La descarga está en progreso. Por favor, espere

La descarga está en progreso. Por favor, espere

Blgo. Enrique Mamani Zapana Laboratorio de Metaxénicas Virales INSTITUTO NACIONAL DE SALUD VIGILANCIA DEL VIRUS DENGUE EN EL PERÚ.

Presentaciones similares


Presentación del tema: "Blgo. Enrique Mamani Zapana Laboratorio de Metaxénicas Virales INSTITUTO NACIONAL DE SALUD VIGILANCIA DEL VIRUS DENGUE EN EL PERÚ."— Transcripción de la presentación:

1 Blgo. Enrique Mamani Zapana Laboratorio de Metaxénicas Virales INSTITUTO NACIONAL DE SALUD VIGILANCIA DEL VIRUS DENGUE EN EL PERÚ

2 EL VIRUS n Familia: Flaviviridae. n Causa el Dengue y Dengue Hemorrágico. n Transmitido por mosquitos. n Es un virus ARN (Ácido Ribonucleico de una sola hebra). n Tiene 4 serotipos: (DENV-1, 2, 3 y 4).

3 Glicoproteína PrM : Glicoproteína Precursor de M Protege a la proteína E C y RNA:11KdNucleocapside Epitopes céls T Principal Proteína Estructural (53-54kd) Glicoproteína E: Principal Proteína Estructural (53-54kd) Glicoproteína VIRUS DENGUE M: Induce Acs. Nt y protección

4 Aedes aegypti

5

6

7

8

9 Diagnóstico Dengue Diagnóstico DengueIgMIgG>1280Seroconversion AislamientoViral DetecciónAntígeno Detección Genoma CLINICA Situación Epidemiológica

10 DINAMICA DE RESPUESTA INMUNE

11 ASPECTOS IMPORTANTES EN EL DIGNOSTICO n Ficha Clínica n Tipo de muestra n Obtención de muestras n Transporte y conservación de M. n Tipo de prueba

12 CRITERIOS PARA LA OBTENCION, CONSERVACION Y TRANSPORTE DE MUESTRAS DE ACUERDO AL TIPO DE PRUEBA M é todo de Diagn ó stico Obtenci ó n de muestras Muestra Biol ó gica Cantidad Conservaci ó n y Transporte Tiempo de resultado en el Sistema NETLAB Anticuerpos: IgM, IgG Sangre.- A pacientes con tiempo de enfermedad igual o mayor a 6 d í as. Suero2 ml Est é ril. Enviar en cadena de fr í o 2 – 8 °C 3 d í as. Detecci ó n del ant í geno Ag NS1, detecci ó n de ARN, aislamiento viral y tipificaci ó n de los serotipos. Sangre.- A pacientes con un tiempo de enfermedad igual o menor a 5 d í as. (per í odo vir é mico) Suero2 ml. Est é ril. Enviar en cadena de fr í o 2 – 8 °C 6 d í as para PCR y hasta 30 d í as para aislamiento viral. Tejido.- Realizar la necropsia dentro las 24 horas de fallecimiento (Tejido bazo, h í gado y/o ri ñó n). Tejido± 2 cm 3 Est é ril. Enviar en preservante y en cadena de fr í o 2 – 8 °C 6 d í as para PCR y hasta 30 d í as para aislamiento viral. Histopatolog í a e inmunohistoqu í mi ca. Tejido.- Realizar la necropsia dentro de las 24 horas de fallecimiento (Tejido bazo, h í gado y/o ri ñó n). Tejido± 2cm 3 Enviar en formol al 10% tamponado, en un volumen 10 veces del volumen de la muestra, a temperatura ambiente. 5 d í as.

13 KIT ELISA DE CAPTURA IgM DENGUE IMPLEMENTACION: TRANSFERENCIA: 2010 lotes pilotos SENSIBILIDAD %ESPECIFICIDAD%PRUEBA DIAGNOSTICA TARIKI IGM DENGUE – INS Total PRUEBA DE REFERENCIA Total 154 TARIKI IGM DENGUE INS

14 ELISA CAPTURA IgM o IgG DENGUE ELISA CAPTURA IgM: Infección reciente. ELISA CAPTURA IgG: Infección secundaria ELISA INDIRECTA IgG: Infección pasada

15 IgM 6-10 días % Sensibilidad 98% Especificidad Días Fiebre % IgM Días Fiebre % IgM Guzmán et al., 97 Costa Rica, Panamá Nicaragua

