inmunohematología AMMTAC

Divergencias asociadas al sistema Rh Anti-D Control de Rh 2+ Falsos Positivos Uso de reactivo equivocado u omisión Eritrocitos poliaglutinables (panaglutininas, Rouleaux) Eritrocitos sin lavar (autoaglutininas) Contaminación o mala conservación del reactivo Presencia de otros anticuerpos de diferente especificidad E. Guzmán Vázquez Banco de Sangre INCan

MONOCLONAL/POLICLONAL Algoritmo para discrepancias del Rh LAVAR GR SSI a 0.9% 37°C REPETIR PBA MONOCLONAL/POLICLONAL PBA: POS CRH: POS Recomendaciones de expertos en Inmunohematología AMMTAC PBA: NEG CRH: NEG PBA: POS PAI RESULTADO VALIDO ANTI-D SALINO ELUCION PBA: NEG CRh: NEG PBA: POS CRh: NEG REPETIR PRUEBA PBA: NEG CRh: NEG PBA: POS CRh: NEG RESULTADO VALIDO RESULTADO VALIDO /VARIANTE DEBIL RESULTADO VALIDO E. Guzmán Vázquez Banco de Sangre INCan

Incidencia de Anticuerpos Irregulares en Pacientes Oncológicos del Instituto Nacional de Cancerología, México

Instituto Nacional de Cancerología Departamento de Banco de Sangre Ac. Encontrados en Pruebas Incompatibles EGV Instituto Nacional de Cancerología

Instituto Nacional de Cancerología Banco de Sangre Distribución por Servicio EGV Instituto Nacional de Cancerología

Total de Donadores con Anticuerpos Irregulares Positivos

Anticuerpos encontrados en donadores

Análisis de datos Se hizo un análisis retrospectivo del 1 de enero del 2000 al 31 octubre del 2013 en el cual se identificaron los estudios realizados a los pacientes con Aloanticuerpos

Resultados Se identificaron 383 pacientes de un total de 56,506 pacientes estudiados 302 Mujeres 81 Hombres Mediana de edad de 51 años (17-87años) Principales Diagnósticos: Ca Cervicouterino, Ca Gástrico, Ca de Colon, Hematológicos

Resultados

Propuesta Considerar dentro de las pruebas pretransfusionales el fenotipo del Rh, Dia y Kell del paciente, para evitar aloinmunizaciones, en nuestro centro de trabajo

Caso Clínico Paciente : REGA Femenino Servicio: Hematología Diagnostico: Osteosarcoma Metastásico Hb. 10.6 g/dL Hto. 30.2 Programada para Cirugía: Pulmón resección metástasis QFB ELizabeth Guzmán Vázquez INCan

Determinación de Grupo Sanguíneo AB0 y Rh Grupo ABO Directo Anti-A Anti-B Anti-AB Auto testigo S/r g 3+ S/37°C Neg Grupo ABO Inverso Cell. A1 Cell A2 Cell B Cell 0 S/r 4+ 3+ S/37°C Neg Grupo RH Anti-D Control Rh S/r 4+ 2+ S/37°C Neg O RH Positivo QFB ELizabeth Guzmán Vázquez INCan

Identificación de Anticuerpos Irregulares 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 AT Cell de Cordón S/r 3+ 4+ Neg S/22°C S/37°C S/C IgG Cons AGH 2+ S/C Poliv Ac. Irregulares fuera del S. AB0 Pos. Prob. Especificidad Auto Anti –H activo a 22°C E. Guzmán Vázquez Banco de Sangre INCan

Pruebas de Compatibilidad Cruzar unidades a Grupo Sanguíneo ABO y Rh Compatible Indicar el cuidado de no transfundir el concentrado eritrocitario frío. Sin problema ya que el auto-anti-H no esta activo a 37oC QFB ELizabeth Guzmán Vázquez INCan

