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MARIA JOSE JARAMILLO ESTRELLA 8 DE SEPTIEMBRE DEL 2011.

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1 MARIA JOSE JARAMILLO ESTRELLA 8 DE SEPTIEMBRE DEL 2011

2 La cuantificación de los subgrupos de células utiliza 3 factores: 1. Existencia de una molécula en la superficie celular específica de subgrupo (p.ej., CD4 para los linfocitos T) 2. Un anticuerpo monoclonal específico de la molécula 3. Sustancias químicas llamadas fluorocromos que producen fluorescencia a una longitud de onda concreta cuando se exponen a una fuente de luz excitadora: fluoresceína (verde), ficoeritrina (naranja) y aloficocianina (rojo)

3 Citometría de Flujo

4

5 Separación de los leucocitos de la sangre utilizando gradiente de densidad. La purificación puede obtenerse utilizando anticuerpos monoclonales específicos marcados con bolas magnéticas

6 Análisis de la proliferación para determinar la respuesta del linfocito T al antígeno específico

7 ACTIVACION DE LOS LINFOCITOS T Y MEDIR SU RESPUESTA (INVESTIGACIÓN Y EXPLORACION DIAGNOSTICA EN PACIENTES CON INMUNODEFICIENCIAS) METODOS DE ACTIVACION ACTIVADOR POLICLONAL O MITÓGENO LA LECTINA FITOHEMAGLUTININA (PHA) ENLACES CRUZADOS CON GLUCOPROTEINAS DE SUPERFICIE DE LINFOCITOS T. ANTI-CD3 MONOCLONAL ENLACES CRUZADOS CON EL COMPLEJO TCR SUPERANTÍGENOS ENTEROTOXINA B ESTAFILOCÓCICA SUSTANCIAS MICROBIANAS SE UNEN A LOS DOMINIOS DE LAS CADENAS V β DEL TCR PROLIFERACION DE LINFOCITOS T Y PRODUCCION DE CITOCINAS EFECTORAS ACTIVACION Y PROLOFERACION DE TODOS LOS LINFOCITOS T FRENTE A ESTIMULOS ESPECIFICOS

8 La determinación de la respuesta del linfocito T se lleva a cabo de diferentes modos, uno de los más sencillos es la citometría de flujo pero con frecuencia se requiere de información mas detallada sobre las citocinas, lo que permite clasificar las respuestas como T H 1, T H 2, T H 17 o Treg. Las citocinas que se producen pueden determinarse: 1. ELISA: inmunoanálisis enzimático sobre fase sólida 2. Citometría de Flujo: para determinarlos dentro de la célula 3. PCR (reacción en cadena de la polimerasa: para los transcritos de ARNm específicos de las citocinas.. 4.ADN recombinante para sintetizar molécula del HLA solubles

9 ADN recombinante para sintetizar molécula del HLA solubles. Las moléculas de HLA se ensamblan en los complejos de 4 componentes péptido-HLA (tetrámero de HLA) lo que aumenta la avidez de interacción. El tetrámero se acopla a un fluorocromo de modo que los linfocitos T individuales son capaces de unirse al epítopo específico. Revolucionado la capacidad de determinar respuestas inmunitarias por ejemplo: al virus de Epstein-Barr (respuestas antivíricas)

10 Examinar la lisis específica por los CTL y la destrucción de los linfocitos asesinos naturales. El análisis se basa en la incubación de las células efectoras y las células diana y la determinación de afección de éstas. En la evaluación de la actividad de CTL debe usarse la célula diana emparejada con la molécula del MCH apropiado. Las células diana se marcan mediante incubación con cromato sódico radiactivo. Si las células diana son dañadas por los efectores se libera el cromo del citoplasma. Los niveles de radiactividad son proporcionales a la lisis de la célula diana.

11 Burnet y Medewar, galardonados con el premio Nobel de Medicina en 1960, estudiaron el rechazo de injertos cutáneos alogénicos (no propios), en los que observaron una asociación linfocítica masiva. La importancia radica en que se puede obtener tolerancia a antígenos extraños, aunque la vía de inyección neonatal no se use en el transplante de órganos.

12 MEDICIONENSAYOEJEMPLOS ESPECIFICOS Concentración de Ig NefelometríaIgG, IgM, IgA e IgE Gammapatías monoclonales Inmunoelectroforesis, inmunofijación Componente M Complemento: Componentes individuales Actividad hemolítica total ELISA Prueba de fijación de complemento C1, C2, C3, C4 CH50 Anticuerpos de agentes infecciosos: VIH Streptococo Treponema pallidum ELISA, western blot Aglutinación Anti-gp24, gp41, gp120 Polisacarido anticapsular VDRL Autoinmunidad: Anticuerpos anti-IgHemaglutinacion pasivaFactor reumatoide Anticuerpos antinuclearesInmunofluorescenciaANA, y anti DNA`s Marcadores de superficie celular Linfocitos normales Tumores celulares Citometría de flujo CD4, CD8, CD19 CD10 o células leucémicas


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