VECTORES In ingeniería genética, un vector es un medio para transferir información genética entre organismos. Asegura la replicación (amplificación) y aislamiento del fragmento clonado

Propiedades de un vector de clonamiento Pequeño, pero suficientemente grande como para transportar el gen de interés en forma estable. Circular (cerrado) es menos susceptible a degradación. Marcador de selección Sitios únicos para ER Origen de replicación compatible con el huésped

Vectores bacterianos Plasmidios (clonar hasta 10 kb) Bacteriófagos y derivados (clonar hasta 30 kb) Bacteriófago : DNA en la partícula viral es lineal, doble hebra, aprox 48 kb. Al infectar bacterias se circulariza. Cosmidios: plasmidio con extremos cos de  (hasta 45kb). Cromosoma Artificial de Bacteria (BAC), vector basado en un plasmidio de fertilidad F. Para clonar en bacterias, generalmente E. coli. Bajo número de copias, estable (clonar hasta 350.000 pb)

Sistemas alternativos de vectores   Approximate maximum length of DNA that can be cloned into vectors Vector type Cloned DNA (kb) Plasmid 20 lambda phage 25 Cosmid 45 P1 phage* 100 BAC (bacterial artificial chromosome) 300 YAC (yeast artificial chromosome 1000

Dos vectores de bacterias famosos Plasmidios artificiales, creados a partir de regiones de plasmidios naturales

Selección de clones recombinantes por inactivación de la resistencia a antibióticos 1. Clonamiento por inserción inactivante 2. Replica Plating para identificación de recombinantes

Selección de clones recombinantes por Test de complementación 

Para poder usar el sistema de selección por complementación alfa el genoma de la E. coli huésped debe contener el alelo delta M15lacZ. Resultados posibles

Vectores  de inserción

Vectores  de reemplazo

Bacteriófago lambda como vector de clonamiento Extracto con proteínas para empaquetar virus Concatémeros de  Virus completo, se usa para infectar bacterias huésped

Cosmidios: Plasmidio con los extremos cos de : clonamiento de fragmentos de 35-45 kb

Cromosomas artificiales de bacterias: BACs BACs son similares a plasmidios Contienen un Ori y los genes para las proteínas que se unen al origen, necesarias para replicación Son derivados de un gran plasmidio natural, el factor F Bajo nº de copias (1-2 copias/cel) Muy estables

Vectores de clonamiento en levaduras Integran por recombinación con el genoma de la levadura. Una copia/genoma Vectores de clonamiento en levaduras Replicación episomal, autónoma. 1- 40 copias/genoma Replicación autónoma. Hasta 100 copias/genoma Se comportan como minicromosomas 1 copia/genoma

YAC: cromosoma artificial de levadura