ESTUDIO DE PERFILES DE EXPRESIÓN GLOBAL EN MUESTRAS DE CARCINOMA DE PULMÓN NO MICROCÍTICO (CPNM) DE PACIENTES SOMETIDOS A CIRUGÍA COMO PREDICTOR DE RESPUESTA A PEMETREXED. J. de Castro1,3, R. Machado-Pinilla2,3, C. Belda-Iniesta1,3,V. Rodríguez-Fanjul2,3, I. Ibáñez de Caceres2,3, E. Casado1,3, P. Cejas1,3, L. Paz-Ares4, M. González-Barón1,3, R. Perona2,3 (1) S. Oncología Médica, Hospital Universitario La Paz; (2) Instituto de Investigaciones Biomédicas (IIB), CSIC, UAM; (3) Unidad de Oncología Traslacional, La Paz-IIB; (4) S. Oncología Médica, Hospital Universitario 12 de Octubre

Pemetrexed (Alimta®) Introducción Antifolato Objetivo - Establecer sensibilidad/resistencia a Pemetrexed - Determinar un patrón de genes implicados en sensibilidad/resistencia a Pemetrexed Antifolato Multi-diana TS 5-FU, Tomudex® dUMP dTMP DNA 5,10-CH2-THF 10-CHO-THF DHF NADPH GARFT DHFR PRPP Methotrexate THF NADP+ GAR fGAR AMP, GMP DNA, RNA TS: thymidylate synthase DHFR: dihydrofolate reductase GARFT: glycinamide ribonucleotide formyltransferase

Material y métodos (I): Ensayo in vitro (II) Material en fresco (I) Material congelado (RNA) Muestra quirúrgica (CPNM estadios I-III) medio de cultivo (RPMI/HAMF-12 plus 10% FCS) Disrupción celular AGAR Células + medio de cultivo + Pemetrexed Cuadruplicado/5 dosis, 8 días mg/ml Pemetrexed Viabilidad tumoral Ensayo colorimétrico (alamar blue)

Material y métodos (II): Determinación de genes implicados 2 1 Número total de muestras 120 3 2 3 Validación por RT-PCR validación de datos del Array Arrays Codelink de Genoma humano completo por duplicado IVD RNA --- cDNA Diseño de un patrón predictivo con utilidad clínica Estudio de sensibilidad a Pemetrexed 58 pacientes 1. Hibridación en una plataforma Codelink de genoma completo. 2. Análisis de expresión de codelink (software). 3. Software BRB array Seleccionar genes con cambios en sus niveles de expresión de al menos dos veces sobre los valores medios 4. Análisis de comparación de clase

Resultados (I) 1. Viabilidad de muestras tumorales Clasificación de resistencia Cuando la IC50 no fue alcanzada a la máxima dosis de Pemetrexed usada 22 Sensibles 58 muestras quirúrgicas 36 Resistentes 2. Expresión de genes Arrays en plataforma codelink Análisis de comparación de clase (p<0.001) identificó 189 genes diferencialmente expresados entre los grupos

Resultados (II) 1. Ensayo de sensibilidad 58 muestras quirúrgicas 22 Sensibles 36 Resistentes 2. Clustering jerárquico no supervisado 22 clasificados: 5 R 17 S 22 S (77% especificidad) (84%sensibilidad) 36 clasificados: 32 R 4 S 36 R (87% especificidad) Resistentes

Resultados (III): análisis ontológico de genes Receptor de crecimiento Vías de señalización Factores de transcripción Transportadores de Hidrógeno Reguladores del metabolismo

Conclusiones Identificar un perfil de expresión génica que puede definir la sensibilidad/resistencia a Pemetrexed 2. El perfil de expresión génica diferencial debe ser evaluado en ensayos clínicos prospectivos que definan su posible aplicación clínica - eficacia de pemetrexed en enfermedad avanzada - eficacia de pemetrexed como tratamiento adyuvante

UNIDAD DE ONCOLOGÍA TRASLACIONAL UAM/CSIC Hospital La Paz Oncología Médica Cristobal Belda Iniesta Enrique Casado Javier de Castro Carpeño Paloma Cejas Manuel Gonzalez Barón Anatomía Patológica Manuel Nistal Cirugía Torácica Joaquín Sánchez García-Girón Instituto Investigaciones Biomédicas Inmaculada Ibáñez de Cáceres Rosario Machado Pinilla Vanessa Rodriguez Fanjul Rosario Perona Hospital 12 de Octubre Oncología Médica Luis Paz-Ares Anatomía Patológica Fernándo López-Ríos