ESTUDIO MOLECULAR EN PROCESOS DE RIESGO TROMBOTICO Amparo Benlloch Salcedo Mercedes Egea Rico Rosa Collado Nieto David Ivars Santacreu Maria Ortuño Peñalver Juana Serrallé Rodríguez Francisca Romero Lucas Consorcio Hospital General Universitario de Valencia

INTRODUCCIÓN La trombofilia es una predisposición para padecer trombosis. En cerca del 40 % de los casos hay una causa hereditaria que por sí sola puede no desembocar en un cuadro tromboembólico. Sin embargo, cuando hay otros factores de riesgo combinados, como una inmovilización prolongada, una intervención quirúrgica, un embarazo, el uso de anticonceptivos orales o una terapia hormonal sustitutiva, existe un efecto aditivo que puede desencadenar un proceso trombótico o tromboembólico. La trombofilia se ha asociado a abortos de repetición, por trombosis de la microvasculatura uteroplacentaria e hipoperfusión, a infertilidad y a diversas complicaciones obstétricas como preclampsia, desprendimiento prematuro de placenta o escaso desarrollo intrauterino del feto.

INTRODUCCIÓN La mutación del Factor II (FII) o Protrombina (20210G>A) se asocia a un incremento de los niveles plasmáticos de Protrombina. Por su parte, la mutación del Factor V (FV) Leiden (1691G>A) la hace resistente a la acción inhibidora de la Proteína C Activada. Las mutaciones FII (20210G>A) y FV Leiden están presentes en el 2% y 5% respectivamente de la población general.

INTRODUCCIÓN Gen FV Gen FII

OBJETIVOS (I) Analizar incidencia de las mutaciones del FII y FVL en diferentes grupos de riesgo Procesos trombóticos Estudios Familiares Procesos ginecológicos Tratamiento anticonceptivo SMP

OBJETIVOS (II) Comparación entre dos sistemas de análisis en nuestra unidad Tiras reactivas Xpert HemosIL Factor II & Factor V

MATERIAL Y METODO Periodo comprendido entre: Marzo 2007 Mayo 2013

MATERIAL Y METODO Hasta Diciembre de 2011 Tiras reactivas

A partir de sangre periférica Tiras reactivas A partir de sangre periférica

Tiras reactivas Obtención del ADN

Amplificación del gen (PCR) Tiras reactivas Amplificación del gen (PCR)

Tiras reactivas Hibridación mediante tiras de Nitrocelulosa

Detección de las mutaciones en las tiras Tiras reactivas Detección de las mutaciones en las tiras Tira del paciente Decoder

MATERIAL Y METODO Desde 2011 a 2013 Xpert HemosIL Factor II & Factor V

Sistema automatizado que integra: Purificación de la muestra. Xpert HemosIL Factor II & Factor V Sistema automatizado que integra: Purificación de la muestra. Ampliación de los ácidos nucleicos Detección de la secuencia objetivo en sangre total, utilizando la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) en tiempo real.

Xpert HemosIL Factor II & Factor V

Xpert HemosIL Factor II & Factor V

Xpert HemosIL Factor II & Factor V

Xpert HemosIL Factor II & Factor V

Xpert HemosIL Factor II & Factor V

Xpert HemosIL Factor II & Factor V

MATERIAL Y METODO Población estudiada: 740 pacientes

MATERIAL Y METODO Durante el año 2010, se realizaron determinaciones en paralelo. CONFIRMATORIO

MATERIAL Y METODO Procesos trombóticos 442 Estudios familiares 110 Procesos ginecológicos 70 Tratamientos anticonceptivos 4 Síndromes mieloproliferativos 114

RESULTADOS Gen del factor II

RESULTADOS Gen del factor V Leiden

RESULTADOS Alteración en ambos genes Casos: 3 0,41%

RESULTADOS Mutacion del Gen del factor II, según grupos de riesgo

RESULTADOS Mutacion del Gen del factor V Leiden, según grupos de riesgo

Fallo en el instrumento RESULTADOS Repeticiones Tiras reactivas Xpert HemosIL Factor II & Factor V 11 1 Fallo en la tira Fallo en el instrumento

CONCLUSIONES La incidencia de mutaciones del FII (11,49%) y del FVL (10,41%) durante el periodo estudiado en nuestro centro es similar al publicado en la literatura. En el grupo de tratamiento con anticoncepción no se encontraron mutaciones en ninguno de los dos genes, lo cual cuestiona la utilidad del análisis en este grupo.

CONCLUSIONES El sistema automatizado es la técnica de elección para el estudio de mutaciones relacionadas con la trombofilia ya que presenta una serie de ventajas frente al sistema de detección por tiras de nitrocelulosa, entre las que destaca:

CONCLUSIONES Mayor sensibilidad Mayor trazabilidad de la técnica Menor manipulación técnica. Menor riesgo de contaminación Rapidez

Gracias