Caso Clínico Paciente Femenino Edad 57 años Dx. Ca. De Pulmón, Sx. Anémico Medicamentos: Valmetrol-3 (Colecalciferol) Hb. 8.5g/dL, Ht: 24.2 Solicitan 1 CE Nota: Muestra con EDTA se observa con grumos (aglutinados) QFB ELizabeth Guzmán Vázquez INCan

Determinación de Grupo Sanguíneo y Rastreo de Anticuerpos Anti-A Anti-B Anti-AB Auto Anti-A1 Anti-H 2+ 4+ Cel. A1 Cel. A2 Cel. B Cel. O Grupo ABO O con problema Anti-D Control de Rh Sistema Rh (D) Positivo Células I II Dia Autot Interpretación Gel/Coombs 3+ Positivo QFB ELizabeth Guzmán Vázquez INCan

Determinación de Grupo Sanguíneo y Rastreo de Anticuerpos Anti-A Anti-B Anti-AB Auto Anti-A1 Anti-H 4+ Cel. A1 Cel. A2 Cel. B Cel. O Grupo ABO O Rh Anti-D Control de Rh Sistema Rh (D) Positivo Se incubo el grupo a 37°C E. Guzmán Vázquez Banco de Sangre INCan

Identificación del Anticuerpo libre en Suero Cel 1 Cel 2 Cel 3 Cel 4 Ce l 5 Cel 6 Cel 7 Cel 8 Cel 9 Cel 10 Auto S/r 1+ 3+ S/22°C 4+ S/37°C S/C Consumo AGH 2+ E. Guzmán Vázquez Banco de Sangre INCan

Identificación del Anticuerpo Pegado a la Membrana del Eritrocito Cel 1 Cel 2 Cel 3 Cel 4 Ce l 5 Cel 6 Cel 7 Cel 8 Cel 9 Cel 10 Auto S/r S/22°C S/37°C S/C Consumo AGH 2+ E. Guzmán Vázquez Banco de Sangre INCan

Conclusión Paciente que se realiza identificación de anticuerpos: Positivos: Probable crio aglutinina inespecífica Eluido: Negativo Presenta Rouleaux al observarse al extendido de sangre. Transfundir el hemocomponente poniéndolo previamente a temperatura ambiente y vigilar transfusión QFB ELizabeth Guzmán Vázquez INCan

Caso Clínico Paciente Femenino Edad 37 años Dx. Ca.CU EC I B2 +Anemia secundaria proctopatia por RT Medicamentos: Ninguno Tratamiento: Radioterapia Hb. 8.9g/dL, Ht: 30.4 Solicitan 1 CE QFB ELizabeth Guzmán Vázquez INCan

Determinación de Grupo Sanguíneo y Rastreo de Anticuerpos Anti-A Anti-B Anti-AB Auto Anti-A1 Anti-H 4+ Cel. A1 Cel. A2 Cel. B Cel. O Grupo ABO A1 sin problema Anti-D Control de Rh Sistema Rh (D) Positivo Células I II Dia Autot Interpretación Gel/Coombs ± 2+ Positivo QFB ELizabeth Guzmán Vázquez INCan

Identificación del Anticuerpo Cel 1 Cel 2 Cel 3 Cel 4 Ce l 5 Cel 6 Cel 7 Cel 8 Cel 9 Cel 10 Auto S/r S/22°C 4+ 3+ S/37°C S/C Consumo AGH 2+ E. Guzmán Vázquez Banco de Sangre INCan

Conclusión e indicación Identificación de Ac. Libres en el suero Positivos, probable especificidad Auto Anti- Lea activo a 22°C Fenotipar al Pacientes y los hemocomponentes a cruzar Cruzar hemocomponentes a Fenotipo: Negativo a Lea QFB ELizabeth Guzmán Vázquez INCan

Caso Clínico Paciente Femenino Edad 27 años Dx. Ca.CU EC IV con Anemia Medicamentos: Morfina, Paracetamol, Haloperidol, Gabapentina Hb. 5.9g/dL, Ht: 19 Solicitan 2 CE QFB ELizabeth Guzmán Vázquez INCan

