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ACTUALIZACION EN REPRODUCCION CANINA Autor: D. Joaquin Cerdeira.

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1 ACTUALIZACION EN REPRODUCCION CANINA Autor: D. Joaquin Cerdeira

2 Ciclo reproductivo Algunas características reproductivas de las perras deben ser tenidas en consideración puesto que condicionan la efectividad reproductiva en esta especie Algunas características reproductivas de las perras deben ser tenidas en consideración puesto que condicionan la efectividad reproductiva en esta especie Ciclo sexual es muy largo, con una fase folicular larga, una fase luteal muy larga, una gestación corta de tan sólo 58 a 62 días, y un anestro muy largo Ciclo sexual es muy largo, con una fase folicular larga, una fase luteal muy larga, una gestación corta de tan sólo 58 a 62 días, y un anestro muy largo Sólo un 60 % de las hembras cumplen la máxima de que el periodo fértil oscila entre el día 11 y el día 14 desde que empiezan a manchar, así muchas supuestas hembras infértiles no lo son, sino que se ha calculado mal el momento de la cubrición. Sólo un 60 % de las hembras cumplen la máxima de que el periodo fértil oscila entre el día 11 y el día 14 desde que empiezan a manchar, así muchas supuestas hembras infértiles no lo son, sino que se ha calculado mal el momento de la cubrición.

3 El determinar el momento de la ovulación nos permite mejorar el manejo de hembras infértiles mejorar el manejo de hembras infértiles mejorar el rendimiento de machos subfértiles mejorar el rendimiento de machos subfértiles obviar el desinterés de ciertas hembras por la monta obviar el desinterés de ciertas hembras por la monta predecir con mayor rigor las fechas del parto predecir con mayor rigor las fechas del parto aumentar la eficacia de las montas a la hora de realizar viajes o realizar inseminaciones. aumentar la eficacia de las montas a la hora de realizar viajes o realizar inseminaciones.

4 aceptación de la hembra por el macho - Ventajas de este método son su coste económico nulo y lo natural de esta acción - Inconveniente principal encontramos la correlación muy baja que hay entre el pico de LH ( hormona que va a desencadenar la ovulación ) y el comportamiento de la hembra, además la no aceptación de la monta puede estar relacionada con factores individuales de dominancia, mala sociabilizacion, excesiva sumisión, cabalgadura dolorosa, etc.

5 Frotis Vaginales Frotis vaginales seriados, para ello utilizaremos un hisopo estéril humedecido en solución salina y lo introduciremos a lo largo del borde superior de los labios vulvares, evitando la fosa del clítoris, para después desplazar el hisopo hacia delante y realizar varias rotaciones para arrastrar las células, después realizaremos la extensión del hisopo sobre un portaobjetos, y utilizaremos distintas tinciones para visualizar mejor al microscopio las distintas poblaciones celulares que predominan según la fase del ciclo estral en que nos encontremos. Las citologías vaginales nos permiten valorar los cambios en la mucosa vaginal debidos a las variaciones hormonales que se dan durante el celo. Frotis vaginales seriados, para ello utilizaremos un hisopo estéril humedecido en solución salina y lo introduciremos a lo largo del borde superior de los labios vulvares, evitando la fosa del clítoris, para después desplazar el hisopo hacia delante y realizar varias rotaciones para arrastrar las células, después realizaremos la extensión del hisopo sobre un portaobjetos, y utilizaremos distintas tinciones para visualizar mejor al microscopio las distintas poblaciones celulares que predominan según la fase del ciclo estral en que nos encontremos. Las citologías vaginales nos permiten valorar los cambios en la mucosa vaginal debidos a las variaciones hormonales que se dan durante el celo.

6 Frotis Vaginales Proestro: Esta fase comienza con el primer sangrado vaginal, apareciendo edema y descarga vulvar sanguinolenta, a nivel del ovario en esta fase se produce el crecimiento folicular rápido, en la mucosa vaginal hay hasta 12 capas de células, con predominio de células de tipo intermedio y superficial, además encontramos escasos leucocitos y abundantes glóbulos rojos. Esta fase tiene una duración media de unos nueve días. Proestro: Esta fase comienza con el primer sangrado vaginal, apareciendo edema y descarga vulvar sanguinolenta, a nivel del ovario en esta fase se produce el crecimiento folicular rápido, en la mucosa vaginal hay hasta 12 capas de células, con predominio de células de tipo intermedio y superficial, además encontramos escasos leucocitos y abundantes glóbulos rojos. Esta fase tiene una duración media de unos nueve días.

