EVALUACIÓN DE LA HEMOSTASIA

RECUENTO DE PLAQUETAS

METODOS Manual Automatizado

RECUENTO MANUAL DE PLAQUETAS

RECUENTO MANUAL DE PLAQUETAS Método de referencia. Contraste de fase. Muy adherentes. Pequeñas.

PROCEDIMIENTO Dilución 1:100. Dejar 15’ en cámara húmeda. Objetivo de 40x. Contar cuadro del centro: 1mm2. Se deben contar ambos lados de la cámara Cálculo no x 10 x 100. Verificación con el F.S.P.

ERRORES Mezcla inadecuada Muestra defectuosa. Suciedad de instrumentos. Recuentos de plaquetas bajos: menor dilución. Recuentos de plaquetas altos: mayor dilución. Satelitosis plaquetaria. Citrato dilución 1.1

SATELITOSIS PLAQUETARIA

EXÁMEN MICROSCÓPICO Aumento de 10X. Aumento de 40X. Aumento de 100X.

RECUENTO PLAQUETARIO EN EL F.S.P. Objetivo de inmersión. 10 campos. Promedio de plaquetas x 20000. Anemia o eritrocitosis. NO de plaquetas X RTO de eritrocitos 200

RECUENTO PLAQUETARIO AUTOMATIZADO Exactitud Precisión Volumen mínimo. Diagnóstico y tto oportuno

FUNCION PLAQUETARIA Pruebas Recuento de plaquetas. Revisión del extendido de sangre.

CUANDO SE DEBEN REALIZAR Síntomas hemorrágicos Petequias, epistaxis con recuento de plaquetas normales

¿PORQUE SE DEBEN REALIZAR? Trastornos hereditarios – raros Trastornos adquiridos – comunes

TRASTORNOS ADQUIRIDOS Enfermedad hepática, renal Síndromes mieloproliferativos Síndromes mielodisplásicos. Mieloma múltiple. Uremia. Autoinmunidad. Anemia. Tratamiento con fármacos

MORFOLOGIA PLAQUETARIA Plaquetas grandes grises. Intercambio plaquetario rápido. Plaquetas gigantes o con forma bizarra.

TIEMPO DE SANGRIA Diagnostica trastornos de sangrado. Evalúa la adhesión y agregación. Se prolonga en enfermedades vasculares.

TIEMPO DE SANGRIA Tiempo que tarda en detenerse la hemorragia de un corte estándar en profundidad y longitud en la piel. DUKE (1912) IVY (1941)

TIEMPO DE SANGRIA (Lóbulo de la oreja) Presión intracapilar. Espesor cutáneo. Tamaño y profundidad de la herida

TIEMPO DE SANGRIA ESTANDARIZADO

TIEMPO DE SANGRIA RESULTADOS/INTERPRETACION Normal hasta 8 minutos. Un resultado anormal debe ser repetido. Al continuar la hemorragia mas de 10’ informar mayor de 10’. Suspender la prueba Advertir la formación de cicratiz

TIEMPO DE SANGRIA PROLONGADO Trombocitopenia. Enfermedad de von Willebrand. Trombastenia de Glanzman. Síndrome de Bernard Soulier. Enfermedad de almacenaje.

TIEMPO DE SANGRIA PROLONGADO Esenciales el fibrinogeno y el FV. Dificultades de ellos T.S.P. Fármacos que contienen aspirina

RETRACCION DEL COAGULO Da información sobre el numero y la función plaquetaria. Cuando el coagulo se retrae, el suero es liberado y se puede medir el grado de retracción del coagulo

RESULTADOS/ INTERPRETACION Valor de 40 – 65% Valores anormales en: Trombastenia de Glanzmann. Trombocitopenia. Disfibrinogenemia. Hipofibrinogenemia.

HEMOSTASIA SECUNDARIA PRUEBAS PARA EVALUAR HEMOSTASIA SECUNDARIA

MUESTRA Sangre total venosa. Aguja máximo calibre 21. Jeringa o tubo al vacío. Plástico o recubierto con silicona. Evitar el uso del torniquete.

INFORMACION EN CADA TUBO DE MUESTRA Nombre completo del paciente. Número de identificación del paciente. Fecha de recolección. Hora de recolección (exacta). Iniciales o código de recolección.

