Anticuerpos Antinucleares Sergio Cerpa-Cruz Reumatología CURSO: EL LABORATORIO Y LA REUMATOLOGIA, 26 DE MAYO 2017

DEFINICION Grupo diverso de auto-anticuerpos que reconocen macromoléculas y sus complejos Han sido detectados en sueros de pacientes con enfermedades reumáticas y NO reumáticas Nat. Rev. Rheumatol May, 2017

HISTORIA AUTOR AÑO HALLAZGO Paul Ehrlich XX Horror Autotoxicus Malcom Hargraves 1948 Fenómeno LE Haserick 1950 LE/componente Gg Friou 1958 Determinación antinuclear/fluorescencia Donato Alarcón 60´s Anti-RNP Pedro Reyes 1977 Aplicación sistemática de AAN en clínica Ignacio García de la Torre 80´s Importancia de las fuentes antigénicas Rafael Herrera, Biol Anticuer Antinu, UAZ; 1999

CICLO CELULAR

CICLO CELULAR

Nat. Rev. Rheumatol May, 2015

Antígenos y Auto anticuerpos Localización Antígeno Enfermedad Anti-ss-DNA Cromatina ss-DNA LES Anti-ds-DNA ds-DNA Anti-poliADP ribosa Poli-ADP ribosa Anti-Scl-70 DNA topo I ESP Anti-centromero Centromero CREST Anti-histona H1, H2A, H2B, H3,H4 LES/medicamentos Rafael Herrera, Biología experimental, UAZ 1999

Antígenos y Auto anticuerpos Localización Antígenos Enfermedad Anti-U1RNP Núcleo U1RNP MTCD Anti-Sm U1,U2, U4/U6 RNP LES Anti-2RNP U2RNP Overlap Anti-SS-A/Ro hY1-hY5 RNP Proteínas 52 y 60 KDa Sjögren Anti-SS-B/La RNA polimerasa III Anti-PCNA DNA polimerasa Anti-Ku Factor activación protein-cinasa DNA Rafael Herrera, Biología experimental, UAZ 1999

Antígenos y Auto anticuerpos Localización Antígenos Enfermedad Anti-U3RNP Nucleolo Fibrilarina U3RNP ESP Anti-RNA polimerasa I RNA polimerasa I Anti-PM-Scl Complejo 11 proteínas Overlap Rafael Herrera, Biología experimental, UAZ 1999

Antígenos y Auto anticuerpos Localización Antígeno Enfermedad Anti-Jo 1 Citoplasma Histidil-tRNA Sint PM/DM Anti-P ribosomal 60S-ribosomal, P0, P1, P2 LES Anti-mitocondrial Mitocondria CBP Anti-SS-A/Ro hY1-hY5 RNP, Proteínas 60 y 52 KDa Sjögren Rafael Herrera, Biología experimental, UAZ 1999

Asociación Clinica y Auto-anticuerpos en LES FRECUENCIA % ESPECIFICIDAD EN LES SUB-GRUPO CLINICO DNA-ds 60-90 ++ Nefritis DNA- ss 90 - Histonas 50-70 + H2A, H2B Medicamentos Ro (SS-A) 20-60 Lupus cutáneo subagudo, bloqueo cardiaco La (SS-B) 15-40 Sm 10-30 Nefritis? SNC RNP EMTC U1-RNP 10 P 10-15 Psicosis lúpica Ku Cardiolipina Trombosis, pérdida fetal, trombocitopenia Antinuclear antibodies, Hochberg, Rheumatology, 2015

Antígenos Extraíbles del Núcleo (ENA)

Proteínas asociadas a RNA Ribonucleoproteínas Célula ENA contiene por lo menos 2 componentes antígenicos: 1º sensible a RNasa y tripsina ---------- RNP 2º resistente a las enzimas -------------- Sm Pedro Reyes, Biol Anticuerp Antinu, 1999

ENA´s PEN 10-200 KDa Aminoacidos dicarboxilicos (glu, asp) En IFI patrón granular, depende de sustrato y de fase del ciclo celular. Pedro Reyes, Biol Anticuerp Antinu, 1999

ENA´s Antígeno Anticuerpo RNA U1,2,4,5 Topo I Histidil sintetasa tRNA Proteína 75KDa Proteínas 60 KDa, 52 KDa CENP- A,B,C D Anticuerpo Sm Scl-70 Jo-1 Mi-2 Ro/SS-A Centrómero Pedro Reyes, Biol Anticuerp Antinu, 1999

TECNICAS / AAN Inmunofluorescencia Inmunodifusión Hemaglutinación Fijación del complemento ELISA

TECNICA DE LABORATORIO Obtención del suero Diluciones 1:80, 1:160, 1:320, 1:640 Incubar diluciones en HEp-2, 30´ húmeda Lavar en PBS 10´ Incubar celulas HEp-2 con IgG polivalente, 30´ húmeda Lavar con PBS por 10´ Montar con glicerol Interpretar con microscopio de Inmunofluorescencia Rafael Herrera, Biología Exp UAZ, 1999