7 Frotis Vaginales Proestro Proestro

8 Frotis Vaginales Estro: Encontramos entre 12 y 20 capas de células, con predominio de células superficiales planas eosinofilicas y cornificadas sin núcleo hasta representar un 80% de la población celular del frotis, además encontramos un descenso hormonal de los estrógenos para caer a niveles básales al final del estro. Durante esta fase la hembra presenta un comportamiento de búsqueda y aceptación del macho, a nivel vulvar encontramos menor descarga y menos sanguinolenta, y a nivel ovárico se produce la luteinizacion, ovulación y formación de cuerpos lúteos, es por tanto en esta fase cuando debe producirse la monta o inseminación. La duración de esta fase del ciclo viene a ser de unos siete días, aunque en algunos casos se puede prolongar hasta 20 días incluso. Estro: Encontramos entre 12 y 20 capas de células, con predominio de células superficiales planas eosinofilicas y cornificadas sin núcleo hasta representar un 80% de la población celular del frotis, además encontramos un descenso hormonal de los estrógenos para caer a niveles básales al final del estro. Durante esta fase la hembra presenta un comportamiento de búsqueda y aceptación del macho, a nivel vulvar encontramos menor descarga y menos sanguinolenta, y a nivel ovárico se produce la luteinizacion, ovulación y formación de cuerpos lúteos, es por tanto en esta fase cuando debe producirse la monta o inseminación. La duración de esta fase del ciclo viene a ser de unos siete días, aunque en algunos casos se puede prolongar hasta 20 días incluso.

9 Frotis Vaginales Estro Estro

10 Frotis Vaginales Diestro: En esta fase encontramos una ausencia brusca de glóbulos rojos y una aparición súbita de glóbulos blancos, además de células redondeadas de gran núcleo junto a células intermedias. En esta etapa la hormona predominante es la progesterona que comenzó a elevarse justo antes de la ovulación, y que es la causante entre otras cosas de que la vulva regrese al tamaño casi normal, y también produce que la hembra deje de aceptar al macho. Esta fase dura 58 días en las hembras preñadas y hasta 100 días en las no preñadas o con seudogestación. Diestro: En esta fase encontramos una ausencia brusca de glóbulos rojos y una aparición súbita de glóbulos blancos, además de células redondeadas de gran núcleo junto a células intermedias. En esta etapa la hormona predominante es la progesterona que comenzó a elevarse justo antes de la ovulación, y que es la causante entre otras cosas de que la vulva regrese al tamaño casi normal, y también produce que la hembra deje de aceptar al macho. Esta fase dura 58 días en las hembras preñadas y hasta 100 días en las no preñadas o con seudogestación.

11 Frotis Vaginales Anestro: Periodo de reposo sexual, con frotis vaginales con pocas células, que son además parabasales y aparecen agrupadas, encontramos ausencia de glóbulos rojos y algún leucocito. A nivel ovárico encontramos el crecimiento folicular lento con cuerpos albicans, y niveles básales de progesterona, la duración media de esta fase viene a ser de unos 4 meses. Anestro: Periodo de reposo sexual, con frotis vaginales con pocas células, que son además parabasales y aparecen agrupadas, encontramos ausencia de glóbulos rojos y algún leucocito. A nivel ovárico encontramos el crecimiento folicular lento con cuerpos albicans, y niveles básales de progesterona, la duración media de esta fase viene a ser de unos 4 meses.