ORDEN DE EXTRACCIÓN (NCCLS-1988) Hemocultivo Tubo sin aditivos (tapón rojo) Tubo para coagulación (tapón celeste). Otros tubos con aditivos: Tubo con gel o separador de suero (tapón dorado). Tubo con heparina (tapón verde). Tubo con edta (tapón lavanda). Tubo con oxalato de potasio o floruro de sodio (tapón gris).

TUBOS PARA LA RECOLECCION Tubos estériles con tapón azul. Citrato de sodio 0,105-0,109 m (3.2%). Relación sangre entera a anticoagulan- te: 9:1 El citrato evita la coagulación al unirse con el calcio. Relación citrato en sangre entera: 10,5-10,9 mmol/L

NUEVAS MUESTRAS

CORRECCIÓN DEL VOLUMEN DE CITRATO En eritrocitosis, disminuye el volumen plasmático con respecto a la sangre entera elevándose la relación anticoagulante – plasma prolongándose falsamente los tiempos. C= (1.85x10-3).(100-H)V C= Vol citrato en mL. V=Vol sangre entera/solución de citrato en mL H=Hematocrito.

TANSPORTE Y TO ALMACENAMIENTO Mantenerlas tapadas y en posición vertical Entre 18° - 24°c o a 2-4°C transporte Conservación a menos de 4°C.

PLASMA DEFICIENTE EN PLAQUETAS - PDP Plasma con recuento de plaquetas menor a 10x103 /uL. Centrifugar a 1500g durante 15’ tapados.

CONSERVACIÓN POR PERIODOS PROLONGADOS Transferir el PDP con pipeta plástica a un tubo seco, tapado. Congelar a -20°C/2 semanas o -70°C /6 meses. Descongelar a 37°C rápidamente. Procesar durante la hora siguiente. No recongelar. Hasta 2h después del descongelamiento entre 2-4°.

REACTIVOS Lábiles. Reconstituir según instrucciones del fabricante. Atemperar 30’ a T° ambiente. Agregar el agua, mezclar por rotación 45’’. Dejar en reposo 30’. Utilizar en las mediciones y llevar a refrigeración.

PREPARACIÓN DEL POOL NORMAL

Tiempo de coagulación de LEE-WHITE, 1913. DETECCIÓN SISTEMÁTICA DE PROCOAGULANTES PLASMATICOS BASADA EN EL COÁGULO Tiempo de coagulación de LEE-WHITE, 1913. Primer procedimiento in vitro. El intervalo desde la iniciación de la coagulación hasta la formación del coágulo visible.

TIEMPO DE PROTROMBINA (PT) TROMBOPLASTINA: FACTOR TISULAR RECOMBINANTE SUSPENDIDO EN FOSFOLÍPIDOS MEZCLADOS CON UNA SOLUCIÓN DE CLORURO DE Ca 0,025M AMORTIGUADA. Refleja la eficacia global de la vía extrínseca. Es sensible a cambios en los factores V, VII y X. Poco apropiada para detectar pequeños cambios en los niveles de fib. Para controlar la anticoagulación por vía oral.

INFORME DE RESULTADOS A la décima de segundo más próxima. Informando contra el resultado del pool. Si se hace por duplicado se promedia.

INR Relación internacional normalizada. Pacientes con anticoagulación oral continua. ISI: índice de sensibilidad internacio- nal. INR= PT del paciente ISI PT pool

LIMITES TERAPEUTICOS Y UTILIDAD CLÍNICA Monitoriza efecto del tto con anticoagulan- tes orales. Los anticoagulantes orales impiden la pro- pagación de coágulo en: Trombosis venosas profundas. Embolias pulmonares. Enfermedad cardiovascular. Accidente cerebro-vascular.

USO COMO PRUEBA DIAGNÓSTICA Ante cualquier sospecha de coagulopatía. Afectan la actividad de factor VII. CID. Enfermedad hepática. Enfermedad renal. Deficiencia de vitamina k (desnutri- ción grave, uso de antibioticos, sin- dromes de mala absorción). Deficiencias congenitas de: X - VII, V, Protrombina y Fib.

TIEMPO DE TROMBOPLASTINA PARCIAL ACTIVADA (APTT) Se realiza para: Monitorizar los efectos del tto con heparina. Detectar anticoagulantes circulantes. Detectar deficiencias congenitas y/o adquiridas de factor VIII, IX, XI y XII Reactivo: contiene un activador particulado con carga negativa como caolín, ácido elágico o célite

INFORME DE LOS RESULTADOS Resultados en seg. Pool procesado a la par de la muestra. Si se prueba por duplicado, hacer promedio.