Determinación de Grupo Sanguíneo y Rastreo de Anticuerpos Anti-A Anti-B Anti-AB Auto Anti-A1 Anti-H 4+ Cel. A1 Cel. A2 Cel. B Cel. O Grupo ABO 2+ A1 sin problema Anti-D Control de Rh Sistema Rh (D) 3+ Positivo Células I II Dia Autot Interpretación Gel/Coombs 3+ Positivo QFB ELizabeth Guzmán Vázquez INCan

Identificación del Anticuerpo Cel 1 Cel 2 Cel 3 Cel 4 Ce l 5 Cel 6 Cel 7 Cel 8 Cel 9 Cel 10 Auto S/r 4+ 3+ 1+ S/22°C S/37°C 2+ S/C ± Consumo AGH Gel E. Guzmán Vázquez Banco de Sangre INCan

Se solicito 2ª Muestra E. Guzmán Vázquez Banco de Sangre INCan Cel 1 Auto S/r 4+ 3+ 1+ S/22°C S/37°C 2+ S/C Consumo AGH E. Guzmán Vázquez Banco de Sangre INCan

Conclusión e indicación Identificación de Ac. Libres en el suero Positivos, probable especificidad Auto Anti-P activo a 22°C + Anti-E + Anti-K Fenotipar al Pacientes y los hemocomponentes a cruzar Cruzar hemocomponentes a Fenotipo: R1/R1, Negativo a K y P QFB ELizabeth Guzmán Vázquez INCan

Caso Clínico Pasiente Femenino 66 años Dx. Ca. de Mama Hb 14g/dL Transf previas: No Solicitan 3U de CE y 3U de PFC para cirugía QFB ELizabeth Guzmán Vázquez INCan

Grupo Sanguíneo ABO y Rh Anti-A Anti-B Anti-AB Autocontrol 4+ Neg Células A1 Células B Células O Neg 4+ Anti-D Control de Rh 4+ Neg Lect. Anti-A1 Lect. Anti-H Neg 4+ E. Guzmán Vázquez Banco de Sangre INCan

Se cruzan unidades de grupo A2 Rh Positivo Dando incompatibles 3 Unidades en Prueba Mayor 3+ y 2+ en Gel QFB ELizabeth Guzmán Vázquez INCan

Identificación de Ac. irregulares Cel. 1 Cel. 2 Cel3 Cel. 4 Cel. 5 Cel. 6 Cel. 7 Cel. 8 Cel. 9 Cel. 10 Auto S/r - S/22° S/37° S/C 3+ 2+ 4+ 1+ Cons Gel Conclusión: Ac. Irregulares fuera del S. AB0 Positivos : Probable Esp. Anti-c en Gel E. Guzmán Vázquez Banco de Sangre INCan

Proceso Se cruzan unidades a fenotipo, sin el Ag. c Entre las 4 unidades cruzadas Fenotipo CCee CCEe Mayor 1+ Neg Menor Auto Fenotipo de la Paciente: CCDee Se piensa en un Anti-E + Anti-c QFB ELizabeth Guzmán Vázquez INCan

Proceso Se informa al Médico que las unidades de Conc. Eritrocitario están disponibles Se solicita nuevas muestras Se revisa la historia clínica y tiene antecedentes Cirugía de Corazón Tranf. de 18 Unidades FINC hace 10 años QFB ELizabeth Guzmán Vázquez INCan

Proceso Se adsorbe el suero con eritrocitos Fenotipo: ccee Se corre Ac. Irregulares y se realiza Eluido con solución ácida Encontrándose los siguientes resultados QFB ELizabeth Guzmán Vázquez INCan