12 Determinaciones Hormonales

13 Las fluctuaciones hormonales que se producen en el ciclo estral de la perra nos ayudan a determinar el momento de la ovulación, y por tanto el periodo de máxima fecundidad. Las dos hormonas que presentan mayor utilidad son la progesterona y la LH (hormona luteinizante), ya que los estrógenos y la FSH no tienen utilidad a la hora de predecir la ovulación y periodo fértil ya que declinan sus niveles sanguíneos justo tras la maduración de los folículos ováricos. Las fluctuaciones hormonales que se producen en el ciclo estral de la perra nos ayudan a determinar el momento de la ovulación, y por tanto el periodo de máxima fecundidad. Las dos hormonas que presentan mayor utilidad son la progesterona y la LH (hormona luteinizante), ya que los estrógenos y la FSH no tienen utilidad a la hora de predecir la ovulación y periodo fértil ya que declinan sus niveles sanguíneos justo tras la maduración de los folículos ováricos. A lo largo del ciclo los valores hormonales de LH discurren de forma basal hasta producirse un pico 48 horas antes de la ovulación, así si somos capaces de encontrar el pico hormonal en sangre, podremos predecir con toda seguridad cuando se va a producir la ovulación. El inconveniente de esta determinación hormonal es que el pico de esta hormona es muy rápido, y la vida media en sangre de la LH es muy corta, por lo que tendríamos que sacar sangre dos veces al día para asegurarnos de encontrar este pico, con el consiguiente encarecimiento del proceso y trastorno para el animal y propietario, así pues el uso de esta hormona queda sólo para casos muy concretos. A lo largo del ciclo los valores hormonales de LH discurren de forma basal hasta producirse un pico 48 horas antes de la ovulación, así si somos capaces de encontrar el pico hormonal en sangre, podremos predecir con toda seguridad cuando se va a producir la ovulación. El inconveniente de esta determinación hormonal es que el pico de esta hormona es muy rápido, y la vida media en sangre de la LH es muy corta, por lo que tendríamos que sacar sangre dos veces al día para asegurarnos de encontrar este pico, con el consiguiente encarecimiento del proceso y trastorno para el animal y propietario, así pues el uso de esta hormona queda sólo para casos muy concretos.

14 Determinaciones Hormonales La otra hormona con valor predictivo es la progesterona, su elevación desde niveles basales hasta valores superiores a 10 ng/ml nos ayuda a determinar los mejores momentos para la monta o inseminación. La determinación de progesterona se realiza de forma seriada, un solo valor muchas veces no es útil para hacer el seguimiento, y nos vemos obligados a valorar varias muestras para hacer la curva hormonal. Generalmente se realiza el seguimiento del celo mediante frotis vaginales, y cuando encontramos un 60 – 70 % de células planas o queratinizadas comenzaremos con las determinaciones en sangre cada 24 o 48 horas según el tipo de análisis que realicemos. La otra hormona con valor predictivo es la progesterona, su elevación desde niveles basales hasta valores superiores a 10 ng/ml nos ayuda a determinar los mejores momentos para la monta o inseminación. La determinación de progesterona se realiza de forma seriada, un solo valor muchas veces no es útil para hacer el seguimiento, y nos vemos obligados a valorar varias muestras para hacer la curva hormonal. Generalmente se realiza el seguimiento del celo mediante frotis vaginales, y cuando encontramos un 60 – 70 % de células planas o queratinizadas comenzaremos con las determinaciones en sangre cada 24 o 48 horas según el tipo de análisis que realicemos.

15 Determinaciones Hormonales Es importante diferenciar las dos técnicas existentes para la valoración de la progesterona en sangre: Es importante diferenciar las dos técnicas existentes para la valoración de la progesterona en sangre: RIA: Radio inmuno análisis, se trata del método mas preciso al darnos un valor numérico concreto (método cuantitativo) obtenido mediante la técnica analítica más fiable. Como inconveniente encontramos su precio, dificultad de realización, y que por desgracia no siempre se encuentra disponible, o que cuando disponemos de un laboratorio que lo realiza, este se demora en dar los resultados más tiempo del debido. Su uso se reserva muchas veces a posteriori después de un celo en el que no se ha conseguido una gestación, las muestras obtenidas de suero se pueden almacenar congeladas y enviarse mas tarde para hacer la curva hormonal precisa y ayudarnos a comprender posibles errores. RIA: Radio inmuno análisis, se trata del método mas preciso al darnos un valor numérico concreto (método cuantitativo) obtenido mediante la técnica analítica más fiable. Como inconveniente encontramos su precio, dificultad de realización, y que por desgracia no siempre se encuentra disponible, o que cuando disponemos de un laboratorio que lo realiza, este se demora en dar los resultados más tiempo del debido. Su uso se reserva muchas veces a posteriori después de un celo en el que no se ha conseguido una gestación, las muestras obtenidas de suero se pueden almacenar congeladas y enviarse mas tarde para hacer la curva hormonal precisa y ayudarnos a comprender posibles errores.