16 PRUEBAS RAPIDAS IgM, IgG Y ANTIGENO.

17 PRUEBAS RAPIDAS ANTIGENO NS1, IgM, IgG Evaluación de pruebas rápidas de detección NS1Ag, IgM e IgG Prueba diagnóstica AgNS1 AgNS1 + IgM/IgG Estándar Diagnostic, INC® Sensibilidad40.6% ( ) 73.4% ( ) Especificidad95.1% ( ) 91.5% ( ) Pan Bio® Sensibilidad42.1% ( ) 74.2% ( ) Especificidad95.1% ( ) 79.2% ( )

18 PRUEBA ELISA ANTIGENO NS1 Detecta antígeno NS1 Suero de 1-5 días Diagnostico temprano de dengue. Evaluation of a commercial dengue NS1 antigen-capture ELISA for laboratory diagnosis of acute dengue virus infection V. Kumarasamy a, A.H. Abdul Wahab a, S.K. Chua b, Z. Hassan a, Y.K. Chem a, M. Mohamad a and K.B. Chua a b a Journal of Virological Methods Journal of Virological Methods Volume 140, Issues 1-2, March 2007, Pages 75-79olume 140, Issues 1-2 Sensibilidad 93% Especificidad 100% Sensibilidad(97.3%) en inf. aguda primaria Sensibilidad (70.0%) en inf. aguda segundaria VPP 100% VPN 97.3%.

19 Aislamiento del virus Dengue Inmunofluorescencia IndirectaInmunofluorescencia Indirecta Acs. Monoclonales específicos tipo

20 n Células cultivo C6-36 LINEA C6-36 NORMAL LINEA C6-36 CON EFECTO CITOPATICO

21 Diagnóstico Inmunohistoquímico en muestras fallecidos FHD/SCD Células Kupffer Necrosis Focal

22 RT- PCR Diagnóstico Vigilancia Epidemiología Molecular Estudios etiopatogenia Vacunas

23 RT PCR Dengue Multiplex RT-PCR EN DENGUE Sensibilidad: 98% Especificidad: 98%

24 Detecta Cuantifica carga viral PCR EN TIEMPO REAL

25

26 ANALISIS GENETICO DEL DENV-1.- Las secuencias que obtuvimos se agrupan con el genotipo América-África, siendo el primer serotipo que reingreso al Perú en 1,990 Se mantiene la circulación del mismo genotipo desde su ingreso en el año 1,990. Aunque se han establecidos clados distintos que tienen correlación con el tiempo y espacio, se puede observar para el 2,007 la circulación de dos clados dispersos que abarca la zona norte de Perú y la zona central del país, respectivamente.

27 Árbol filogenético de secuencias para DENV-1 obtenidos mediante NJ con 500 repeticiones de la región E/NS1 considerando las secuencias reportadas en el GEN BANK y las obtenidas en el presente estudio.

28 ANALISIS GENETICO DEL DENV-2.- Las secuencias que obtuvimos hasta el presente corresponden a los genotipos América que ingresó a Perú en 1,995 y al genotipo América-Asia que ingreso en el 2,001. Se evidencia la relación del genotipo América Asia con la presencia de dengue hemorrágico.

29 Arbol filogenético de secuencias DEN2 de la región E/NS1 obtenidas mediante NJ, modelo Tamura Nei con 500 repeticiones, considerando secuencias previamente reportadas en el GEN BANK y las obtenidas en el presente estudio.

30 ANALISIS GENETICO DENV-3.- Se generó un árbol filogenético considerando las secuencias obtenidas en el presente estudio y algunas secuencias reportadas por otros países. Las secuencias que obtuvimos corresponden al DENV-3 genotipo INDIA. Se observa que desde su ingreso a Perú, este genotipo presenta alta dispersión, formando clados que se agrupan según los años y área geográfica, respectivamente. La presencia de este genotipo ha sido permanente a la fecha y esta relacionado con casos de dengue grave.

31 Árbol filogenético de secuencias DENV-3 de la región E/NS1 obtenidas mediante NJ, modelo Tamura - Nei con 500 repeticiones, considerando secuencias previamente reportadas en el GEN BANK y las obtenidas en el presente estudio.