Identificación de Ac. Irregulares (suero adsorbido) y Eluido (Con Ac pegado) Cel. 1 Cel. 2 Cel. 3 Cel. 4 Cel. 5 Cel. 6 Cel. 7 Cel. 8 Cel. 9 Cel. 10 Auto S/r - Suero S/22° S/37° S/C 4+ 3+ Cons 2+ Eluído 1+ Cel. 1 Cel. 2 Cel3 Cel. 4 Cel. 5 Cel. 6 Cel. 7 Cel. 8 Cel. 9 Cel. 10 Auto S/r - S/22° S/37° S/C 3+ 2+ 4+ 1+ Cons Gel En suero adsorbido: Prob anti-E, Eluido Negativo E. Guzmán Vázquez Banco de Sangre INCan

¿Qué se hizo? Los resultados no fueron confiables Se procedió nuevamente a adsorber con el siguiente fenotipo Eritrocitos de fenotipo ccEE y otro con CCEe Realizando ahora la Elusión con solvente Utilizando un panel de 16 células Se realizo fenotipo a unidades incompatibles y al paciente para sistemas: Fy, Jk, K, Di y Rh-Hr QFB ELizabeth Guzmán Vázquez INCan

Proceso eliminación de un anticuerpo Cel. 1 Cel. 2 Cel3 Cel. 4 Cel. 5 Cel. 6 Cel. 7 Cel. 8 Cel. 9 Cel. 10 Cel. 11 Cel. 12 Cel. 13 Cel. 14 Cel. 15 Cel. 16 Auto Suero 1 cc EE Gel suero - 3+ 1+ 2+ Gel Eluido + Suero 2 CC Ee Gel suero E. Guzmán Vázquez Banco de Sangre INCan

Resultados Fenotipo de Eritrocitos utilizados Suero adsorbido Eluido Suero 1 Eritrocitos ccEE Anti-E + algo de Anti-c Anti-c Con doble adsorción Anti- E Suero 2 Eritrocitos CCEe Anti-E Conclusión final: Paciente A2 Pos con Mezcla de Aloac. AntiE+c E. Guzmán Vázquez Banco de Sangre INCan

Conclusión Paciente: A2 Pos Ac Irregulares libre en suero positivos: Probable Anti-E+c NOTA Se corrió en tubo la prueba de compatibilidad de la unidad con fenotipo CCee que dio incompatible en Gel, utilizando Coombs monoespecífico IgG dando compatible Suponemos que es Complemento lo que da incompatible esta unidad Se le realizo fenotipo siendo el mismo del paciente QFB ELizabeth Guzmán Vázquez INCan

Caso Clínico Femenino 29 años Dx LGC Hb 3.1g/dL Indican transfundir 2 Conc. Eritrocitarios Grupo Sanguíneo A Rh positivo sin problema QFB ELizabeth Guzmán Vázquez INCan

Problema ¿Que grupo sanguíneo es? Paciente Con 3.1 g/dL de Hb Dx Leucemia Granulocítica Crónica Pbas mayores y menores incompatibles Anti-A Anti-B Anti-AB Auto Cel A1 Cel A2 Cel B Cel O Anti-D Control Rh 4+ - QFB ELizabeth Guzmán Vázquez INCan

Prueba de compatibilidad Unidad Gel D Gel R Gel A Tubo D C. mono R 103732 2+ 4+ + 103777 103841 - E. Guzmán Vázquez Banco de Sangre INCan

¿Que se le debe hacer? Coombs Directo Eluido Rastreo de Ac. Irregulares en Eluido y Suero QFB ELizabeth Guzmán Vázquez INCan

Resultados obtenidos Coombs directo : Positivo 1:16 ¿Hay que hacer fenotipo al Paciente? QFB ELizabeth Guzmán Vázquez INCan

Rastreo de Ac Irregulares Técnica Cel1 Cel 2 Cel 3 Cel 4 Cel 5 Cel 6 Cel 7 Cel8 Cel 9 Cel 10 Auto S/r - S/22° + S/37° S/C mono 2+ 3+ Cons Gel poli 1+ E. Guzmán Vázquez Banco de Sangre INCan