16 Determinaciones Hormonales Es importante diferenciar las dos técnicas existentes para la valoración de la progesterona en sangre: Es importante diferenciar las dos técnicas existentes para la valoración de la progesterona en sangre: Enzima inmuno análisis, ELISA se trata de kits menos precisos, más baratos, fácilmente disponibles, y de rápida ejecución. Pueden ser cuantitativos, con mayor precisión, disponibles en los laboratorios, o semicuantitativos que nos dan resultados en rangos de progesterona según la percepción de un color que nos ofrece el kit, tienen como ventaja su rapidez pudiendo realizarse en cualquier clínica, y presentan como inconveniente su menor precisión ya que la intensidad del color que obtenemos como resultado dependerá de la temperatura ambiente, la calidad de la muestra de suero ( que no haya hemólisis, etc. ), este método detecta con mayor eficacia los valores más altos y más bajo Enzima inmuno análisis, ELISA se trata de kits menos precisos, más baratos, fácilmente disponibles, y de rápida ejecución. Pueden ser cuantitativos, con mayor precisión, disponibles en los laboratorios, o semicuantitativos que nos dan resultados en rangos de progesterona según la percepción de un color que nos ofrece el kit, tienen como ventaja su rapidez pudiendo realizarse en cualquier clínica, y presentan como inconveniente su menor precisión ya que la intensidad del color que obtenemos como resultado dependerá de la temperatura ambiente, la calidad de la muestra de suero ( que no haya hemólisis, etc. ), este método detecta con mayor eficacia los valores más altos y más bajo

17 Determinaciones Hormonales

18 Endoscopia La determinación del momento de la ovulación también puede ser estimada por otros métodos complementarios como son los cambios en la mucosa vaginal, así mediante el uso de vaginoscopios o endoscopios podemos evaluar el grado de edema de los pliegues de la mucosa valorando los contornos, color, existencia de fluidos, etc. La determinación del momento de la ovulación también puede ser estimada por otros métodos complementarios como son los cambios en la mucosa vaginal, así mediante el uso de vaginoscopios o endoscopios podemos evaluar el grado de edema de los pliegues de la mucosa valorando los contornos, color, existencia de fluidos, etc. Proestro: encontramos numerosos pliegues, redondeados, de color sonrosado, y con liquido serosanguinolento Proestro: encontramos numerosos pliegues, redondeados, de color sonrosado, y con liquido serosanguinolento Estro disminuye el numero de pliegues y el grado de edema, además los pliegues se van contrayendo y arrugando y disminuye la cantidad de fluidos dando la apariencia de pliegues en concertina o papel crepe que nos indican que nos encontramos en el periodo de fecundación. Estro disminuye el numero de pliegues y el grado de edema, además los pliegues se van contrayendo y arrugando y disminuye la cantidad de fluidos dando la apariencia de pliegues en concertina o papel crepe que nos indican que nos encontramos en el periodo de fecundación. Diestro se aplanan y adelgazan los pliegues, y se visualiza claramente la vascularizacion, apareciendo la mucosa de un color jaspeado con parches rojos y blancos. Este método es también muy eficaz aunque se encuentra poco difundido ya que requiere cierto aparataje y aprendizaje, es fácil de realizar y requiere su repetición cada dos o tres días Diestro se aplanan y adelgazan los pliegues, y se visualiza claramente la vascularizacion, apareciendo la mucosa de un color jaspeado con parches rojos y blancos. Este método es también muy eficaz aunque se encuentra poco difundido ya que requiere cierto aparataje y aprendizaje, es fácil de realizar y requiere su repetición cada dos o tres días

