Análisis genético molecular del gen PLP en pacientes con paraplejia espástica M. Muñoz Calero, P. Martínez-Montero, M.A. Sanz Rodríguez, G. Hernández Poveda, C. Martínez Laperche, M. Esteso Perona, L. Roman, J. Molano Mateos. Unidad de Genética Molecular, Instituto de Genética Médica y Molecular. Hospital Universitario “La Paz”. Madrid Introducción: La enfermedad de Pelizaeus-Merzbacher (PMD) constituye una “rara” leucodistrofia hereditaria secundaria a una deficiencia en la proteolipoproteína (Plp) con un patrón recesivo ligado al cromosoma X. La duplicación del gen PLP es la mutación más frecuente siendo el resto delecciones y mutaciones puntuales. La enfermedad cursa con una severa hipomielinización estrictamente limitada al sistema nervioso central (SNC). Se definen dos subtipos: la forma clásica (tipo I) y la connatal (tipo II), que se diferencian tanto en el grado de afectación como en la progresión de la enfermedad y la supervivencia del paciente, siendo la segunda la forma más grave. La proteolipoproteína (Plp) es la principal proteína que forma parte de la mielina del SNC. Esta y su isoforma, la DM20, suponen el 50% de las proteínas totales de la vaina de mielina del SNC (sin embargo Plp sólo se encuentra en un 1% en el sistema nervioso periférico). La función de Plp es contribuir al desarrollo de los oligodendrocitos y al mantenimiento de la integridad axonal. El gen que codifica esta proteína se encuentra en el cromosoma X (Xq21.3-q22) y contiene 7 exones. La Plp humana posee 276 aminoácidos con 4 dominios hidrófobos y se conserva invariable en las distintas especies. Material y Métodos: Análisis de la duplicación del gen PLP por MLPA Secuenciación de los exones del gen PLP en los casos donde no encontramos duplicación Resultados: Se ha analizado el gen PLP en 54 varones con signos y síntomas sugestivos de padecer PMD y a sus familiares. Tras el análisis genético, hemos confirmado que 13 pacientes son portadores de mutaciones en este gen. De ellos, 7 son portadores de una duplicación del gen, 1 es portador de una deleción de gran tamaño que se extiende desde un punto no determinado en la región 5’ del gen hasta el exón 4 y 1 paciente es portador de una deleción de 3 nucleótidos en el exón 3 (p.F79del). 3 pacientes eran portadores de una mutación missense. En seis de los 13 pacientes portadores de mutación en el gen PLP, la madre es portadora de la mutación. En cinco pacientes se trata de una mutación de novo. En 2 de los casos no se dispuso de DNA de la madre para el análisis. Conclusiones: Paciente Edad DiagnósticoMadreTipo de MutaciónReferencia PM- 42 añosPortadoraDuplicación del gen PLP PM- 254 añosPortadoraDuplicación del gen PLP PM- 28 (*)4 añosPortadoraMutación L223F (*)Este estudio PM- 394 añosNo PortadoraDeleción del codon 79 del Exon 3Este estudio PM- 439 añosSin DatosDeleción de gran tamañoEste estudio PM- 532 mesesNo PortadoraDuplicación del gen PLP PM- 571 añoNo PortadoraDuplicación del gen PLP PM- 671 añoPortadoraDuplicación del gen PLP PM- 689 añosPortadoraDuplicación del gen PLP PM- 714 mesesNo PortadoraMutación C32YHübner et al, 2005 PM- 101Sin DatosNo PortadoraDuplicación del gen PLP PM- 105Sin Datos Mutación L30REste estudio PM mesesPortadoraMutación G73RDoll et al Se analizaron DNA´s de 54 pacientes varones con signos y síntomas sugestivos de padecer PMD y a sus familiares. A todos ellos se les realizó la técnica MLPA (Multiplex Ligation Probe Amplification) para determinar si existía duplicación del gen PLP. En los casos donde no se encontró duplicación se secuenció cada uno de los 7 exones. Mutaciones encontradas en el gen PLP Los resultados obtenidos en nuestro laboratorio coinciden con los encontrados en otras series ( Inoue et al ). Encontramos que aproximadamente en un 60% de los pacientes son portadores de una duplicación del gen siendo el resto deleciones o mutaciones puntuales. En la PMD es importante poder establecer un diagnóstico precoz ya que no existen marcadores bioquímicos específicos y es difícil evaluar defectos en la mielinización en los primeros meses de vida. El diagnóstico molecular es especialmente relevante en los casos en los que la presentación clínica o los hallazgos en la neuroimagen sean equívocos. Además permite la identificación de madres portadoras para poder establecer el consejo genético y si procede el diagnóstico prenatal en caso de nuevo embarazo. Inoue et al Am. J. Hum. Genet. 71:838–853, 2002 G-->A Gly73Arg Agradecemos la colaboración de nuestros compañeros clínicos y de los pacientes y familiares. Exón 3 del gen PLP de la madre del paciente PM-106 (*) Madre de un varón portador de una mutación puntual diagnosticado previamente en otro hospital.