32 ANALISIS GENETICO DENV-4.- Para el análisis también se consideraron secuencias reportadas al GENBANK por diferentes países a fin de establecer la distribución filogenética descritos por Rico-Hesse et. al. También se generó un árbol filogenético considerando las secuencias obtenidas en el presente estudio y algunas secuencias reportadas por otros países. Las secuencias que obtuvimos corresponden al DENV-4 genotipo INDONESIA.

33 Árbol filogenético de secuencias DENV4 de la región E/NS1 obtenidas mediante NJ, modelo Tamura - Nei con 500 repeticiones, considerando secuencias previamente reportadas en el GEN BANK y las obtenidas en el presente estudio.

34

35 CIRCULACION DE UN NUEVO LINAJE DEL VIRUS DENGUE 2 GENOTIPO AMERICA / ASIA EN LA REGION AMAZONICA DE PERÚ, 2010 Mamani E.1, Alvarez C. 2, García M. 1, Figueroa D.1, Gatty M.2, Guio H.3, Merino S.1, Valencia P. Calampa C. 2, Franco L 4, Cabezas C.1 1 Laboratorio de Arbovirus – Instituto Nacional de Salud, Perú 2 Dirección Regional de Salud Loreto. 3 Laboratorio de Biología Molecular y Biotecnología – Instituto Nacional de Salud 4 Instituto Carlos III – España.

36

37 Árbol filogenético de secuencias genéticas de la región E/NS1 del DENV-2 La secuencias corresponden a los años: , 2001, y Mamani E et al. Circulación de un nuevo linaje del virus dengue 2 genotipo América/Asia en la Región Amazónica del Perú, 2010

38 Distribución del Serotipos de dengue Tipo 2 Perú 2011* SE 11 Fuente: INS hasta el 17/03/01

39 a. CASO CONFIRMADO Resultado Positivo por RT-PCR. Resultado Positivo de aislamiento viral. Resultado Positivo a antígeno NS1. Resultado Positivo de IgM en una sola muestra Evidencia de seroconversión en IgG en muestras pareadas. INTERPRETACION DE RESULTADOS DE LABORATORIO PARA EL DIAGNOSTICO DE DENGUE

40 DIRECTIVA SANITARIA PARA EL DIAGNOSTICO DE LABORATORIO DE DENGUE n La implementación de la nueva directiva de diagnóstico de laboratorio. - Vigilancia rutinaria - Vigilancia rutinaria -Vigilancia centinela en establecimientos -Vigilancia centinela en establecimientos -Detección temprana de brotes (30 a 50 muestras) -Detección temprana de brotes (30 a 50 muestras)

41 Ingresar el nombre de usuario y contraseña. y hacer click en login Acceso a

42

43 Laboratorio de Microbiología y Biomedicina Chorrillos, Lima

44

45 CONTRIBUCION DEL LABORATORIO EN EL DIAGNOSTICO DE DENGUE Manejo clínico del paciente (Hto. Plaq. y otros).Manejo clínico del paciente (Hto. Plaq. y otros). Confirmación de casos de dengue (serológicas virológicas y moleculares)Confirmación de casos de dengue (serológicas virológicas y moleculares) Demostrar y predecir severidad (carga viral en estudio)Demostrar y predecir severidad (carga viral en estudio) Detección temprana circulación virus dengue en áreas nuevas (vigilancia basada en Lab.)Detección temprana circulación virus dengue en áreas nuevas (vigilancia basada en Lab.) Detección temprana de nuevos serotipos y subtipos (vigilancia basada en Lab.)Detección temprana de nuevos serotipos y subtipos (vigilancia basada en Lab.)

46 CONTRIBUCION DEL LABORATORIO EN EL DIAGNOSTICO DE DENGUE Estimado de incidencia después de epidemiasEstimado de incidencia después de epidemias Confirmación casos y su caracterización (severos)Confirmación casos y su caracterización (severos) Caracterización cepas dengue (secuenciamiento)Caracterización cepas dengue (secuenciamiento) Diseño de nuevas estrategias o herramientas de diagnóstico.Diseño de nuevas estrategias o herramientas de diagnóstico. Diferenciar enfermedades similares (diagnóstico diferencial)Diferenciar enfermedades similares (diagnóstico diferencial)

47 GRACIAS


Descargar ppt "Blgo. Enrique Mamani Zapana Laboratorio de Metaxénicas Virales INSTITUTO NACIONAL DE SALUD VIGILANCIA DEL VIRUS DENGUE EN EL PERÚ."

Presentaciones similares


Anuncios Google