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UTILIZACIÓN DE ANTICUERPOS EN BIOMEDICINA Métodos y Técnicas de Estudio en Biología Celular UTILIZACIÓN DE ANTICUERPOS EN BIOMEDICINA.

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1 UTILIZACIÓN DE ANTICUERPOS EN BIOMEDICINA Métodos y Técnicas de Estudio en Biología Celular UTILIZACIÓN DE ANTICUERPOS EN BIOMEDICINA

2 Inmunoblotting (western blot), Dot/slot blot Inmunocitoquímica Inmunofluorescencia Inmunoprecipitación ELISA/EIA/RIA Cromatografía de inmunoafinidad Microscopia electrónica (morfología) UTILIZACIÓN DE ANTICUERPOS EN BIOMEDICINA

3 Estructura de los anticuerpos

4 Tipos de Anticuerpos

5 Selección clonal: Delección

6 Selección clonal: expansión

7 Conceptos Inmunógeno, antígeno. Carrier: BSA, KLH. Unión covalente (cross-linking): MBS, glutaraldehido, DSS. Péptidos inmunogénicos Proteínas nativas y desnaruralizadas. Otras moléculas Adjuvante de Freund: completo e incompleto. Primera inmunización y recuerdos. Conceptos

8 Anticuerpos policlonales 1.Inmunización del conejo 2.Recuerdos 3.Extracción de sangre 4.Preparación del suero 5.Purificación del anticuerpo (métodos opcionales) 6.Caracterización del antisuero

9 Anticuerpos policlonales

10 Anticuerpos monoclonales 1.Inmunización del ratón 2.Extracción del bazo 3.Preparación de hibridomas (mieloma+B) 4.Selección de los clones 5.Producción y uso de anticuerpos

11 Elección del tipo de anticuerpo

12 Marcaje de Anticuerpos

13 Marcaje de Anticuerpos para uso en Células

14 Immunoblotting (western blot)

15 Inmunocitoquímica Las flechas indican la presencia de neuronas con hormona liberadora de la hormona del crecimiento en el Núcleo Arcuato (cerebro) de rata de 4 meses.

16 Inmunocitoquímica Localización de la calbinding (calbindina) en cerebelo de rata

17 Microscopia (confocal e inmunofluorescencia)

18 Inmunoprecipitación

19

20 ELISA

21

22 Cromatografía de inmunoafinidad

23 Oro Coloidal Internalización de transferrina marcada con oro coloidal (6,6 nm) en células endoteliales. La barra corresponde a 0,25 M.

24 Oro Coloidal Internalización de transferrina marcada con oro coloidal (6,6 nm). G: aparato de Golgi; Lu: lumen vascularLa barra corresponde a 0,25 M.


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