Estructura y función -Comportamiento en solución -Secuenciación de proteínas Proteínas
Solubilidad de las proteínas pH Constante dieléctrica del solvente Fuerza iónica Temperatura
Efecto del pH en la solubilidad de las proteínas
Constantes dieléctricas y momento dipolar de algunos solventes comunes
Solubilidad de la carboxi- Hb a diferentes fuerza iónicas Salting in Salting out Efecto de la fuerza iónica en la solubilidad de las proteínas
6 Desnaturación de proteínas Urea
Frederick Sanger fue el primero En 1953, secuenció las dos cadenas de la insulina Secuenciación de proteínas
1.Si hay más de una cadena, se deben separar 2.Romper los enlaces disúlfuro 3.Determinar la composición aminoacídica 4.Determinar el amino y carboxilo terminal 5.Romper la cadena en fragmentos chicos 6.Secuenciar Pasos a seguir para la secuenciación de una proteína
Hidrólisis ácida (6M HCl) Cromatografía Determinación composición aminoacídica
Uso de enzimas proteolíticas Bromuro de cianógeno Determinación de la secuencia aminoacídica Obtención de péptidos pequeños
Proteasas
Cyanogen Bromide Cleavage at Methionine Residues
Secuenciación de proteínas
Determinación de la sequencia primaria de una proteína
Estudio de proteínas utilizando la espectrometría de masas
Estudio de proteínas por espectrometría de masa/masa
Peptide Fragmentation Peptides tend to fragment along the backbone. Fragments can also loose neutral chemical groups like NH 3 and H 2 O. H...-HN-CH-CO... NH-CH-CO-NH-CH-CO-…OH R i-1 RiRi R i+1 H+H+ Prefix FragmentSuffix Fragment Collision Induced Dissociation
N- and C-terminal Peptides N-terminal peptides C-terminal peptides
Terminal peptides and ion types Peptide Mass (D) = 415 Peptide Mass (D) – 18 = 397 without
Theoretical Spectrum
Theoretical Spectrum (cont’d)