19 Endoscopia

20 Examen ecográfico método disponible desde hace poco al haber mejorado las prestaciones de las sondas del ecógrafo que permiten una mayor resolución y mejor visualización de las estructuras. Debemos realizar ecografías a diario para evaluar el crecimiento folicular, la ovulación y formación de cuerpos luteos. Encontramos ciertas dificultades ya que los folículos ováricos no se colapsan sino que se produce su luteinizacion y es difícil distinguir el folículo del cuerpo luteo, así el hallazgo de líquido libre alrededor de la bolsa ovárica nos indica que la ovulación se produjo unas seis horas antes, así como la desaparición de las áreas hipoecogenicas que representan los folículos. método disponible desde hace poco al haber mejorado las prestaciones de las sondas del ecógrafo que permiten una mayor resolución y mejor visualización de las estructuras. Debemos realizar ecografías a diario para evaluar el crecimiento folicular, la ovulación y formación de cuerpos luteos. Encontramos ciertas dificultades ya que los folículos ováricos no se colapsan sino que se produce su luteinizacion y es difícil distinguir el folículo del cuerpo luteo, así el hallazgo de líquido libre alrededor de la bolsa ovárica nos indica que la ovulación se produjo unas seis horas antes, así como la desaparición de las áreas hipoecogenicas que representan los folículos.

21 Examen ecográfico

22 Sincronización para la fecundación Si nuestra intención es realizar una monta natural o realizar una inseminación con semen fresco, dispondremos de un mayor margen de maniobra ya que la supervivencia de los espermatozoides en este casos dentro del aparato reproductor femenino será de hasta 7 días. La utilidad de la inseminación con semen fresco se basa en su asistencia a la monta, sus indicaciones para realizarla son por incapacidad de copula normal por parte del semental ( edad, ausencia de libido, afección genital o prostática, etc. ), rechazo del acoplamiento por parte de la hembra debido a problemas físicos ( lesiones vertebrales, o del tracto genital como bridas, estenosis ), problemas psíquicos ( perras sumisas, recuerdo de un coito doloroso que puede causar condicionamiento negativo, etc.), o momento inadecuado por mala sincronización del ciclo. Si nuestra intención es realizar una monta natural o realizar una inseminación con semen fresco, dispondremos de un mayor margen de maniobra ya que la supervivencia de los espermatozoides en este casos dentro del aparato reproductor femenino será de hasta 7 días. La utilidad de la inseminación con semen fresco se basa en su asistencia a la monta, sus indicaciones para realizarla son por incapacidad de copula normal por parte del semental ( edad, ausencia de libido, afección genital o prostática, etc. ), rechazo del acoplamiento por parte de la hembra debido a problemas físicos ( lesiones vertebrales, o del tracto genital como bridas, estenosis ), problemas psíquicos ( perras sumisas, recuerdo de un coito doloroso que puede causar condicionamiento negativo, etc.), o momento inadecuado por mala sincronización del ciclo.

23 Sincronización para la fecundación Si nuestra intención es realizar una cubrición con un ejemplar que se encuentra a gran distancia geográfica debemos plantearnos cual es la mejor opción, si el realizar un desplazamiento o importar semen refrigerado. Para ambas opciones el sincronizar y llevar un seguimiento lo mas preciso del ciclo es muy importante, si se va a viajar para poder planear fechas y transportes, y si se va a inseminar para procurar aproximar al máximo la recolección del semen del macho y su transporte a su destino con la inseminación de la hembra. Debemos recordar que la supervivencia del semen refrigerado a 4 ºC es de 3 a 4 días según los medios de conservación que se utilicen. La mayoría emplean sustancias protectora como la yema de huevo o la leche descremada, junto con sustancias tampón como el TRIS y protectores como el glicerol, y algún antibiótico. Si nuestra intención es realizar una cubrición con un ejemplar que se encuentra a gran distancia geográfica debemos plantearnos cual es la mejor opción, si el realizar un desplazamiento o importar semen refrigerado. Para ambas opciones el sincronizar y llevar un seguimiento lo mas preciso del ciclo es muy importante, si se va a viajar para poder planear fechas y transportes, y si se va a inseminar para procurar aproximar al máximo la recolección del semen del macho y su transporte a su destino con la inseminación de la hembra. Debemos recordar que la supervivencia del semen refrigerado a 4 ºC es de 3 a 4 días según los medios de conservación que se utilicen. La mayoría emplean sustancias protectora como la yema de huevo o la leche descremada, junto con sustancias tampón como el TRIS y protectores como el glicerol, y algún antibiótico.