LIMITES TERAPEÚTICOS Y UTILIDAD CLÍNICA Manejo del tto con heparina no fraccionada. La heparina no fraccionada evita; la propagación del trombo luego de: Trombosis de las venas profundas. Embolia pulmonar. Trombosis coronaria. Control constante.

USO COMO PRUEBA DIAGNÓSTICA Sospecha de un trastorno hemorrágico Trombosis recurrente. Presencia de anticoagulante lúpico. Deficiencia de : protrombina, V, VIII, IX, X, XI, XII, Fib. Inhibidor de factor especifico. Cid y deficiencia de vitamina K.

TIEMPO DE TROMBINA (TT) REACTIVO: TROMBINA BOVINA CON 2 UNIDADES NIH/ml QUE CLIVA LOS FIBRINOPEPTIDOS A Y B A PARTIR DEL FIBRINÓGENO PLASMÁTICO PARA FORMAR UN POLÍMERO DETECTABLE.

INFORME DE RESULTADOS. Informe en seg. Contra un pool normal. Limites 15 – 20’’.

UTILIDAD CLINICA Esta prolongado cuando: Nivel de Fib menor a 100mg/dl. Presencia de heparina. PDF. Disfibrinogenemia.

INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS PRUEBAS DE COAGULACIÓN

ANORMALIDADES EN LA HEMOSTASIA SECUNDARIA TRASTORNOS HEMORRAGICOS GRAVES

TRASTORNOS HEMORRAGICOS Historia clínica precisa Examen clínico minucioso Estudios de la familia

TP PROLONGADO Deficiencia congénita de factores: V, VII, X (20 – 65%), 1 – 3” Deficiencia de factor I (-100mg%) Deficiencia de factor II (10%) Enfermedades hepáticas Ictericia obstructiva CID y disproteinemias

APTT PROLONGADO Todos los factores excepto VII y XIII No sensible a defectos leves de factor Se detecta anormalidad cuando el F VIII es menor al 35%

PT ANORMAL Y APTT NORMAL Deficiencia de factor VII

PT Y APTT ANORMALES Contaminación con heparina Defecto del factor II Inhibidores circulantes Deficiencia de fibrinógeno Deficiencia de factor X Hepatopatía

PT NORMAL Y APTT ANORMAL Déficit de: XII, XI, IX, VIII, precalicreina, CAMP Anticoagulante lúpico Inhibidor de factor VIII

TT PROLONGADO Deficiencia de fibrinógeno Disfibrinogenemia Inhibidores circulantes – heparina - plasmina - PDF

TRASTORNOS HEMORRAGICOS ADQUIRIDOS Enfermedad hepática Insuficiencia renal Deficiencia de vitamina K Hemofilia adquirida

PRUEBAS PARA FIBRINÓLISIS

PRODUCTOS DE DEGRADACION DE LA FIBRINA -PDF Su detección en el plasma del paciente indica aumento de la actividad fibrinolítica Se mezclan partículas de látex recubiertas con Ac PDF monoclonales antihumanos con la muestra del paciente V R: menos de 5ug/mL Se aumentan en CID, enfermedades renales, cardiacas, complicaciones quirúrgicas, carcinoma, infarto del miocardio, embolia pulmonar, trombosis venosa profunda y estados de eclampsia

DIMERO D - DD Es un marcador específico de la fibrinólisis que implica la degradación por la plasmina de la fibrina Se mezclan partículas de látex recubiertas con Ac monoclonales dirigidos al DD con una dilución del plasma del paciente y si hay DD se produce aglutinación VR: menos de 0,5 ug/mL Se encuentran en CID, embolia pulmonar, trombosis venosa profunda, tromboembolia pulmonar y anemia de células falciformes

LISIS DEL COAGULO DE EUGLOBINA Es útil en la detección del aumento de la actividad fibrinolítica En personas normales el tiempo requerido para la lisis completa del coagulo de euglobina es superior a dos horas, Lisis menores de dos horas indican aumento de la actividad fibrinolítica y se asocian a CID, enfermedades hepáticas, cirugías, ciertas malignidades y mujeres qu reciben anticonceptivos orales o durante la menstruación

DIAGNÓSTICO DE LOS ESTADOS TROMBOTICOS