Identificación de Ac Irregulares en Eluido Técnica Cel 1 Cel 2 Cel 3 Cel 4 Cel 5 Cel 6 Cel 7 Cel 8 Cel 9 Cel 10 S/r - S/22° S/37° S/C mono 2+ + 3+ Cons A/C 4+ 1+ E. Guzmán Vázquez Banco de Sangre INCan

Cel C D E c e Fya Fyb K k Jka Jkb Dia 1 + - 2 3 4 5 6 7 8 9 10 E. Guzmán Vázquez Banco de Sangre INCan

Eluido Ac. Despegado del eritrocito: Positivo Probable Auto Anti-E Ac. Libre en suero: Positivo Probable Auto Anti-E +(Anti-K, Anti-Dia,Anti-C) QFB ELizabeth Guzmán Vázquez INCan

¿Cómo lo demuestro? Fenotipar Sangre Compatible e Incompatible Para Sistema Rh-Hr Para Sistema Kell, Diego a QFB ELizabeth Guzmán Vázquez INCan

¿Qué espero? Que el Fenotipo sea Negativo en la Unidad compatible para K, Dia o C Positivo en la Unidad Incompatible para alguno de los antígenos K, Dia o C QFB ELizabeth Guzmán Vázquez INCan

Importante Cuando es una AHAI a Sistema Rh-Hr, hay que tratar de buscar a que antígeno está dirigido Hay que ver el comportamiento de las células en el panel y ver las aglutinaciones que presentan QFB ELizabeth Guzmán Vázquez INCan

¿Qué hacer? Protocolo de AHAI Dirigirlo contra Rh-Hr Realizar Adsorciones con celulas: R1/R1, R2/R2, r/r QFB ELizabeth Guzmán Vázquez INCan

Concluyendo La medicina transfusional así como, las terapias celulares, los trasplantes de órganos, empiezan a definir la compatibilidad principalmente en bases funcionales, es decir en base al resultado de una respuesta inmune Las interacciones inmunes capaces de inducir una respuesta inmune, ocurren en un contexto biológico complejo y dinámico donde la estructura no predice necesariamente la función

Concluyendo La comprensión de los mecanismos reguladores que determinan el reconocimiento apropiado de los antígenos de grupos sanguíneos en los niveles celulares y humorales del sistema inmunológico permitirá que la inmunohematología considere los aspectos funcionales además de los estructurales, en la compatibilidad transfusional

Importante No debemos olvidar el trabajar en tubo Sigue siendo una herramienta importante, para detectar mezclas Importante el control de calidad del material y reactivos De gran utilidad la Biología Molecular QFB ELizabeth Guzmán Vázquez INCan

Siempre recordar La responsabilidad de una transfusión es compartida El Médico que indica la transfusión La Enfermera que vigila el procedimiento El Banco de Sangre que realiza la liberación del hemocomponente a transfundir QFB ELizabeth Guzmán Vázquez INCan

Bibliografía Jefferies LC, Eder AF. Transfusión therapy in autoimmune hemolytic anemia.In: Mintz PD, editors. Transfusion therapy: clinical principles and practice.Bethesda, MA, USA: AABB Press, 1999 Garratti G. Pathophysiology of autoimmune hemolytic anemia. In: TheCompendium, AABB; 2001 Shlomchik MJ. Mechanisms of immune self-tolerance and how they fail inautoimmune disease. In: Silberstein LE, editors. Autoimmune sisorders of blood.Bethesda, MD, USA: AABB; 1996 http://www.bbguy.org/education/glossary/index.aspx?alphabet=P&id=190#sthash.P5iehwBh.dpuf

Bibliografía Jesus Linares.Inmunohematología y Transfusión Principios y Procedimientos. Copromit, Venezuela.1986 6. AABB Technical Manual, cH. 20. 14th ed. Bethesda, MD, USA; 2002 Sally V. Rudmann. Blood Banking and Transfusion Medicine 2° Ed. Philadelphia, Pennsylvania. 2005

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