SUBSTRATOS TEJIDO LINEA CELULAR Ratón Riñón Hígado Carcinoma Laríngeo Cel HEp-2 ELISA Esperanza Avalos, Biolo Exp, UAZ; 1999

UTILIDAD CLINICA

Annals of Rheumatic Diseases, vol. 73, pp. 17–23, 2014

Uso Clínico AAN Nat Rev Rheumatol, May 2017

Journal of Immunology Research Volume 2014

Uso Clinico AAN Muy útil en: LES Escleroderma LES/medicamentos Hepatitis Autoinmune EMTC 95-100% 60-80% -- 100% Journal of Immunology Research Volume 2014

Uso Clínico AAN Algo Útiles en: S. Sjögren PM/DM 40-70% 30-80% Journal of Immunology Research Volume 2014

Uso Clinico AAN No es útil en: AR EM PTI Enf. Tiroidea Lupus discoide 30-50% 25% 10-30% 5-25% Solomon DH, Arthritis Care Res 2002.

Uso Clínico AAN No es util en: Infecciones Neoplasias Implantes de silicón Fibromialgia Familiares Variable 15-25% 5-25% Journal of Immunology Research Volume 2014

Uso Clínico AAN Cuando solicitar: Evaluación clínica sugiera una enfermedad autoinmune Not for “fishing expedition” a confusing case Kavanaugh A. Arch Pathol Lab Med; 2000

Uso Clínico AAN Positivos: 1:80 Con significado clínico (HEp-2) 1:320 Kavanaugh A. Arch Pathol Lab Med; 2010

Enfermedades Asociadas con Diferentes Anticuerpos DNAds RNP Sm Ro La Centrómero LES 60% 30% 15% Raro AR - EMTC 95% títulos altos ESP Títulos bajos 10-15% CREST 60-90% S. Sjögren 70% Kavanaugh A. Arch Pathol Lab Med; 2000

Enfermedades Auto inmunes asociadas a Anticuerpos Citoplasmáticos ANTIGENO CITOPLÁSMICO FRECUENCIA PM tRNA sintetasa 20-30% LES P ribosomal 5-10% GW Proteinasa-3 90% POLIARTERITIS MICROS Mieloperoxidasa 70% CIRROSIS BILIAR PRIMARIA Mitocondria 80% Kavanaugh A. Arch Pathol Lab Med; 2000

Medicamentos asociados a AAN positivos COMUNES MENOS FRECUENTES Procainamida Hasta 60 farmacos han sido implicados Hidralazina Con AAN positivos Fenotiazinas DFH INH Quinidina Anti-TNFa IECAS Koopman, Arthritis and Related Cond; 2001

PATRONES DE INMUNO-FLUORESCENCIA

PATRONES BÁSICOS Aparato Mitótico Citoplasmático Nuclear Journal of Autoimmunity, vol. 35, no. 3, pp. 276–290, 2010.

Anticuerpos Antinucleares IFI

Anticuerpos Antinucleares IFI

Anticuerpos Antinucleares IFI

Anticuerpos Antinucleares IFI

Anticuerpos Antinucleares IFI

Anticuerpos Antinucleares

Anticuerpos Antinucleares

PATRONES ESPECIFICOS

Anticuerpos contra proteínas de la cromatina

Sensibilidad y Especificidad de Pruebas para Auto-anticuerpos METODO ANTÍGENO SENSIBILIDAD ESPECIFICIDAD APLICACIÓN INMUNOFLUORESCENCIA Crithidia +++ ++++ DNA ELISA DNA, Cardiolipinas, RIA DNA (Farr) Hochberg, Rheumatology, 2015

Anti DNA

Anti-Topoisomerasa I IFI

Anti-Centrómero

Anticuerpos contra proteínas no-cromatina

Anti U1RNP Sm

Anticuerpos contra proteínas del nucleolo

Anti-RNA polimerasa I

Anticuerpos contra antígenos de la membrana nuclear

Anti Lamina

Patrones Citoplásmicos

Cirrosis biliar primaria Citoplasma Anti mitocondria Anti P ribosomal Cirrosis biliar primaria Neurolupus

CITOPLASMA Anti Lisosomal Anti- Aparato de Golgi LES S. Sjögren, LES

ABORDAJE DIAGNOSTICO

Antinuclear Antibodies

Antinuclear Antibodies

Antinuclear Antibodies

Antinuclear Antibodies

Antinuclear Antibodies

Antinuclear Antibodies

Antinuclear Antibodies

CONCLUSIONES No se deben interpretar en el contexto de “positivos” o “negativos” El en diagnóstico se deben utilizar solo HEp-2

CONCLUSIONES LES El mejor examen inicial ante sospecha clínica importante No se deben utilizar para descartar enfermedades reumáticas

CONCLUSIONES Sí son positivos, solicitar los anticuerpos específicos No solicitar ds-DNA o ENA´s, antes de los AAN positivos El valor de los AAN seriados, se desconoce.