24 Sincronización para la fecundación Existen distintos kits comerciales ( Clone, Mini tub, Symbiotics, etc. ) que con una mínima manipulación del semen permiten su preparación y envío en cajas preparadas con sterifoam o incluso termos con hielo si el desplazamiento es de menor duración. Existen distintos kits comerciales ( Clone, Mini tub, Symbiotics, etc. ) que con una mínima manipulación del semen permiten su preparación y envío en cajas preparadas con sterifoam o incluso termos con hielo si el desplazamiento es de menor duración. La inseminación con semen refrigerado aparte de ser útil cuando hay un alejamiento de los reproductores, o cuando se quiere evitar costosos desplazamientos al dueño de la perra, también nos permite realizar varias inseminaciones con un solo eyaculado mediante la adición de los diluyentes, o concentrar el semen de un perro con problemas de oligoespermia (baja concentración seminal). La inseminación con semen refrigerado aparte de ser útil cuando hay un alejamiento de los reproductores, o cuando se quiere evitar costosos desplazamientos al dueño de la perra, también nos permite realizar varias inseminaciones con un solo eyaculado mediante la adición de los diluyentes, o concentrar el semen de un perro con problemas de oligoespermia (baja concentración seminal).

25 Contrastacion Espermatica Sea cual sea la el tipo de inseminación que se va a efectuar, debemos proceder a valorar y contrastar el eyaculado mediante la realización de un espermiograma, en el observaremos la concentración espermática, movilidad, porcentaje de vivos y muertos con el uso de distintas tinciones, citología para ver la presencia de glóbulos rojos que indicarían hemorragias, glóbulos blancos que indicarían infecciones, o células anormales que indicarían la presencia de inflamaciones, tumores, etc. Además observaremos la morfología de los espermatozoides para estudiar anomalías de cabeza, cuello, parte intermedia, acrosoma, y cola. Sea cual sea la el tipo de inseminación que se va a efectuar, debemos proceder a valorar y contrastar el eyaculado mediante la realización de un espermiograma, en el observaremos la concentración espermática, movilidad, porcentaje de vivos y muertos con el uso de distintas tinciones, citología para ver la presencia de glóbulos rojos que indicarían hemorragias, glóbulos blancos que indicarían infecciones, o células anormales que indicarían la presencia de inflamaciones, tumores, etc. Además observaremos la morfología de los espermatozoides para estudiar anomalías de cabeza, cuello, parte intermedia, acrosoma, y cola.

26 Contrastacion Espermatica

27 Inseminacion La técnica para la inseminación con semen fresco o refrigerado es la misma, consiste en el cateterismo del cuello del útero mediante una sonda y la deposición intravaginal del semen. La técnica para la inseminación con semen fresco o refrigerado es la misma, consiste en el cateterismo del cuello del útero mediante una sonda y la deposición intravaginal del semen.

28 Inseminacion La diferencia fundamental del uso del semen congelado radica en que la sincronización entre la ovulación y la inseminación debe ser máxima, ya que la supervivencia de este tipo de semen es de solo 24 horas y la movilidad espermática es algo menor, de ahí que realicemos todo tipo de pruebas en la hembra para asegurar al máximo la determinación del momento fértil. Otra característica importante en el caso del semen congelado es que la inseminación debe ser intrauterina, no siendo valida la intavaginal. La diferencia fundamental del uso del semen congelado radica en que la sincronización entre la ovulación y la inseminación debe ser máxima, ya que la supervivencia de este tipo de semen es de solo 24 horas y la movilidad espermática es algo menor, de ahí que realicemos todo tipo de pruebas en la hembra para asegurar al máximo la determinación del momento fértil. Otra característica importante en el caso del semen congelado es que la inseminación debe ser intrauterina, no siendo valida la intavaginal.

29 Inseminacion

30 Inseminacion Inseminación intrauterina mediante laparotomía: se trata de la técnica mas usada en Estados Unidos, se considera poco ética en Europa ya que se trata de un procedimiento invasivo de tipo quirúrgico, con los riesgos que supone semejante intervención. Inseminación intrauterina mediante laparotomía: se trata de la técnica mas usada en Estados Unidos, se considera poco ética en Europa ya que se trata de un procedimiento invasivo de tipo quirúrgico, con los riesgos que supone semejante intervención.


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