El urocultivo: cultivo de orina Dr. Antonio D. Robles G. BIOQUIMICA - F.C.Q. – UNA

Es una prueba para el diagnóstico de infecciones del tracto urinario (ITU), que identifica la presencia de bacterias Tener en cuenta que no siempre la presencia de bacterias indica una infección activa. Algunas de ellas pueden colonizar la uretra y la vejiga, sin necesariamente causar enfermedad La orina normalmente es estéril (sin microbios presentes) Fácilmente contaminado con microbiota del perineo, uretra, vagina * la orina es un buen medio de crecimiento bacteriano * toma de muestra inadecuada (falta de higiene) * Transporte inadecuado al laboratorio (no refrigerado) Hay que diferenciar colonización de infección

Ventajas de solicitar el urocultivo Si después de la evaluación clínica, el médico no está seguro para tratar una ITU Cuando el primer curso de antibióticos no consigue eliminar la infección Cuando existe sospecha de pielonefritis En mujeres embarazadas En casos de infecciones urinarias a repetición En casos de fiebre sin origen definidos Antes de procedimientos urológicos

RECOLECCION DE LA MUESTRA Limpiar la región genital, sobre todo alrededor del meato urinario con gasas estériles embebidas en agua y jabón y luego secarla El recipiente utilizado para recolectar la orina debe ser estéril En la hora de orinar evitar el contacto con la piel circundante, como los labios mayores (mujeres) o el prepucio (varones) El primer chorro de la orina es siempre despreciado (contiene impurezas que quedan en la uretra) Tomar el chorro medio de la orina (muestra ideal) Llevar la muestra inmediatamente al laboratorio, o refrigerarlo si el tiempo de recolección y entrega es muy largo

PASO CRITICO

CRITERIOS DE RECHAZO Recolectar la orina sin previa higiene genital Recolectar de la bolsa colectora en pacientes sondados Sembrar de pool de orina de 24 h Cultivar punta de sonda vesical o tomar muestras de orina con sondas de más de 72 h de colocación Colectar la orina del pañal En pediatría: en bolsas colectoras mas de 30 min Muestras colectadas en frascos sin esterilizar Frascos en mal estado, sucio, volcado, mal tapado, o existen indicios de contaminación Falta de identificación de la muestra Salvo situaciones especiales, el volumen mínimo aceptables es de 10 – 15 mL

TOMA DE MUESTRA EN MUJERES Lavado exhaustivo de la zona genital con agua y jabón, de adelante a atrás Colocación de tapón vaginal (si hay flujo) Descartar el primer chorro Recoger el chorro medio de la micción en frasco estéril

TOMA DE MUESTRA EN VARONES Lavado de la zona balano-prepucial con prepucio retraído Orinar el primer chorro (10 mL) en frasco estéril para caso de estudio de uretritis. De no ser así descartar Recoger el chorro medio en frasco estéril Chorro medio: no interrumpir y re-iniciar la micción de la orina, sino más bien colocar el frasco estéril en el camino del chorro de la orina

TOMA DE MUESTRA POR PUNCION SUPRAPUBICA Evita la contaminación asociada a microbiota uretral En niños y casos de difícil interpretación de resultados Cualquier aislamiento es significativo PASOS Asegurarse que la vejiga esté llena Desinfectar la zona de piel Punzar con jeringa Colocar la orina en frasco estéril (no remitir la orina en la jeringa)

CULTIVO Se realiza mediante los medios de cultivos que permitan el aislamiento y el recuento cuantitativo de los uropatógenos más conocidos Se sembrará cuantitativamente, con asa calibrada de 10 uL Se incubará a 35-37°C en aerobiosis durante 24-48 Interpretación en placa: 1 colonia = 100 ufc/mL

TIPOS DE ESTRIAS

RESULTADOS Recuento de colonias Se consideran NEGATIVO cuando, después de 48-72 h de incubación en medio de cultivo, no hay crecimiento de colonias de bacterias Se considera POSITIVO cuando, después de éste tiempo, es posible identificar más de 100.000 colonias de bacterias (llamadas ufc). Criterio de Kass El problema está: Cuando el recuento de colonias es inferior a 100.000 ufc (contaminación de la muestra) Recuentos entre 10.000 y 100.000 ufc, cuando existe piuria en el examen del sedimento y síntomas clínicos sugestivos de ITU Recuentos por debajo de 10.000 ufc se consideran contaminantes por bacterias de la región perineal ( Observación )

OBSERVACION Si el paciente está con antibióticos, que pueden inhibir el crecimiento bacteriano, e incluso en resultados con menos de 100.000 ufc debe ser valorizado En los hombres, el riesgo de contaminación es menor, por tanto, valores mayores a 10.000 ufc deben se valoradas Tener en cuenta aún cuando los recuentos de colonias sean menor a 100.000 ufc en aislamiento bacteriano de la familia de… Pseudomonas Klebsiella Enterobacter Serratia Moraxella

IDENTIFICACIÓN BIOQUÍMICA Se realiza la inoculación del gérmen aislado (0,5 McF) en los diferentes medios de cultivo sólidos y líquidos para la observación de las reacciones bioquímicas que ocurren T.S.I. (Tri sugar iron): para la diferenciación de ETB según sean fermentadores o no de lactosa, sacarosa y glucosa, productores o no de H2S y gas CITRATO: diferencia grupos bacterianos que son capaces de crecer con citrato como única fuente de carbono UREASA: determina la capacidad de una bacteria de usar urea desdoblándola en amoniaco por acción de la ureasa S.I.M.: para la verificación de movilidad, producción de indol y de H2S L.I.A., FENILALANINA, VP-RM

ANTIBIOGRAMA

METODO DE KIRBY-BAUER Requiere estandarización en el laboratorio Requiere personal capacitado y actualizado Antibióticos a testar: Ampicilina Cefalosporinas de 1ª generación Amoxicilina /ac. clavulámico o Ampicilina/sulbactam Cotrimoxazol Cefixima Nitrofurantoína Gentamicina Norfloxacina (adultos)

INFORME DE UROCULTIVO Datos de identificación del paciente: nombre completo y apellido, edad, sexo, código de laboratorio. Médico tratante o servicio de remisión RESULTADOS Sedimento urinario: leucocitos, hematíes, células epiteliales (400x); cilindros, cristales (100x) que se informan por campo Tinción de Gram: se observa la presencia de bacterias (40-70% de sensibilidad y 85-95% de especificidad) Recuento de Colonias: mediante el método del ansa calibrada y se informa en ufc/mL Aislamiento: identificación del agente etiológico Antibiograma: método in vitro que determina la susceptibilidad de las bacterias a una variedad de agentes antimicrobianos, bajo condiciones de laboratorio específicas y estandarizadas

PROCESAMIENTO

Muchas gracias